The invention discloses a method for detecting monosaccharide components in Osmanthus fragrans by pre-column derivatization HPLC MS/MS. The method is based on the pre column derivatization of 1 phenyl phenyl 3 methyl methyl 5 pyrazolone (PMP), and the simultaneous determination of 6 monosaccharides in Osmanthus fragrans by high performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization mass spectrometry. The method is simple, sensitive, highly selective, high separation efficiency, short injection volume, short analysis time, and multi mode determination, and is suitable for monosaccharide formation of polysaccharides in Osmanthus fragrans. The research provides scientific basis. This method also lays a foundation for the study of other natural products.
【技术实现步骤摘要】
一种柱前衍生化HPLC-MS/MS检测桂花中单糖含量的方法
本专利技术属于多糖组分分析领域，具体涉及一种柱前衍生化HPLC-MS/MS检测桂花中单糖组分的方法。
技术介绍
桂花(OsmanthusfragransLour)属于木犀科(Oleaceae)，是一种观赏植物，在中国南方和中部地区被用作传统民间药物，用于治疗多种疾病。其在中国用作药用植物数千年，并具有广泛的生物学效应，包括可以减弱炎症，作为抗氧化剂起作用，防止衰老并抑制黑素生成。此外，桂花提取物中的主要生物活性成分是类胡萝卜素和酚酸。来自天然药物多糖的分析是广泛的。多糖作为药物研究始于20世纪50年代，截至目前，已发现数百种多糖具有生物活性。多糖在抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、促进免疫等方面都发挥着重要生物活性，而且多糖是生物体内非常重要的一类有机化合物，除参与生物体的构造，作为能源物质、细胞识别的信息分子外，还参与体内物质转化代谢生成为生物体必须的氨基酸、核苷酸、脂肪酸等。桂花多糖是桂花的重要成分之一，但是目前对桂花的研究主要集中在桂花精油方面，而对桂花多糖的单糖成分则很少有报道。HPLC-串联质谱法(...
【技术保护点】
1.一种柱前PMP衍生化HPLC‑MS/MS检测桂花中单糖组分的方法，包括步骤如下：(1)样品处理a、桂花中多糖的提取准确称取10g桂花、200ml的无水乙醇放入500ml圆底烧瓶后进行混合，80℃条件下在恒温水浴锅内冷凝回流一小时，过滤后取滤渣将此操作重复一次，再次过滤和干燥；然后再将得到的滤渣放置在1000ml的圆底烧瓶中并放入400ml的水，90℃条件下在恒温水浴锅中提取1.5h，重复两次；抽滤过后得到滤液，合并两次的滤液，将滤液在旋转蒸发仪内蒸发浓缩至150ml；将4倍体积的无水乙醇加入此浓缩的多糖溶液中，后经离心机离心15min(8000r/min)，干燥得到桂花...
【技术特征摘要】
1.一种柱前PMP衍生化HPLC-MS/MS检测桂花中单糖组分的方法，包括步骤如下：(1)样品处理a、桂花中多糖的提取准确称取10g桂花、200ml的无水乙醇放入500ml圆底烧瓶后进行混合，80℃条件下在恒温水浴锅内冷凝回流一小时，过滤后取滤渣将此操作重复一次，再次过滤和干燥；然后再将得到的滤渣放置在1000ml的圆底烧瓶中并放入400ml的水，90℃条件下在恒温水浴锅中提取1.5h，重复两次；抽滤过后得到滤液，合并两次的滤液，将滤液在旋转蒸发仪内蒸发浓缩至150ml；将4倍体积的无水乙醇加入此浓缩的多糖溶液中，后经离心机离心15min(8000r/min)，干燥得到桂花粗多糖；将蒸馏水加入粗多糖溶解，再加入10ml的Sevage试剂(氯仿：正丁醇＝4:1)，剧烈振摇，室温下用离心机离心5min(3500r/min)；将4倍体积的无水乙醇加入取得的上清液中，沉淀用乙醇与丙酮洗涤，再经抽滤，干燥后得到桂花多糖；b、桂花中多糖的酸水解准确称取步骤a获得的桂花多糖10mg放入10ml的螺纹顶空瓶，加5ml的盐酸溶液(2mol/L)，混匀后密封，然后在90℃下水解3小时，冷却后，离心5min，取得上清液单糖样品水解液，待衍生化；c、单糖的PMP衍生化精密取桂花多糖水解液100μl，置于7ml离心管中，加入100μl1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮甲醇溶液(0.5mol/L)，充分摇匀，在70℃水浴条件下反应30min，冷却室温，再加入适量10％冰乙酸溶液调PH至中性，混匀后加1ml氯仿用于萃取过量的PMP，弃掉下层液体，此操作重复3次，离心10min(转速8000r/min)后收集上清液，最后用0.22μm滤膜过滤，稀释到1000倍后待测；精密称取单糖对照品10mg，于10ml容量瓶中，加氨水至刻度线制成1mg/mL混合单糖标准溶液，依照上述方法PMP衍生处理后待测，所述对照品为甘露糖、核糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖；分别精密称取单糖对照品10.0mg放入到10ml容量瓶中加入5ml氨水，配成2mg/ml的混合标准溶液；然后进行稀释得到一...
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