The invention discloses a method for capturing and separating CTC based on RGD polypeptide. The present invention first uses Arg Gly Asp (RGD) polypeptide to modify magnetic beads with thiol groups attached to the surface, combines RGD polypeptide with OEIR highly expressed on cancer cells in CTC samples by electrostatic interaction between ions, thereby specifically capturing CTC, and then adds captured CTC to positive charge-modified glassware, flushes the glassware with buffer PBS, and obtains captured OEIR. CTC, to achieve the separation of CTC. The invention can quickly capture CTC by modified magnetic particles, with high separation efficiency and simple and convenient operation.
【技术实现步骤摘要】
一种基于RGD多肽捕获分离CTC的方法
本专利技术属于生物医学
，具体的说，涉及一种基于RGD多肽捕获分离CTC的方法。
技术介绍
循环肿瘤细胞(CTC)是指由原发灶脱落，侵入血液循环的肿瘤细胞。进入循环的肿瘤细胞绝大多数在短期内死亡。只有极少数具有高度活力、高度转移潜能的肿瘤细胞在循环系统中存活下来，相互聚集形成微小癌栓，并在一定条件下发展为转移灶。CTC检测被具有实时监测功能，是近30年来研究应用的仅有的几个新型肿瘤标志物之一，通过检测CTC的数量和蛋白表达可对肿瘤进行确诊，判断预后，监控疗效。当CTC数量多、过表达上皮细胞粘附分子(EpCAM)时，提示患者预后差。而通过对比治疗前后血液中CTC数量，相关基因分型，蛋白表达，可以判断治疗是否有效，是否需要更改治疗方案。目前CTC分离技术主要有两类，第一类是基于抗体分离CTC。最常见的是正性分离，即用抗体与CTC表面受体结合来分离。这类技术通常以EpCAM抗体标记的磁珠与表达EpCAM的CTC结合来分离CTC。正性分离的缺陷在于，很多肿瘤细胞不表达或弱表达EpCAM。如，超过一半的ALK基因融合阳性的肺癌C...
【技术保护点】
1.一种基于RGD多肽捕获分离CTC的方法，其特征在于，其通过将RGD多肽与带有CTC的样本中的癌细胞上高表达的整联蛋白OEIR离子之间静电作用相结合，从而特异性捕获CTC；通过将捕获的CTC吸附在玻璃器皿上，实现CTC的分离。
【技术特征摘要】
1.一种基于RGD多肽捕获分离CTC的方法，其特征在于，其通过将RGD多肽与带有CTC的样本中的癌细胞上高表达的整联蛋白OEIR离子之间静电作用相结合，从而特异性捕获CTC；通过将捕获的CTC吸附在玻璃器皿上，实现CTC的分离。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)将RGD多肽修饰于巯基修饰的Fe3O4磁性颗粒上；将带有CTC的样本进行细胞富集处理；(2)将RGD多肽修饰的Fe3O4磁性颗粒与经细胞富集处理的带有CTC的样本反应，从而特异性捕获CTC；(3)将特异性捕获CTC后的Fe3O4磁性颗粒经由磁力架吸附后，加入到正电荷修饰的玻璃器皿中，再置于37℃温度的摇床上在缓冲液中孵育40～60min，使得CTC吸附在玻璃器皿上，实现CTC的分...
【专利技术属性】
技术研发人员：张群，王煜蘅，雷豪志，
申请(专利权)人：上海浦美医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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