一种HAFFT1细胞的构建方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种HAFFT1细胞的构建方法。该方法将经过由小分子修饰的多肽刺激后的细胞用TCR‑T技术进行了改造，改造后的T细胞再进行免疫抑制靶点的敲除，精准的保护了特异性杀伤T细胞免受体内抑制，提高了T细胞对肿瘤细胞的杀伤力。经过HAFFT1方案改造的细胞，识别肿瘤抗原的特异性T细胞(TCR+)比例为80％以上。

Construction of HAFFT1 cells

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to a construction method of HAFFT1 cells. In this method, the cells stimulated by small molecule modified polypeptide were modified by TCR T technology. The modified T cells were then knocked out of the immunosuppressive target, which precisely protected the specific killer T cells from inhibition in vivo and enhanced the killing ability of T cells to cancer cells. The proportion of specific T cells (TCR+) recognizing tumor antigens was more than 80% in HAFFT1 modified cells.

【技术实现步骤摘要】
一种HAFFT1细胞的构建方法
：本专利技术属于生物
，具体地说，涉及一种HAFFT1细胞的构建方法。
技术介绍
：目前，在肿瘤的特异性免疫治疗方面，现有的LAK、DC、CIK、DC-CIK细胞和方法基本被证明是无效的，而NK、CAR-NK、TIL等细胞技术还有待成熟，CAR-T细胞在安全性和实体瘤治疗中还有缺陷。现有技术一般通过改造DC细胞，由DC递呈T细胞产生特异杀伤。有些实验室在尝试用病毒做为载体的方法进行转染递呈T细胞，诱导T细胞的特异性杀伤。我们也曾用突变混合多肽直接刺激PBMC，诱导T细胞。还有实验室利用TCR-T技术，靶向递呈MAGEA3抗原。以上治疗方法并不成熟，尤其是体外诱导DC细胞及DC细胞负载肿瘤抗原技术理论上研究较多，但在具体实施过程中还有许多问题，缺乏明确的、肿瘤细胞发生发展关键的信号传导通路相关分子作为诱导抗原，因为肿瘤抗原不明及肿瘤微环境免疫抑制的障碍，使实现特异性细胞靶向免疫治疗难以顺利实施。另外，有的虽然进行了抗原体外冲击，但没有进行体外共培育和体外扩增，让较为单薄的特异性细胞直接面对复杂的肿瘤微环境，因此，很难起到预期的效果。也有的虽然也可以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种HAFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述HAFFT1细胞的构建方法包括以下步骤：1)抽取患者外周血，进行ctDNA外显子测序，或者以肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点，进行抗原表位预测，合成突变多肽并进行小分子修饰；2)使用外周血制备永生化DC，并负载所述经小分子修饰过的突变多肽，与PBMC共孵育，获得HAFF细胞；3)用所述经小分子修饰过的突变多肽作为抗原刺激所述HAFF细胞，筛选获得精准多肽；4)以所述精准多肽负载永生化DC细胞与PBMC共孵育，制备HAFF’细胞；5)以所述精准多肽作为抗原刺激HAFF’细胞，筛选获得能够识别所述精准多肽的特异性T细胞，通过测序得到特异性...

【技术特征摘要】
1.一种HAFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述HAFFT1细胞的构建方法包括以下步骤：1)抽取患者外周血，进行ctDNA外显子测序，或者以肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点，进行抗原表位预测，合成突变多肽并进行小分子修饰；2)使用外周血制备永生化DC，并负载所述经小分子修饰过的突变多肽，与PBMC共孵育，获得HAFF细胞；3)用所述经小分子修饰过的突变多肽作为抗原刺激所述HAFF细胞，筛选获得精准多肽；4)以所述精准多肽负载永生化DC细胞与PBMC共孵育，制备HAFF’细胞；5)以所述精准多肽作为抗原刺激HAFF’细胞，筛选获得能够识别所述精准多肽的特异性T细胞，通过测序得到特异性细胞的高频TCR，敲除原有TCR并进行高频TCR的表达，构...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦顺昌，张嵘，张天赋，周子珊，陈小彬，李营营，彭刚，
申请(专利权)人：北京鼎成肽源生物技术有限公司，焦顺昌，
类型：发明
国别省市：北京,11