人原代肝癌组织的体外模型的建立方法技术

本发明专利技术涉及一种人原代肝癌组织的体外模型研究的技术领域，尤指人原代肝癌组织的体外模型的建立方法，主要包括：1）收集新鲜肝癌组织标本；2）将肝癌组织置于培养液中；3）低温运输并准备进一步处理；4）将取得的肝癌组织切成米粒大小；5）所述肝癌组织经含抗生素的PBS清洗，然后置于48孔板中；6）所述肝癌组织经冰冻包埋切片，进行原位末端标记法，检测组织凋亡情况；7）切片均在显微镜下取三个视野；8）统计各组平均光密度；9）进行统计分析；本发明专利技术利用人原代肝癌组织进行体外培养，建立了一种抗凋亡、去分化的模型，进行体外的无血清培养，无需消化、传代，制备程序比较方便快捷，保留原发肿瘤的异质性和空间结构；更能减少组织凋亡。

Establishment of an in vitro model of human primary hepatocellular carcinoma

The invention relates to the technical field of in vitro model study of human primary hepatocellular carcinoma tissue, especially the method of in vitro model establishment of human primary hepatocellular carcinoma tissue, which mainly includes: 1) collecting fresh hepatocellular carcinoma tissue specimens; 2) placing hepatocellular carcinoma tissue in culture medium; 3) transporting at low temperature and preparing for further treatment; 4) cutting the obtained hepatocellular carcinoma tissue into rice granules; 5) cutting the hepatocellular carcinoma tissue into rice granules; The antibiotic-containing PBS was cleaned and then placed in a 48-well plate; 6) the hepatocellular carcinoma tissue was frozen and embedded, and the apoptosis was detected by in situ end labeling method; 7) the sections were taken from three visual fields under the microscope; 8) the average optical density of each group was counted; 9) the statistical analysis was carried out; the method used human primary hepatocellular carcinoma tissue for in vitro culture and established an anti-apoptotic, anti-apoptotic and anti-apoptotic method. In vitro serum-free culture without digestion and passage is needed for the dedifferentiated model. The preparation procedure is convenient and fast, and the heterogeneity and spatial structure of primary tumors are retained. It can also reduce the apoptosis of tissues.

【技术实现步骤摘要】
人原代肝癌组织的体外模型的建立方法
本专利技术涉及一种人原代肝癌组织的体外模型研究的
，尤指人原代肝癌组织的体外模型的建立方法。
技术介绍
肝细胞癌是一种常见的恶性肿瘤，尽管近年来采用分子生物学技术研究肝癌的发生，但仍缺乏对肝癌发病机制的确切认识，随着人们对肝癌动物模型研究的不断深入，逐渐建立了自发型、诱发性、移植性及转基因动物肝癌模型，因为这些模型很好地模拟了人类肝癌，可以用于肝癌的生理、细胞和分子等发病机制方面的研究，也可用于肝癌治疗药物的筛选以及基因治疗的探索。原发性肝癌是最常见的高度恶性肿瘤之一，易多发、转移或复发等，一直以来，以肿瘤细胞系为主的二维培养(Two-dimensionalculture,2D)模型为研究肿瘤癌变、分子遗传、浸润转移、药物治疗等方面做出突出贡献，但经过体外筛选的稳定细胞株缺乏肿瘤异质性；细胞增殖过程可能出现不可逆转的改变，包括基因的突变和缺失、生长和侵袭能力的改变；连续传代的肿瘤细胞株适应了外界培养皿的环境，缺乏肿瘤微环境的作用，如非肿瘤细胞、细胞外基质、肿瘤微环境因子，因此建立保留原发肿瘤特性，能够客观反应肿瘤实际情况的体外模型对于肿瘤研究本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人原代肝癌组织的体外模型的建立方法，其特征在于，所述的建立方法主要包括以下步骤：1）收集经手术切除的新鲜肝癌组织标本；2）将所述肝癌组织暂时置于预冷的含抗生素的培养液中储存；3）然后于2h内完成低温运输并准备进一步处理；4）在无菌操作台内，将从步骤2）的培养液中取得的肝癌组织切成米粒大小；5）所述肝癌组织经含抗生素的PBS清洗，然后置于48孔板内；随后在48孔板中加入培养基，再添加调节激酶抑制剂PD98059；6）所述肝癌组织经冰冻包埋切片，进行原位末端标记法，通过免疫荧光染色检测组织凋亡情况；7）每张切片均在荧光显微镜下取三个视野；8）通过Image J软件统计各组平均光密度；9）通过G...

【技术特征摘要】
1.人原代肝癌组织的体外模型的建立方法，其特征在于，所述的建立方法主要包括以下步骤：1）收集经手术切除的新鲜肝癌组织标本；2）将所述肝癌组织暂时置于预冷的含抗生素的培养液中储存；3）然后于2h内完成低温运输并准备进一步处理；4）在无菌操作台内，将从步骤2）的培养液中取得的肝癌组织切成米粒大小；5）所述肝癌组织经含抗生素的PBS清洗，然后置于48孔板内；随后在48孔板中加入培养基，再添加调节激酶抑制剂PD98059；6）所述肝癌组织经冰冻包埋切片，进行原位末端标记法，通过免疫荧光染色检测组织凋亡情况；7）每张切片均在荧光显微镜下取三个视野；8）通过ImageJ软件统计各组平均光密度；9）通过GraphPadPrism软件进行统计分析。2.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄朝峰，赵擎宇，刘忠华，尹萌，陈焕鹏，李永超，
申请(专利权)人：广州长峰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44