本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及一种斑马鱼tmem132e基因的cDNA全长序列及其应用。本发明专利技术提供了斑马鱼tmem132e基因的全长序列，其DNA全长为3222bp，包含3219bp的开放阅读框，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。提供了由该斑马鱼tmem132e基因编码的蛋白质分子。通过本发明专利技术的斑马鱼tmem132e基因，可以根据基因序列人工合成或转基因生物合成具有生物活性的纯化蛋白或寡核苷酸，有助于了解斑马鱼tmem132e基因的基因组结构，分析该基因的表达和蛋白的功能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程
，具体涉及斑马鱼tmeml32e基因全长表达序列和 所编码的一种蛋白，以及该基因的克隆和检测方法。
技术介绍
大多数生命过程在长期的进化过程中具有高度的保守性，模式生物也因此成为研 宄人类发育、系统功能、疾病发生等的重要工具，特别是脊椎动物和人类的胚胎发育过程在 形态上相当类似，在细胞和分子水平上所涉及的信号通路和基因一般也有高度的同源性。 斑马鱼作为一种新型的脊椎模式生物，具有繁殖能力强、体外受精和发育、胚胎透明、性成 熟周期短、个体小易养殖等诸多优点，特别是可以进行大规模的正向基因饱和突变与筛选。 这些特点使其成为功能基因组时代生命科学研宄中重要的模型生物之一，已经被广泛应用 于人类疾病和胚胎发育过程的研宄。 位于人类 17ql2 的TMEM132E(transmembraneprotein132E)基因包括 10 个外显 子，基因组长约60kb，cDNA全长2955nt，编码985个氨基酸的单跨膜型糖蛋白，该基因的突 变会导致人常染色体隐性遗传非综合症耳聋（DFNB99)，但具体机制尚不明确，软件分析未 发现类似相关蛋白。我们拟借助斑马鱼这一模式生物，利用斑马鱼作为模式生物的优点， 通过研宄斑马鱼中人TMEM132E的同源基因tmeml32e的功能，为阐明人TMEM132E该基因的 生物学功能奠定基础。 分析发现，在NCBIGenbank中已经有两个斑马鱼tmeml32e的mRNA序列，分别 为XM_003198707 和XM_68740,都是在 2011 年 3 月被提交至Genbank。其中XM_003198707 序列为tmeml32e基因的部分mRNA序列，只有1451bp;XM_68740全长为2615bp，这两个序 列都是在斑马鱼基因组测序结果的基础上，通过计算机软件分析预测出的斑马鱼tmeml32e 基因的mRNA序列，并没有在实验室中被验证。因此，得到斑马鱼tmeml32e基因正确的全长 cDNA序列和所编码的蛋白，是研宄斑马鱼tmeml32e基因功能的首要任务和目前亟待解决 的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种斑马鱼tmeml32e基因，已注册于NCBIGenbank，命名为 JX995104。斑马鱼tmeml32e基因的cDNA全长为3222bp，包含3219bp的开放阅读框，其核 苷酸序列如SEQIDNO. 1所示。 本专利技术提供了上述基因编码翻译出的蛋白质分子，具有1073个氨基酸残基，其氨 基酸序列如SEQIDN0. 2所示。 MGHFVVQGDLPWILCSLRLVIMIIAGKVSPTSSDALFSVPVPSA TSSPPEVYLPATFKLSNTQLAFFLQENRAPSYGSQRGHPLQRSESFVVFQTKELPAVN ISLGPFTQDQTLSKDLLQPSSPLDIPGRLTVNWKVRAFIVQSRVYASNPLVQVLFYIA GRDWDDFKIQDKLPCVRLHAFRDVREIKTSCRLQGNLAQCLAQLDLPSTWFNVNVAPL GRRKSSGTDGLELTGETLQVELYYTLHDPDSNDECGESYPRRGGPSRGESLSQQPLLR IGSISLYQPSQEQLVVDKQLDKNLFLRLPERPLKPGETLNIYLLLVPNSTVEQFTLKV KAKKGVNLLSTKSRSNQWRVEWDMQSGAKHSIATVEASKIKGVSGDMAGSIEIMQLDF