一种人肺癌循环肿瘤细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人肺癌循环肿瘤细胞系及其应用，所述的人肺癌循环肿瘤细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2017273。所述人肺癌循环肿瘤细胞的应用为：该循环肿瘤细胞系可用于制备在免疫缺陷哺乳动物中产生肺癌的试剂。该人肺癌循环肿瘤细胞系性状稳定，可稳定多次传代，在动物体内具有成瘤性和肺转移能力，可以成功制备肺癌转移动物模型，可以用来分析体外对药物的敏感性和耐药性、体内动物实验对药物的敏感性和耐药性，进而建立体外、体内两个相关联的抗肿瘤转移药物活性检测平台，是应用于基础研究和临床前期应用的理想人肺癌循环肿瘤细胞系，为进一步研究肿瘤的转移机制和药物检测提供了理想材料。

【技术实现步骤摘要】
一种人肺癌循环肿瘤细胞系及其应用
本专利技术涉及细胞系领域，特别涉及一种人肺癌循环肿瘤细胞系及其应用。
技术介绍
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一，已成为全球共同面对和急需解决的公共卫生问题。由于人口老龄化、吸烟、大气污染等问题导致肺癌高危人群迅速扩大，而早期诊断技术的发展促使肺癌早期手术患者的比例不断升高。针对早期术后患者进行及早干预进而预防肺癌转移是提高总体生存期的关键，但目前仍缺乏有效的干预策略。目前术后化疗是肺癌术后的标准治疗措施，但对早期患者的无病生存期获益有限。靶向治疗对于早期肺癌术后患者的研究表明也不能使受试者获益。此外，基于肿瘤细胞表面标志物的免疫治疗进展迅速，但是针对早期肺癌患者的临床试验研究，包括MAGRIT、ERCC-1等，均因没有达到提高总生存期的预期目标而被终止。重要原因在于以上研究主要根据术后标本的原代肿瘤细胞进行的，而不是基于发生转移的关键—循环肿瘤细胞进行精准干预。因此，深入研究循环肿瘤细胞在转移发生中的作用并积极干预，有望显著提高转移的预防效果。循环肿瘤细胞是指从原发灶或转移灶脱落进入外周血中的肿瘤细胞，它与肺癌的转移具有十分密切的关系，在肺癌的预后、临床分期及疗效评价等方面具有重要意义。以循环肿瘤细胞为靶点的药物研发和治疗策略的制订很可能成为肺癌临床疗效瓶颈的突破口。因为，当前肺癌治疗主要基于瘤体本身，通过对瘤灶的病理分析确定治疗方案。但在早期肺癌术后患者，其体内已无明确病灶，此时针对瘤体本身的治疗方案不能体现精准治疗的理念，这是患者获益有限的主要原因。因为肿瘤细胞的异质性问题，存在于患者外周血中的循环肿瘤细胞已经发生了上皮间质转化事件，导致循环肿瘤细胞与原发灶的生物学特性相比已发生明显改变，而术后化疗的一个重要依据就是消除体内残存的病灶。据此推断，针对于瘤灶本身的靶向药物和化疗药物，由于其依据主要是根据原发灶得出的细胞学和分子生物学层次的信息，而不是起到促进转移作用的循环肿瘤细胞，因此对早期肺癌患者的无病生存期获益有限。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题就是针对现有的人肺癌细胞系都来自于实体瘤，体外用于筛选抗转移药物相差较大这一技术问题，提供一种新的人肺癌循环肿瘤细胞系及其应用。本专利技术的人肺癌循环肿瘤细胞系性状稳定，可稳定多次传代，在动物体内具有成瘤性和肺转移能力，可以成功制备肺癌转移动物模型，可以用来分析体内外对药物的敏感性和耐药性，进而建立体外、体内两个抗肿瘤转移药物检测平台，是应用于基础研究和临床前期应用的理想人循环肺癌细胞系，使得通过原代培养建立的人源循环肿瘤细胞更接近与肿瘤转移的临床生物学特性，对药物的敏感性和耐药性具有更好的预测性，可用于临床前抗肿瘤转移药物的活性检测，为进一步研究肿瘤的发生发展、转移机制和药物抗肿瘤转移活性检测提供了理想的材料。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案之一是：一种人肺癌循环肿瘤细胞系，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2017273。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案之二是：本专利技术所述的人肺癌循环肿瘤细胞系的用途，所述的人肺癌循环肿瘤细胞系用于制备在免疫缺陷哺乳动物中产生肺癌的试剂。本专利技术所述的免疫缺陷哺乳动物为本领域常规的免疫缺陷哺乳动物，较佳的为免疫缺陷小鼠，所述的免疫缺陷小鼠较佳的为NOD-SCID小鼠。所述的人肺癌循环肿瘤细胞为本领域较为稀少的体外成功培养的肺癌细胞。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案之三是：一种药物抑制肺癌转移的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：将待测药物施用于细胞模型中，施用后抑制细胞转移的药物为临床上具有抑制肺癌转移的药物，其中所述的细胞模型是本专利技术所述的人肺癌循环肿瘤细胞系。其中所述检测方法为本领域常规使用的检测方法，所述检测方法较佳地包括以下步骤：(1)将一定数量的人肺癌循环肿瘤细胞接种于转移小室中，将不同的待测化合物添加于细胞内，待测化合物作用24小时后通过测定细胞转移率，计算不同待测化合物对细胞转移的抑制能力，用以判断待测化合物的抑制肿瘤转移的活性。其中步骤(1)所述人肺癌循环肿瘤细胞系的接种量较佳的为100,000/孔。所述检测不同化合物的抑制细胞转移率，用以判断待测化合物的抗肿瘤转移能力的方法为本领域常规检测和计算方法。其中所述的转移实验采用的转移小室孔径为12μm，细胞转移时间为18h。本专利技术还提供一种药物的治疗肺癌转移的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：将测试化合物施用于动物模型，施用后导致肺癌症状改善或肺部转移灶减少的测试化合物就是治疗肺癌的候选化合物，其中所述的动物模型具有如上述的人肺癌循环肿瘤细胞系所导致的肺癌肿瘤。本专利技术所述检测方法较佳地包括以下步骤：(1)将所述的肺癌循环肿瘤细胞制备成单细胞悬液，接种于哺乳动物尾静脉，进行饲养，获得人肺癌转移动物模型；(2)观察和测量动物的体重、肺部转移灶数目等情况；(3)将测试化合物施用于动物模型，施用后导致肺癌症状改善或减少肺部转移灶数目的测试化合物就是治疗肺癌转移的候选化合物。其中，所述的动物模型较佳地为免疫缺陷动物，优选地为NOD-SCID小鼠。较佳的可采用细胞悬液注射方法来建立动物模型。在施用步骤中，将测试化合物通过尾静脉注射、腹腔注射或口服等方式施用于肺癌转移动物。较佳的使用对照实验，一种优选的对照实验方式是：同时还使用不含测试化合物的溶剂施用于肺癌转移动物作为对照。本专利技术所用试剂和原料均市售可得。相对于现有技术，本专利技术的积极进步效果在于：1、本专利技术的人肺癌循环肿瘤细胞系性状稳定，可稳定多次传代，为肺癌转移研究提供了一种新的更接近与临床肿瘤生物学特性的实验材料；2、本专利技术的人肺癌循环肿瘤细胞系可以用来分析体外对药物的敏感性和耐药性、体内动物实验对药物的敏感性和耐药性，进而建立体外、体内两个相关联的抗肺癌转移的药物活性检测平台，是应用于基础研究和临床前期应用的理想细胞系。生物材料保藏信息本专利技术的人肺癌循环肿瘤细胞系，于2017年12月13日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国·武汉.武汉大学，邮编430072，培养物名称为人肺癌循环肿瘤细胞CTC-TJH-01，保藏编号为CCTCCNO:C2017273。附图说明图1为CTC-TJH-01细胞的形态学观察结果图(100×)。图2为CTC-TJH-01细胞的免疫荧光鉴定(200×)。图3为CTC-TJH-01细胞生长曲线图。图4为CTC-TJH-01细胞转移结果图(100×)，其中：图4A为8μm孔径的转移小室；图4B为12μm孔径的转移小室。图5为CTC-TJH-01细胞药物敏感性结果图，其中：图5A为CTC-TJH-01细胞对泰素帝的敏感性；图5B为CTC-TJH-01细胞对顺铂的敏感性；图6为CTC-TJH-01细胞流式细胞术结果图，其中：图6A为CTC-TJH-01细胞的CK蛋白的表达；图6B为CTC-TJH-01细胞的ALDH1蛋白的表达；图6C为CTC-TJH-01细胞的CD44蛋白的表达；图6D为CTC-TJH-01细胞的CD47蛋白的表达；图6E为CTC-TJH-01细胞的CD133蛋白的表达；图6F为CTC-TJH-01细胞的CD45蛋白的表达。图7为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人肺癌循环肿瘤细胞系，其特征在于，所述的人肺癌循环肿瘤细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2017273。

