一种奥贝胆酸有关物质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种奥贝胆酸有关物质的检测方法。该检测方法包括下述步骤：采用高效液相色谱法，将待测物在C18柱中进行梯度洗脱，即可。

A Method for the Detection of Obeicholic Acid Related Substances

The invention discloses a method for detecting the related substances of obeicholic acid. The detection method includes the following steps: using high performance liquid chromatography, gradient elution of the substance to be measured in C18 column can be done.

【技术实现步骤摘要】
一种奥贝胆酸有关物质的检测方法
本专利技术涉及一种奥贝胆酸有关物质的检测方法。
技术介绍
药品是一类特殊商品，是用来诊断、预防及治疗疾病的一类特殊物质，与人们的健康和生命安危有极其密切的关系，其质量控制极为重要。药物安全性评价的一个重要内容是药物中有关物质的质量分数控制。在药物分析中所称的“有关物质”是指药物中的有机杂质，主要来源于药物活性成分的制备过程，如起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等物质，也可能是制剂在生产、贮藏和运输过程中产生的降解产物、聚合物或晶型转变过程等特征杂质。有关物质的种类与药物的合成路线和制剂工艺密切相关，通过对这些有关物质的测定，可以设法改变其合成路线、实验条件等因素，避免产生有关物质或使其降到最低限度。奥贝胆酸(ObeticholicAcid)，又名INT-747，由美国Intercept制药公司研制开发，适应症为原发性胆汁性肝硬化(PBC)和非酒精性脂肪性肝病(NASH)，该产品已在美国上市。奥贝胆酸是一种半合成的鹅去氧胆酸，也是法尼酯衍生物X受体的特异性激动剂，是二十年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物，市场潜力巨大。奥贝胆酸，化学名为6α-乙基-3α，7α-二羟基-5β-胆烷酸，其结构式如下：奥贝胆酸的有关物质根据合成方法的不同而有差异，目前合成奥贝胆酸的方法有以下几种：专利WO02072598及文献JournalofMedicinalChemistry，2002，45(17)：3569-3572于2002年首次公开报道了包含奥贝胆酸在内的鹅去氧胆酸衍生物的制备方法，由于反应条件苛刻，试剂的毒性较大，在生产中较少采用；原研公司的专利WO2006122977(中国同族专利CN101203526)公开的方法是以7-KLCA为起始原料，分别经过C-24羧酸酯化、3-羟基硅醚保护、7-羰基形成硅烯醇醚、与乙醛羟醛缩合、C-24酯水解、6-亚乙基氢化、6-乙基构型转化和7-羰基的选择性还原八步反应，合成路线如下所示：原研公司的专利CN104781272A提及的检测中间体杂质的HPLC方法对上述路线中的有关物质进行分析，发现图谱部分杂质特征峰无法分离，甚至重合。专利申请CN106749466A公开了的合成工艺如下：合成路线3中的奥贝胆酸的有关物质如下：OB-6、OB-A、OB-B、OB-C、OB-D、OB-E、OB-F、OB-G、OB-H、OB-I，其中OB-F为鹅去氧胆酸，为奥贝胆酸合成工艺的起始物料；OB-A、OB-B、OB-C是奥贝胆酸立体异构体；OB-6是合成工艺中间体杂质，为工艺杂质，OB-D、OB-E、OB-H、OB-I也为工艺合成过程中产生的工艺杂质，OB-G为降解杂质，上述杂质结构见表0：表0奥贝胆酸各杂质名称及结构目前，现有的奥贝胆酸有关物质的检测方法的分离效果不佳。因此，本领域亟需一种分析效果好的奥贝胆酸有关物质的检测方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是现有的奥贝胆酸有关物质的检测方法的分离效果不佳等缺陷，故而，本专利技术提供了一种奥贝胆酸有关物质的检测方法，该方法快速、有效、分离度好、操作简单、成本低，解决了奥贝胆酸特征峰与其异构体、起始物料、关键中间体、工艺杂质及降解杂质特征峰分离和测定的问题。本专利技术提供了一种奥贝胆酸有关物质的检测方法，其包括下述步骤：采用高效液相色谱法，将待测物在C18柱中进行梯度洗脱，即可；所述的待测物含有奥贝胆酸、奥贝胆酸盐和奥贝胆酸有关物质中的一种或多种；所述的梯度洗脱所使用的流动相为流动相A、流动相B和流动相C中的一种或多种；所述的流动相A为酸的水溶液；所述的流动相B为乙腈；所述的流动相C为甲醇；所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱或四段式梯度洗脱；当所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱时，其第一梯度中，流动相A的体积比例(其是指流动相A的体积占流动相总体积的比例，其余的体积比例均同此)为25％～40％(例如32％)、流动相B的体积比例为50％、流动相C的体积比例为10％～25％(例如18％)；其第二梯度中，流动相A的体积比例为0％～5％、流动相B的体积比例为95％～100