一种iCAR-T细胞的制备方法技术

本发明专利技术涉及基因领域，特别涉及一种iCAR‑T细胞的制备方法。一种iCAR‑T细胞的制备方法，CAR‑T的DNA序列插入到iPS细胞的AAVS1位点，得到的CAR‑iPS细胞分化获得iCAR‑T细胞。本发明专利技术制备的iCAR‑T细胞由CAR‑iPS分化获得，iPS细胞可增殖周期长，更便于进行基因修饰。相对于慢病毒感染获得的iCAR‑T细胞，CAR‑iPS分化获得的iCAR‑T纯度更高，可以接近于100％；基因插入位点均为AAVS1位点，插入位置明确，安全性更高；由于iPS可近乎无限增殖，因此由CAR‑iPS获得的iCAR‑T也可近乎无限获得，不受外周血分离影响。

【技术实现步骤摘要】
一种iCAR-T细胞的制备方法
本专利技术涉及iCAR-T细胞制备领域，具体而言，涉及一种iCAR-T细胞的制备方法。
技术介绍
目前，CAR-T的制备主要是通过慢病毒感染对原代T细胞进行基因修饰。如申请号为201610744414.4涉及免疫学和分子生物学领域，特别涉及一种制备CAR-T细胞的方法以及制得的CAR-T细胞及其应用。一种制备CAR-T细胞的方法，是将包含CAR的病毒感染CD3阳性T细胞得到CAR-T细胞。如申请号为201711479751.6公开了一种CAR-T细胞的制备方法、制得的CAR-T细胞及其应用，所述制备方法包括以下步骤：S1、T淋巴细胞的分离、激活和扩增：将分离的CD3+CD8+T淋巴细胞激活后培养扩增；S2、携带CAR的重组慢病毒感染所述步骤S1处理后的T淋巴细胞，制得所述CAR-T细胞，其中，所述携带CAR的重组慢病毒中携带的CAR基因包含CD28胞内区和41BB胞内区，所述CD28胞内区和41BB胞内区的核苷酸序列分别如SEQID7和SEQID9所示。本专利技术制备方法制得的CAR-T细胞可广泛应用于多种癌症的治疗。与现有技术相比，本专利技术方法制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种iCAR‑T细胞的制备方法，其特征在于，CAR‑T的DNA序列插入到iPS细胞的AAVS1位点，得到的CAR‑iPS细胞分化获得iCAR‑T细胞。

【技术特征摘要】
1.一种iCAR-T细胞的制备方法，其特征在于，CAR-T的DNA序列插入到iPS细胞的AAVS1位点，得到的CAR-iPS细胞分化获得iCAR-T细胞。2.根据权利要求1所述的iCAR-T细胞的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：构建携带有AAVS1位点附近同源序列和CAR-T的DNA序列的donor载体；构建B2M基因敲除位点对应的CRISPR/Cas9载体；所述携带有AAVS1位点附近同源序列和CAR-T的DNA序列的donor载体、所述B2M基因敲除位点对应的CRISPR/Cas9载体转入iPS细胞，筛选得到CAR-iPS细胞；所述CAR-iPS细胞分化得到所述iCAR-T。3.根据权利要求2所述的iCAR-T细胞的制备方法，其特征在于，所述AAVS1位点附近同源序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。4.根据权利要求2所述的iCAR-T细胞的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾雨春，尹乐，吴理达，张会远，谭声江，
申请(专利权)人：北京呈诺医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11