The invention relates to a method for establishing oxidative stress model of human hepatocellular carcinoma cell line HepG2 induced by oleic acid. The method adopts oleic acid to induce and treat human hepatocellular carcinoma cell line HepG2 in vitro. The method adopts oleic acid to induce HepG2 in vitro, and the optimum concentration of oleic acid is 1 mmol/L. Compared with the existing technology, the method of the present invention abandons the previous use of hydrogen peroxide to induce oxidative stress in cells, establishes the model of induced oxidative stress for the first time, and determines the optimum concentration and incubation time of oleic acid by investigating the cell survival rate and ROS level in cells. This method is easy to operate, has good oxidation effect and low cost. It can help to establish oxidative stress model, provide theoretical reference for the follow-up study of antioxidant mechanism, and help the researchers who establish oxidative stress model and cell culture to complete the establishment of HepG2 cell culture and oxidative stress model smoothly.
【技术实现步骤摘要】
一种油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型的建立方法及验证方法
本专利技术属于肝癌细胞系HepG2氧化应激模型
，尤其是一种油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型的建立方法。
技术介绍
随着我国经济发展和生活水平的不断提高，城乡居民的膳食结构发生了巨大变化，表现为膳食结构趋向高能量密度，即脂肪摄入过多。能量摄入的增加，致使体内能量代谢旺盛，其副产物活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)也随之增加，进而可诱发机体氧化应激。而氧化应激是自由基与机体抗氧化能力之间的一种失衡，是人体内最复杂的生理和病理反应之一，高温、电离辐射、环境污染物等环境刺激物均可诱导氧化应激，并直接影响机体在极端环境中的存活和正常功能，最终导致炎症和癌症的发生。自由基对细胞中重要生物分子脂类、蛋白质和核酸产生氧化损伤，形成各种相应的氧化产物，最终导致细胞功能受损。因此，为了阐明氧化应激所导致的细胞内环境变化及氧化应激对肿瘤细胞及正常细胞的调控机制，应建立可靠的细胞模型。油酸极易透过细胞膜进入细胞，使其中脂肪酸的不饱和链断开形成过氧化物，破坏细胞结构，作用于H...
【技术保护点】
1.一种油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型的建立方法，其特征在于：所述方法采用油酸体外诱导处理人肝癌细胞系HepG2。
【技术特征摘要】
1.一种油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型的建立方法，其特征在于：所述方法采用油酸体外诱导处理人肝癌细胞系HepG2。2.根据权利要求1所述的油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型的建立方法，其特征在于：所述油酸的浓度为1mmol/L。3.根据权利要求1或2所述的油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型的建立方法，其特征在于：步骤如下：将油酸分装于离心管中，4℃保存，加入DMSO溶解油酸，DMSO：油酸的体积比为1:1000，0.22μm过膜待用；分别设置HepG2对照组和油酸组，用含质量浓度5％FBS的DMEM高糖培养基调整细胞浓度为(4-5)×105个/mL，37℃、5％CO2培养箱中培养36-48h后，实验组每孔加入过膜处理的油酸继续培养，于第4h、8h、12h和24h时，分别收集细胞，即得油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型。4.根据权利要求3所述的油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型的建立方法，其特征在于：所述油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型采用MTT法检测细胞存活率，采用荧光法测定细胞内ROS水平。5.根据权利要求4所述的油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型的建立方法，其特征在于：所述MTT法检测细胞存活率时的细胞浓度为4×105个/mL，油酸浓度分别为1.5、1.0、0.75、0.5、0mmol/L，细胞孵育时间为4h，570nm吸光度下测定吸光度值并计算细胞存活率；细胞存活率计算为：将各测试孔的OD值减去本底OD值，各重复孔的OD值取平均数±SD；细胞存活率以T/C％表示，T为油酸细胞的OD值，C为对照细胞的OD值；细胞存活率％＝(加药细胞OD/对照细胞OD)×100，求出T/C＝50％时的药物浓度(IC50)及T/C＝10％时的药物浓度。6.根据权利要求4所述的油酸诱导的人肝癌细胞系HepG2氧化应激模型的建立方法，其特征在于：所述荧光法测定细胞内ROS水平的细胞浓度为5×106个/mL，油酸浓度分别为1.5、1.0、0.75、0.5、0mmol/L，细胞孵育时间为60min；离心后收集细胞沉淀物，将收集好的细胞用PBS重悬，并用荧光分光度计进行检测。7.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴涛，杨璐，张民，刘锐，隋文杰，王帅，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津,12
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。