一种塔里木马鹿茸c-myc基因及其应用，所述c-myc基因的核苷酸序列如SED ID NO：1所示。本发明专利技术塔里木马鹿茸c-myc基因还包括在促茸生长中的应用。本发明专利技术之塔里木马鹿茸c-myc基因改变了鹿茸依赖自然或药物处理的再生茸生长缓慢现状，实现了鹿茸产品的稳产、高产、质优。实验证明，本发明专利技术的SNP基因分型CG可使马鹿茸重13.441±1.88kg。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种马鹿茸基因及其应用，具体涉及一种塔里木马鹿茸c-myc基因及 其应用。
技术介绍
马鹿又名赤鹿，是体型较大的鹿种之一，据统计全世界有22个马鹿亚种，在我国 有天山亚种、塔里木亚种、阿勒泰亚种、东北亚种、甘肃亚种、阿拉善亚种、四川亚种和西藏 亚种8个马鹿亚种，主要分布在新疆、青海、甘肃、东北和内蒙古等地区。塔里木马鹿是中国 马鹿种群的一个优秀亚种，对塔里木盆地的荒漠区具有独特的适应性，可耐酷热、耐干旱、 耐风沙、耐高盐碱，因世代在塔里木盆地繁衍生息而得名。塔里木马鹿是名贵的特种经济动 物，以高产茸量且质优而著称，并被国际市场誉为"亚洲之花"。公鹿鹿茸每天增重可达到 100g~180g，生长75d~95d就可锯茸，重量一般可在IOkg以上。塔里木马鹿每年都进行 周期性替代，一般要经过脱盘、生茸、骨化、脱落，再生茸循环过程，每个生长周期可以采两 次鹿茸，第一次在生长开始的第二个月末即每年的4月至6月末，短暂的恢复之后，锯后的 茸角会再次萌发，可以再生长一个半月到8月中旬再锯第二次。塔里木马鹿养殖业是当地 畜牧经济的支柱产业之一，在新疆南部地区为农民增产增收，生活致富起到了及其重要的 作用，同时作为一个品质比较优秀的鹿茸，塔里木马鹿茸值得进行大力开发。 目前，对于马鹿茸生长的分子机制研宄报道极少，有关马鹿茸生长相关基因没有 研宄报道。人工养殖的鹿主要通过割后再生，提高产茸量，但是收割后的马鹿不用药物处 理，虽然马鹿茸能够再生，但产量非常低，即使注射药物，也无法达到头茬茸的生产能力。因 此，再生茸比头茬茸生长速度慢，骨化程度大，产量低。迫切需要研宄提高再生茸产量的机 制，为塔里木马鹿茸大力开发提供线索。通过马鹿茸生长相关基因的开发和研宄，对高产茸 鹿群的选育以提高新疆马鹿茸产量是目前研宄的重要内容，同时对本地经济动物生产性能 提高的重要举措。因此，C-myc基因的序列的发现及其对产茸有显著相关的单核苷酸突变 的发现均有重大意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种人工合成得到促茸塔里木马鹿茸c-myc 基因及其应用。 本专利技术解决其技术问题采用的技术方案是， 本专利技术之一种塔里木马鹿茸c-myc基因，其基因的核苷酸序列如SED ID NO :1所 不O 本专利技术之一种塔里木马鹿茸c-myc基因的克隆方法，包括以下步骤： (1)马鹿茸总RNA提取、纯化； (2) cDNA第一链的合成、纯化：采用SUPERSCRIPT II RT酶和引物GSPl如SED ID NO :2所示，对马鹿茸总RNA进行目的基因第一链cDNA的合成、纯化； (3)马鹿鸾c-myc基因保守序列的克隆：用牛c-myc基因全长序列 (NM001046074.2)设计引物 F:5'CATTCGCGAAACTTTGCCCA3'，如 SED ID N0:3 和 R: 5'CAGGTACAAGCTGGAGGTGG3'，如 SED ID NO :4 所示，以马鹿茸的 mRNA 合成的第一链 cDNA 为 模板进行RT-PCR扩增，PCR产物经1. 0 %的琼脂糖凝胶电泳分离，用琼脂凝胶回收试剂盒回 收、纯化，然后将扩增产物测序，根据测序结果设计全长克隆引物； (4)5'端序列RACE克隆：采用TdT酶和dCTP对纯化后的第一链CDNA进行末 端加上多聚C;接着采用引物GSP2如SED ID N0:5所示和桥连铆钉引物AAP:GGCCACGC GTCGACTAGTACGGGIIGGGIIGGGIIG，如 SED ID NO :6 所示对已经加 dC 尾的第一链 cDNA 进 行PCR第一轮扩增；然后采用引物GSP3如SED ID NO :7所示和桥连通用扩增引物AUAP: GGCCACGCGTCGACTAGTAC如SED