％、流动相C的体积比例为0％；其第三梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％(例如32％)、流动相B的体积比例为45％～50％、流动相C的体积比例为15％～25％(例如18％)；当所述的梯度洗脱为四段式梯度洗脱时，其第一梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％(例如34％)、流动相B的体积比例为50％、流动相C的体积比例为10％～25％(例如16％)；其第二梯度中，流动相A的体积比例为10％～30％(例如20％)、流动相B的体积比例为60％～70％、流动相C的体积比例为10％～20％；其第三梯度中，流动相A的体积比例为0％～5％、流动相B的体积比例为95％～100％、流动相C的体积比例为0％；其第四梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％(例如34％)、流动相B的体积比例为46％～50％、流动相C的体积比例为14％～25％(例如16％)。在所述的检测方法中，所述的待测物可含有奥贝胆酸有关物质、以及、奥贝胆酸和/或奥贝胆酸盐。在所述的检测方法中，所述的奥贝胆酸盐中的“盐”为药学上可接受的有机或无机盐，例如钙盐、钠盐、钾盐、镁盐、盐酸盐、磷酸盐、硝酸盐、甲酸盐、醋酸盐、乙二酸盐、丙酸盐、酒石酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、碳酸盐、碳酸氢盐、苯甲酸盐、枸橼酸盐和甲磺酸盐中的一种或多种。在所述的检测方法中，所述的奥贝胆酸有关物质为本领域奥贝胆酸的有关物质，例如下述结构中的一种或多种：在所述的检测方法中，所述的待测物还可以含有无机杂质。在所述的检测方法中，所述的待测物还可以含有残留溶剂。在所述的检测方法中，所述的待测物还可以含有药用辅料。在所述的检测方法中，所述的待测物可以包括所述的奥贝胆酸、所述的奥贝胆酸有关物质、所述的无机杂质和所述的残留溶剂，例如由它们组成(又例如奥贝胆酸原料药)。所述的奥贝胆酸原料药中，所述的奥贝胆酸的质量百分比可为97～98％，例如97.8％。所述的奥贝胆酸原料药可为本领域常规的奥贝胆酸原料药，例如按照CN106749466A记载的方法制备的奥贝胆酸原料药。所述的CN106749466A记载的方法可包括下述步骤：(1)催化加氢反应，化合物VI在催化剂作用下催化氢化反应得到化合物VII；(2)构型转化，化合物VII在非亲核性强碱或酸的作用下转化构型得到化合物VII’；(3)还原反应，化合物VII’在还原剂作用下，发生羰基还原反应得到化合物VIII；(4)水解反应，在碱性条件下，化合物VIII经过酯水解得到化合物I；在所述的步骤(1)中，所述的催化剂可选自Pd/C、PtO2、Pt/C、Ru/C、Rh/C和兰尼镍中的一种或多种。在所述的步骤(1)中，所述的催化加氢反应的溶剂可选自乙酸、甲醇、乙醇、四氢呋喃和乙酸乙酯中的一种或多种。在所述的步骤(1)中，所述的催化加氢反应可加入盐酸或醋酸钠调节溶剂的pH。在所述的步骤(2)中，所述的非亲核性强碱可选自三乙胺、甲醇钠、乙醇钠和DBU中的一种或多种。在所述的步骤(2)中，所述的酸可选自盐酸、三甲基氯硅烷、甲磺酸和对甲苯磺酸中的一种或多种。在所述的步骤(2)中，所述的构型转化反应的溶剂可为无水甲醇、无本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种奥贝胆酸有关物质的检测方法，其特征在于，其包括下述步骤：采用高效液相色谱法，将待测物在C18柱中进行梯度洗脱，即可；所述的待测物含有奥贝胆酸、奥贝胆酸盐和奥贝胆酸有关物质中的一种或多种；所述的梯度洗脱所使用的流动相为流动相A、流动相B和流动相C中的一种或多种；所述的流动相A为酸的水溶液；所述的流动相B为乙腈；所述的流动相C为甲醇；所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱或四段式梯度洗脱；当所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱时，其第一梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％、流动相B的体积比例为50％、流动相C的体积比例为10％～25％；其第二梯度中，流动相A的体积比例为0％～5％、流动相B的体积比例为95％～100％、流动相C的体积比例为0％；其第三梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％、流动相B的体积比例为45％～50％、流动相C的体积比例为15％～25％；当所述的梯度洗脱为四段式梯度洗脱时，其第一梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％、流动相B的体积比例为50％、流动相C的体积比例为10％～25％；其第二梯度中，流动相A的体积比例为10％～30％、流动相B的体积比例为60％～70％、流动相C的体积比例为10％～20％；其第三梯度中，流动相A的体积比例为0％～5％、流动相B的体积比例为95％～100％、流动相C的体积比例为0％；其第四梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％、流动相B的体积比例为46％～50％、流动相C的体积比例为14％～25％。...