EMENFTSQSVTRRINWNIDYRGQNPTSDAEKVVTELTVVQKDIQAIIPLSMDTEIINT AVLTGRTVAIPVKVVSIELNGAVTDVSSSVQCKSFNEDIVKVSMNCDYVFVNGKETRG SMNARVIFSYEHLSAPLELTVWVPKLPLKVELSDNRLSFIKGWRVPILPDRRTARDSD DDDDDDRKVSRGCTLQYQRAQIKVLTQFHTTSSEGTNQMITMLGPDWQVDVTELVQDS LKVVDGRVAELADRTVLVANELGSSTLKVESPLAVEAVLGETQFSVVDEKVSIVELRV HAISGLALNLQPSPGNSHTMVAKATGLQTLSTLKQEASFSIWVYYSDNTAAPLSMYDP KDYNLNGTSADDKVVTVAQQPQQRWPVIIAEGEGTCDIVHVEMTISETCQKTKRKSVI ASSSVFVKVRFGTDEDSEEDMEMETEIDTRMPANTRRPAIDSNVGGAGYEPSNEQPAS VPIDYTNFPTISNPEEPTEEDEEDDEFVHSPRSMTDLEIGMYALLGVFCLAILVFLIN CIVFVLKYRHKRIPPEGQANMDHSHHWVFLGNGEPLRTQSDLSPQTVESPSNTLEGVQ TCCHGDHHSSGSSQTSVQSQVHGRGDGSSGGSTKDHGEDASSPTSKRKRVKFTTFTLP TEDLPYNSIPIANEEDIQWVCQDMGFQDQEELHDYMRRIKEIA。 本专利技术还提供了用于扩增斑马鱼tmeml32e基因的引物序列，其中，用于扩增斑马 鱼tmeml32e基因5'端的引物序列如SEQIDN0. 3和SEQIDN0. 4所示，扩增出的片段长 度为1042bp;用于扩增斑马鱼tmeml32e基因3'端的引物序列如SEQIDNO. 5和SEQID NO. 6所示，扩增出的片段长度为2280bp。 SEQIDNO. 3 ：5'ATGGGACATTTTGTTGTTCAAG3, SEQIDNO. 4 :5'TTGACTTGGTGCTGAGGAGATT3' SEQIDNO. 5 :5'GACCCTCAACATCTATCTGCTC3' SEQIDNO. 6 :5'GGCTATTTCCTTTATCCTGCGC3' 本专利技术进一步提供了斑马鱼tmeml32e基因序列的克隆方法，包括以下步骤： (1)提取斑马鱼幼体总RNA; 取受精后3天的Tu系野生型斑马鱼，在1. 5ml的Ep管中用研磨棒粉碎，然后用 Takara公司的Trizol试剂盒，按照试剂盒说明书操作提取出总RNA. ⑵引物设计 首先从NCBIGenbank中下载斑马鱼tmeml32e的mRNA序列，分别为XM_003198707 和XM_68740,经过BLAST比对，分析二者的共有序列，使用Primer5软件设计引物。由于 该基因较大，所以设计两对引物分别扩增斑马鱼tmeml32e基因cDNA的5'端和3'端，为 便于拼接全长，设计的引物要保证扩增的两DNA片段有部分序列重叠。用于扩增斑马鱼 tmeml32e基因5'端的引物序列如序列表中SEQIDN0. 3和SEQIDN0. 4所示；用于扩增 斑马鱼tmeml32e基因3'端的引物序列如序列表中SEQIDN0. 5和SEQIDN0. 6所示。 (3)cDNA合成 以提取的斑马鱼幼体总RNA为模板，使用Fermentas公司的Reverse Transcription试剂盒，以Oligo(dT) 18为本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种斑马鱼tmem132e基因，其特征在于，DNA全长为3222bp，包含3219bp的开放阅读框，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李江夏，刘奇迹，龚瑶琴，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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