一种活检肠道肿瘤类器官的培养、传代、冻存和复苏方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种活检肠道肿瘤类器官的培养、传代、冻存和复苏方法及其应用方法，通过对少量的活检肿瘤组织进行培养及传代，可培养出与其来源癌组织遗传背景高度一致，其遗传突变与对应组织标本中的突变高度匹配的类器官，同时培养的类器官还可以冻存和复苏，培养和药效测试时间较短，培养成本较PDTX模型经济，建立肿瘤类器官标本库可以实现高通量筛选药物，培养的类器官可以测试样本射线敏感性等等，应用广泛。

A method of cultivation, passage, cryopreservation and resuscitation of intestinal tumors by biopsy and its application

The present invention relates to a method for cultivation, passage, cryopreservation and resuscitation of intestinal tumour-like organs for biopsy and its application. By culturing and passing on a small amount of biopsy tumour tissues, the tumour-like organs which are highly consistent with the genetic background of the tumour-like tissues from which they originated, and whose genetic mutations are highly matched with those in the corresponding tissue specimens, can also be frozen and preserved. Resuscitation, culture and pharmacodynamics testing are relatively short, and the cost of culture is less than that of PDTX model. The establishment of tumor organ specimen bank can achieve high throughput screening of drugs, and the cultured organs can test the radiosensitivity of samples, etc. It is widely used.

【技术实现步骤摘要】
一种活检肠道肿瘤类器官的培养、传代、冻存和复苏方法及其应用
本专利技术涉及肿瘤类器官培养的方法，具体是一种活检肠道肿瘤类器官的培养、传代、冻存和复苏方法及其应用。
技术介绍
在肿瘤研究中，特别是在新型药物的筛选，个体化治疗的评估研究上PDTX模型(人来源肿瘤异种移植于免疫缺陷小鼠模型)取得一定的成效，移植肿瘤也保留了原代肿瘤的分化程度、形态特征、结构特点以及分子生物学基本特性和肿瘤微环境。但是，这种模型也有它的缺陷之处，PDTX模型虽然模拟了原代肿瘤的生物学特性，能为肿瘤的研究提供体内模拟环境，但这种模型的建立毕竟不是完全和原代肿瘤相同，而且成瘤模型时间长，建立模型相对困难，免疫缺陷动物成本高，同时也存在一定的伦理问题。PDTX模型，在肝癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌和神经胶质瘤的研究中均有报道。但我们可以看到，这种肿瘤移植模型的建立是比较困难的，特别是一些肿瘤位置例如消化道肿瘤，因其原位处于消化道腔内，其移植的成活率和成功率都是很低的，因此阻碍了其广泛应用，只限制于某些特殊肿瘤。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种活检肠道肿瘤类器官的培养、传代、冻存和复苏方法及其应用，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种活检肠道肿瘤类器官的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取米粒至黄豆大小的活检肿瘤组织并置于冰PBS缓冲液中；2)采用预冷5‑10分钟的PBS缓冲液多次冲洗干净活检肿瘤组织；3)无菌切碎肿瘤组织并移入预热至37℃的酶消化液中，震荡消化30‑60分钟；4)消化完毕后使用移液枪反复吹打直至肿瘤碎片消失，并以100g‑300g转速离心5分钟；5)去除上清，60gx5分钟反复离心多次；6)去除上清，加10m1预冷PBS缓冲液，取10μl显微镜下观察计数隐窝数量，100‑300g5分钟离心，去干净上清，以100‑300个隐窝/50μl Matrigel比例重悬3D培养类器官。

【技术特征摘要】
1.一种活检肠道肿瘤类器官的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取米粒至黄豆大小的活检肿瘤组织并置于冰PBS缓冲液中；2)采用预冷5-10分钟的PBS缓冲液多次冲洗干净活检肿瘤组织；3)无菌切碎肿瘤组织并移入预热至37℃的酶消化液中，震荡消化30-60分钟；4)消化完毕后使用移液枪反复吹打直至肿瘤碎片消失，并以100g-300g转速离心5分钟；5)去除上清，60gx5分钟反复离心多次；6)去除上清，加10m1预冷PBS缓冲液，取10μl显微镜下观察计数隐窝数量，100-300g5分钟离心，去干净上清，以100-300个隐窝/50μlMatrigel比例重悬3D培养类器官。2.根据权利要求1所述的一种活检肠道肿瘤类器官的培养方法，其特征在于：所述PBS缓冲液为penicillin100IU/ml+streptomycin100μg/ml混合制成，酶消化液为1％FBSDMEM+CollagenaseIV300-600IU/ml+Ly276325-20μM混合制成。3.一种活检肠道肿瘤类器官的传代方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取根据权利要求1方法制备的原代类器官，去除培养基，1mlPBS缓冲液清洗一遍去除液体，重新加入1ml冰PBS缓冲液，用枪头反复打碎Matrigel，移入50ml离心管；2)100g-300g离心5分钟，去除上清，加冰PBS缓冲液重悬，反复吹打，此步骤重复3-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：柏卫华，祝远锋，
申请(专利权)人：上海集技生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31