基于UCP1基因的人类肥胖症斑马鱼模型的建立与应用制造技术

本发明专利技术涉及基于UCP1基因的人类肥胖症斑马鱼模型的建立与应用，具体步骤包括针对斑马鱼ucp1基因编码关键功能结构域的外显子设计CRISPR序列，筛选确认可有效引导Cas9切割目标基因的活性sgRNA，然后运用有活性的sgRNA，制备ucp1基因敲除的初建者，待初建者生长至性成熟，令其自由交配，产生F1代；通过对F1个体的基因型鉴定，筛选fto基因敲除的斑马鱼突变体；通过对ucp1基因纯合突变的分析，确立ucp1的功能缺失有益于斑马鱼仔鱼的脂肪累积的减少，建立基于ucp1基因的人类肥胖症的斑马鱼模型，进而将ucp1作为标识基因应用于筛选与建立治疗人类肥胖症的新药物与新方法。

Establishment and application of human obesity zebrafish model based on UCP1 gene

The present invention relates to the establishment and application of human obesity zebrafish model based on UCP1 gene. Specific steps include designing CRISPR sequence for exons of key functional domains coding UCP1 gene of zebrafish, screening and confirming active sgRNA that can effectively guide Cas9 to cut target gene, and then using active sgRNA to prepare the initiator of UCP1 gene knockout, waiting for the initiator to grow to sexual maturity. Maturity allows free mating to produce F1 generation; screening FTO gene knockout zebrafish mutants through genotype identification of F1 individuals; through homozygous mutation analysis of UCP1 gene, we established that the loss of UCP1 function is beneficial to the reduction of fat accumulation in zebrafish larvae, established a zebrafish model of human obesity based on UCP1 gene, and then applied UCP1 as a marker gene. Screening and establishing new drugs and methods for the treatment of human obesity.

【技术实现步骤摘要】
基于UCP1基因的人类肥胖症斑马鱼模型的建立与应用
本专利技术属于生物
，涉及筛选确定可对斑马鱼ucp1基因进行基因组编辑的sgRNA序列、制备斑马鱼ucp1基因靶向突变的优选方案，以及利用斑马鱼ucp1作为标志性基因筛选治疗人类肥胖症药物的斑马鱼模型的应用。技术背景肥胖是体内多余的脂肪堆积超过一定程度对人类健康造成困扰的能量代谢失衡的慢性疾病。人们通常用BMI(bodymassindex，体重指数)来判断个体是否肥胖。因体脂增加使体重超过标准体重20％或体重指数【BMI＝体重(Kg)/(身高)2(m2)】大于24者称为肥胖症。肥胖会增加其它疾病的患病几率，尤其是心脏病、II型糖尿病、阻塞性睡眠呼吸窘迫、癌症和骨关节炎等疾病。近几十年来，肥胖症患者在全球范围内以惊人的速度增加。尤其是儿童、青少年肥胖增长日益迅猛(1，2)。在2014年约有600万成年人(13％)和4200万5岁以下儿童患有肥胖症。肥胖被认为是21世纪最为严重的影响健康的疾病。肥胖的病因主要分为外因和内因，外因以饮食过多，活动过少为主，热量摄入多余热量消耗，使脂肪合成增加(3，4)。而内因是要是由于遗传易感性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于UCP1基因的人类肥胖症斑马鱼的建立与应用，其特征在首先提供了两个可有效引导Cas9识别斑马鱼ucp1基因的活性sgRNA，利用活性sgRNA制作了ucp1基因敲除的斑马鱼突变体，提供了作为人类肥胖症的斑马鱼模型，因而确立了斑马鱼ucp1基因可作为标识基因应用于筛选与建立治疗人类肥胖症的新药物与新方法。

【技术特征摘要】
1.基于UCP1基因的人类肥胖症斑马鱼的建立与应用，其特征在首先提供了两个可有效引导Cas9识别斑马鱼ucp1基因的活性sgRNA，利用活性sgRNA制作了ucp1基因敲除的斑马鱼突变体，提供了作为人类肥胖症的斑马鱼模型，因而确立了斑马鱼ucp1基因可作为标识基因应用于筛选与建立治疗人类肥胖症的新药物与新方法。2.如权利要求1所述的特征，可有效引导Cas9识别斑马鱼ucp1基因的活性sgRNA分别为sgRNA1和sgRNA3。3.如权利1所述的特征，斑马鱼的突变体分别为携带了插入5bp和插入7bp的ucp1无效等位基因的杂合子，性成熟的杂合子自交产生的纯合子作为人类肥胖症的斑马鱼模型。4.如权利3所述的斑马鱼模型，其斑马鱼仔鱼的年龄为受精后3天、4天、5天、6天和7天。5.如权利3所述的斑马鱼模型，应用于筛选与建立...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵庆顺，董晓华，储乐乐，池军，
申请(专利权)人：南京尧顺禹生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32