一种鉴定肺恶性肿瘤生物标记物的方法及其检测试剂盒技术

本发明专利技术提供了用于鉴定肺恶性肿瘤的生物标记物及其应用。所述生物标记物为患者血清经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱(HPLC)得到的游离葡萄糖和甘露糖。本发明专利技术的技术方案具有前处理简单，分析时间短，仪器价格合理，符合常规使用，操作步骤简单易学，检测结果准确性高，只需采血进行HPLC仪分析便可区分正常入和患者，并且所需血清量极少，采血量小于1mL等优点。所得结果显示此分析方法可以快速分析血清中游离的甘露糖和葡萄糖，并可以计算得到甘露糖、葡萄糖糖浓度及二者峰面积，对于研究血清游离甘露糖和葡萄糖与疾病之间的关系、寻找新型肺恶性肿瘤疾病临床检测的标志物有着非常重要的意义。

A Method for Identification of Biomarkers of Lung Malignant Tumors and Its Detection Kit

The invention provides a biomarker for identifying lung malignant tumors and its application. The biomarker is free glucose and mannose obtained by high performance liquid chromatography (HPLC) derived from patient serum by pre-column 1 phenyl 5 methyl pyrazolone (PMP). The technical scheme of the present invention has the advantages of simple pretreatment, short analysis time, reasonable instrument price, conforming to conventional use, simple operation steps and easy learning, high accuracy of detection results, and can distinguish normal admission from patients only by taking blood for analysis with an HPLC instrument, and the required serum volume is very small, and the blood collection volume is less than 1 mL. The results show that this method can rapidly analyze free mannose and glucose in serum, and calculate the concentration and peak area of mannose and glucose. It is very important to study the relationship between serum free mannose and glucose and diseases, and to find new markers for clinical detection of lung malignant tumors.

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定肺恶性肿瘤生物标记物的方法及其检测试剂盒
本专利技术属于医药
，具体涉及用于鉴定肺恶性肿瘤的生物标记物及其检测应用。
技术介绍
肺恶性肿瘤(也被称为肺癌)是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。其特征是肺组织中不受控制的细胞生长，主要包括小细胞肺癌(SCLC，～15％)和非小细胞肺癌(NSCLC，～85％)。NSCLC可进一步分为组织学上分为腺癌(AC，～40％)，鳞状细胞癌(SC，～25％)，大细胞肺癌(LCC，～15％)和其他(～5％)罕见类型，包括腺体肿瘤，类癌和未分化癌。最常见的症状是咳嗽(包括咳血)，体重减轻，呼吸短促和胸痛。在大多数情况下，早期肺癌大多无症状，使早期诊断变得困难。目前肺癌的检测和诊断包括物理和生化方法。物理方法包括X射线，CT(计算机断层扫描)和PET(正电子发射断层扫描)/CT，可以显示肺部异常生长。这些方法也存在一些问题：①早期诊断缺乏敏感性，因为早期肿瘤通常太小而无法检测到；②由于这些方法在肺部检测到的一些可见肿块甚至不是肿瘤，因此假阳性率很高；③由这些方法产生的辐射导致额外癌症的高风险。由于生化检测方法具有较本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于鉴定肺恶性肿瘤的生物标记物，其特征在于：所述生物标记物为血清经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱(HPLC)得到的游离葡萄糖和甘露糖。

【技术特征摘要】
1.用于鉴定肺恶性肿瘤的生物标记物，其特征在于：所述生物标记物为血清经过柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱(HPLC)得到的游离葡萄糖和甘露糖。2.根据权利要求1所述的用于鉴定肺恶性肿瘤的生物标记物，其特征在于：该方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法，包括以下具体步骤：(1)调节pH为7-14：取待检测的血清样品加超纯水于EP管中，加入氢氧化钠，涡旋混匀；(2)PMP衍生：每个样品加入PMP，涡旋混匀，离心后置于烘箱反应；(3)加酸中和反应：将烘箱内的样品取出，放置冷却，每个样品加入盐酸，涡旋混匀；(4)萃取：每管加入有机溶剂，涡旋，离心，移除下层有机溶剂，保留上清；(5)将样品离心，取上清液于装有内插管的棕色上样瓶中，盖紧盖子，离心，待用于高效液相分析；(6)制备葡萄糖和甘露糖的标准曲线；(7)将步骤(5)得到的色谱图与步骤(6)中的标准曲线比对并分析计算，确定葡萄糖、甘露糖的浓度以及葡萄糖与甘露糖峰面积的比值。3.根据权利要求1所述的用于鉴定肺恶性肿瘤的生物标记物，其特征在于：所述高效液相色谱为Agilent1260高效液相系统，AgilentPoroshellEC-C18色谱柱(4.6mm×100mm，2.7μm)，所述步骤(5)中的色谱条件为：检测波长：254nm，带宽4nm；参比波长：350nm，带宽100nm；柱温：37℃；流速：1mL/min；进样体积：20μL；流动相：A相为乙腈，B相为pH为5.5的0.1mol/L乙酸铵-乙酸缓冲溶液。4.根据权利要求3所述的用于鉴定...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽娟，郝翠，矫文捷，韩燕，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：山东,37