【技术特征摘要】
1.一种人肺癌循环肿瘤细胞系，其特征在于，所述的人肺癌循环肿瘤细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2017273。2.根据权利要求1所述的人肺癌循环肿瘤细胞系，其特征在于，从形态学观察，将细胞接种于6cm皿中贴壁培养，细胞贴壁生长，分散均匀，大小不等，形状为不规则多边形，明显核仁，不规则的核轮廓，细胞核与细胞质比例高，具有上皮样细胞特征。3.根据权利要求1所述的人肺癌循环肿瘤细胞系，其特征在于，将细胞接种于盖玻片上培养，待细胞伸展后，用4％多聚甲醛固定，进行免疫荧光染色，其符合循环肿瘤细胞的特征：表达细胞角蛋白CK、不表达CD45、DAPI染核阳性。4.如权利要求1或2或3所述的人肺癌循环肿瘤细胞系的用途，其特征在于，所述的人肺癌循环肿瘤细胞系用于制备在免疫缺陷哺乳动物中产生肺癌的试剂。5.如权利要求4所述的人肺癌循环肿瘤细胞系的用途，其特征在于，所述的免疫缺陷哺乳动物为免疫缺陷小鼠。6.如权利要求5所述的人肺癌循环肿瘤细胞系的用途，其特征在于，所述的免疫缺陷小鼠为NOD-SCID小鼠。7.如权利要求6所述的人肺癌循环肿瘤细胞系的用途，其特征在于，所述的人肺癌循环肿瘤细胞系在NOD-SCID小鼠上具有肺转移能力。8.一种药物的抑制肺癌转移的检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括以下步骤：将待测药物施用于细胞模型...

【专利技术属性】
技术研发人员：田建辉，阙祖俊，施奇惠，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属龙华医院，施奇惠，
类型：发明
国别省市：上海,31