一种基于LBL法修饰肝素分离细胞外囊泡的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于LBL法修饰肝素分离细胞外囊泡的方法。其具体步骤如下：(1)首先通过LBL层层修饰的方法，以静电吸附的原理，在若干带正电的纳米球上逐层交替修饰肝素和聚二烯丙基二甲基氯化铵PDADMAC；修饰层从内到外按照肝素、PDADMAC、肝素的顺序进行排列，修饰层的层数为大于等于三层的奇数层；(2)将修饰后的纳米球加入到含有细胞外囊泡的体液中反应5min‑120min后，离心或者磁吸附收集纳米球；(3)在收集的纳米球中加入氯化钠溶液反应，吸附在纳米球表面的细胞外囊泡洗脱到氯化钠溶液中，实现体液中细胞外囊泡的分离。本发明专利技术方法简单可靠、成本极低、灵活度大。

A Method of Separating Extracellular Vesicles Based on LBL Modification of Heparin

The invention discloses a method for separating extracellular vesicles by modifying heparin based on LBL method. The specific steps are as follows: (1) First, heparin and Polydiallyldimethylammonium chloride (PDADMAC) were modified layer by layer on several positively charged nanospheres by LBL layer modification and electrostatic adsorption principle; the modified layers were arranged in the order of heparin, PDADMAC and heparin from inside to outside, and the number of modified layers was greater than or equal to three odd layers; (2) the modified nanospheres were added to the nanospheres. After the rice balls were added to the body fluid containing extracellular vesicles for 5 minutes to 120 minutes, the nanospheres were collected by centrifugation or magnetic adsorption; (3) The sodium chloride solution was added to the collected nanospheres, and the extracellular vesicles adsorbed on the surface of the nanospheres were eluted into the sodium chloride solution to separate the extracellular vesicles in the body fluid. The method of the invention is simple and reliable, has low cost and high flexibility.

【技术实现步骤摘要】
一种基于LBL法修饰肝素分离细胞外囊泡的方法
本专利技术属于生物医学
，涉及一种基于LBL法修饰肝素分离细胞外囊泡的方法。
技术介绍
细胞外囊泡通常包括外泌体、微囊泡和凋亡小体等，携带各种蛋白、核酸，甚至全基因组的DNA，可作为信使，通过血液、尿液、乳汁、唾液等途径介导细胞间的信号的传导。研究表明，细胞外囊泡介导了肿瘤的发生、发展以及转移，能够反映肿瘤的相关信息，是一种潜在的肿瘤分子标志物。细胞外囊泡的分离纯化是外泌体研究与应用的主要瓶颈。目前的提取方法包括：基于密度的超速离心法、基于尺寸的过滤分离法、基于抗体的免疫富集法、基于类似分离病毒的PEG沉淀法等。对于超速离心法来说，设备及耗材昂贵，耗时较长，纯度低。过滤分离法极易造成阻塞，材料消耗较大，耗时较长。免疫富集法可得到高纯度细胞外囊泡，但抗体制备复杂，价格昂贵，批次间不稳定。PEG沉淀法可以低成本快速的分离得到细胞外囊泡，但纯度低，蛋白质污染严重。2015年研究人员发现，通过共价修饰方法制备的带有肝素的琼脂糖凝胶纳米球可以特异的结合细胞外囊泡，并且可以通过高浓度氯化钠溶液将结合的细胞外囊泡洗脱下来，从而获得纯度较高的细胞外本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于LBL法修饰肝素分离细胞外囊泡的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)首先通过LBL层层修饰的方法，以静电吸附的原理，在若干带正电的纳米球上逐层交替修饰肝素和聚二烯丙基二甲基氯化铵PDADMAC；修饰层从内到外按照肝素、PDADMAC、肝素的顺序进行排列，修饰层的层数为大于等于三层的奇数层；(2)将修饰后的纳米球加入到含有细胞外囊泡的体液中反应5min‑120min后，离心或者磁吸附收集纳米球；(3)在收集的纳米球中加入2.0～2.5mol/L氯化钠溶液反应10～20min，吸附在纳米球表面的细胞外囊泡洗脱到氯化钠溶液中，通过离心或者磁吸附弃去纳米球，实现体液中细胞外囊泡的分离。

【技术特征摘要】
1.一种基于LBL法修饰肝素分离细胞外囊泡的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)首先通过LBL层层修饰的方法，以静电吸附的原理，在若干带正电的纳米球上逐层交替修饰肝素和聚二烯丙基二甲基氯化铵PDADMAC；修饰层从内到外按照肝素、PDADMAC、肝素的顺序进行排列，修饰层的层数为大于等于三层的奇数层；(2)将修饰后的纳米球加入到含有细胞外囊泡的体液中反应5min-120min后，离心或者磁吸附收集纳米球；(3)在收集的纳米球中加入2.0～2.5mol/L氯化钠溶液反应10～20min，吸附在纳米球表面的细胞外囊泡洗脱到氯化钠溶液中，通过离心或者磁吸附弃去纳米球，实现体液中细胞外囊泡的分离。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，带正电的纳米球是由聚苯乙烯、四氧化三铁、硅或二氧化硅材质的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张群，雷豪志，王煜蘅，
申请(专利权)人：上海浦美医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31