ID NO :8所示，进行巢式PCR第二轮扩增，将第二轮PCR产 物进行电泳并对目的条带进行切胶回收纯化； ⑶ 3' 端序列 RACE 克隆：米用逆转录酶 SMARTScribe? Reverse Transcriptase 和引物3'CDS primer A，对总RNA进行逆转录合成cDNA ;接着采用引物3'端497-1如SED ID NO :9所示和UPM :AAAAAAAAAGA，如SED ID NO :10所示，以逆转录合成的cDNA为模板进 行第一轮PCR扩增；然后将第一轮PCR扩增产物稀释50倍，用引物3'端497-2如SED ID NO : 11所示和UPM，进行巢式第二轮PCR扩增；PCR产物进行电泳并对目的条带进行切胶回 收纯化，PCR产物克隆测序。 (6)马鹿茸c-myc基因 cDNA全长克隆：利用DNASTAR将所得到的纯化的保守序列、 5'端序列、3'端序列进行序列拼接，得到马鹿茸c-myc基因 cDNA全长序列。 进一步，对cDNA第一链扩增，5'端序列RACE克隆的PCR第一轮、第二轮扩增，3' 端序列RACE克隆的PCR第一轮、第二轮扩增中PCR反应条件均为94°C预变性lmin，94°C变 性 0· 5min，55°C 退火 0· 5min，72°C 延伸 2min，35 个循环，72°C 终延伸 7min。 本专利技术之一种塔里木马鹿茸c-myc基因在促茸生长中的应用，所述c-myc基因含 有两个单核苷酸多态点。 进一步，所述单核苷酸多态点的基因型为CG。 本专利技术之塔里木马鹿茸c-myc基因改变了鹿茸依赖自然或药物处理的再生茸生 长缓慢现状，实现了鹿茸产品的稳产、高产、质优。实验证明，本专利技术的SNP基因分型CG可 使马鹿茸重13. 441 ± 1.88kg。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术进一步加以说明。 实施例1 :马鹿茸c-myc基因 cDNA全长克隆 1、马鹿茸总RNA提取、纯化：取3-4岁成年马鹿茸皮组织储存于液氮中。 (1)取0. 5-lg组织在液氮中充分碾碎后，加3ml Trizol试剂剧烈震荡以对组织进 行裂解； (2)将上述组织Trizol裂解液转入EP管中，在室温下放置5分钟； (3)在上述EP管中，按照每1ml Trizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管 盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下放置3分钟后，12000g(2-8°C )离心15分钟； (4)去上层水相置于新EP管中，按照每1ml Trizol加0· 5ml异丙醇的量加入异丙 醇，在室温下放置10分钟后，12000g(2-8°c )离心10分钟； (5)弃上清，按照每1ml Trizol加 Iml 75 %乙醇进行洗绦，祸旋混合， 7500g(2-8°C )离心5分钟，弃上清； (6)让沉淀的RNA在室温在自然干燥； (7)用Rnase-free water溶解RNA沉淀，用琼脂糖电泳和紫外分光光度计检测其 浓度。 2、cDNA第一链的合成、纯化： (1)采用SUPERSCRIPT II RT酶和引物GSPl对总RNA进行目的基因第一链cDNA 的合成、纯化，使用RNase Mix对合成的cDNA进行去RNA处理。 a加入下列试剂到0. 5-ml PCR管中【主权项】1. 一种塔里木马鹿鸾c-myc基因，其特征在于，所述c-myc基因的核苷酸序列如SED本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种塔里木马鹿茸c‑myc基因，其特征在于，所述c‑myc基因的核苷酸序列如SED ID NO：1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩春梅，高庆华，王姗姗，孟浩，郑永富，马梦婷，阚凡凡，张勤，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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