【技术特征摘要】
1.一种奥贝胆酸有关物质的检测方法，其特征在于，其包括下述步骤：采用高效液相色谱法，将待测物在C18柱中进行梯度洗脱，即可；所述的待测物含有奥贝胆酸、奥贝胆酸盐和奥贝胆酸有关物质中的一种或多种；所述的梯度洗脱所使用的流动相为流动相A、流动相B和流动相C中的一种或多种；所述的流动相A为酸的水溶液；所述的流动相B为乙腈；所述的流动相C为甲醇；所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱或四段式梯度洗脱；当所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱时，其第一梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％、流动相B的体积比例为50％、流动相C的体积比例为10％～25％；其第二梯度中，流动相A的体积比例为0％～5％、流动相B的体积比例为95％～100％、流动相C的体积比例为0％；其第三梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％、流动相B的体积比例为45％～50％、流动相C的体积比例为15％～25％；当所述的梯度洗脱为四段式梯度洗脱时，其第一梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％、流动相B的体积比例为50％、流动相C的体积比例为10％～25％；其第二梯度中，流动相A的体积比例为10％～30％、流动相B的体积比例为60％～70％、流动相C的体积比例为10％～20％；其第三梯度中，流动相A的体积比例为0％～5％、流动相B的体积比例为95％～100％、流动相C的体积比例为0％；其第四梯度中，流动相A的体积比例为25％～40％、流动相B的体积比例为46％～50％、流动相C的体积比例为14％～25％。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的待测物含有奥贝胆酸有关物质、以及、奥贝胆酸和/或奥贝胆酸盐和/或，所述的奥贝胆酸盐中的“盐”为药学上可接受的有机或无机盐；和/或，所述的奥贝胆酸有关物质为下述结构中的一种或多种：和/或，所述的待测物还含有无机杂质；和/或，所述的待测物还含有残留溶剂；和/或，所述的待测物还含有药用辅料；和/或，所述的C18柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶；和/或，所述的C18柱的柱长为100mm～300mm；和/或，所述的C18柱的内径为1mm～10mm；和/或，所述的C18柱的粒径为1μm～10μm；和/或，所述的C18柱的柱温为25～40℃；和/或，所述的流动相A中的酸为挥发性酸；和/或，所述的流动相A的pH为2.0～4.0；和/或，当所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱时，其第一梯度中，流动相A的体积比例为32％；和/或，当所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱时，其第一梯度中，流动相C的体积比例为18％；和/或，当所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱时，其第三梯度中，流动相A的体积比例为32％；和/或，当所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱时，其第三梯度中，流动相C的体积比例为18％；和/或，当所述的梯度洗脱为四段式梯度洗脱时，其第一梯度中，流动相A的体积比例为34％；和/或，当所述的梯度洗脱为四段式梯度洗脱时，其第一梯度中，流动相C的体积比例为16％；和/或，当所述的梯度洗脱为四段式梯度洗脱时，其第二梯度中，流动相A的体积比例为20％；和/或，当所述的梯度洗脱为四段式梯度洗脱时，其第四梯度中，流动相A的体积比例为34％；和/或，当所述的梯度洗脱为四段式梯度洗脱时，其第四梯度中，流动相C的体积比例为16％；和/或，所述的梯度洗脱的进样量为10～100μl；和/或，所述的梯度洗脱的运行时间为40-80min；和/或，所述的梯度洗脱的流速为0.8-1.3ml/min；和/或，所述的检测方法还包括下述步骤：在梯度洗脱后，采用蒸发光散射检测器检测洗脱液。3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的奥贝胆酸盐中的“盐”为钙盐、钠盐、钾盐、镁盐、盐酸盐、磷酸盐、硝酸盐、甲酸盐、醋酸盐、乙二酸盐、丙酸盐、酒石酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、碳酸盐、碳酸氢盐、苯甲酸盐、枸橼酸盐和甲磺酸盐中的一种或多种；和/或，所述的C18柱的柱长为250mm；和/或，所述的C18柱的内径为4.6mm；和/或，所述的C18柱的粒径为5μm；和/或，所述的C18柱的柱温为30℃；和/或，所述的挥发性酸为三氟乙酸、甲酸、乙酸和碳酸中的一种或多种；和/或，所述的流动相A的pH为2.2；和/或，当所述的梯度洗脱为三段式梯度洗脱时，其第一梯度的时间段为0min～37min；其第二梯度的时间段为38min～64min；其第三梯度...

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧，杨建楠，霍立茹，苏勇，张文伯，邱雪飞，王二娟，谢严莉，
申请(专利权)人：南京济群医药科技股份有限公司，上海复旦张江生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32