一种代谢物液相色谱-质谱联用检测方法技术

本发明专利技术公开了一种代谢物液相色谱‑质谱联用检测方法，其包括，待测样品首次上机检测；导入标准品检测数据库文件；准备待测样品首次检测结果下机数据；准备DP、CE组合梯度信息；设定峰高阈值；导出DP、CE优化结果；根据优化检测结果建立DP、CE优化数据库。本发明专利技术大大缩减常规项目DPCE优化条件分析、摸索耗时，本发明专利技术通过2‑氯苯丙氨酸作为通用内标，准确监控样品采集情况，并采用17个混标作为通用质控品，监控仪器波动状态，本发明专利技术大大缩减了数据分析和时间，并实现了对采用过程和仪器波动的准确监控，提高了液相色谱‑质谱串联检测的实验效率。

A METHOD FOR DETERMINATION OF METABOLITES BY LIQUID CHROMATOGRAPHY-MASS SPECTROMETRY

The invention discloses a method for detecting metabolites by liquid chromatography-mass spectrometry, which includes: first on-line detection of the sample to be tested; importing the database file of standard sample detection; preparing the data of first off-line detection results of the sample to be tested; preparing gradient information of DP and CE combination; setting peak and peak thresholds; deriving optimized results of DP and CE; and establishing optimized database of DP and CE based on optimized results. The invention greatly reduces the time-consuming analysis and exploration of DPCE optimization conditions for conventional projects. By using 2_chlorophenylalanine as a general internal standard, the invention accurately monitors sample collection, and uses 17 mixed standards as a general quality control product to monitor instrument fluctuation status. The invention greatly reduces data analysis and time, and realizes accurate monitoring of process and instrument fluctuation, and improves the performance of the method. Experimental efficiency of liquid chromatography-mass spectrometry tandem detection.

【技术实现步骤摘要】
一种代谢物液相色谱-质谱联用检测方法
本专利技术属于物质检测
，具体涉及一种代谢物液相色谱-质谱联用检测方法。
技术介绍
代谢组学是类似基因组学和蛋白质组学，对生物体内的代谢物进行大通量的定性定量额分析，并以此找出各个代谢物彼此之间的相互关系的一门学科。在利用液相色谱-质谱联用系统检测中，由于样品中物质含量高低的不确定性能，往往容易出现样品含量过高导致超出设备检测阈值的现象。通过调节各个目标物质的去簇电压(DeclusteringPotential，DP)和碰撞能量(collisionEnergy，CE)将检测物质阈值调整到有效检测范围内。而调整DP、CE不仅需要操作者有较好的实践经验，还需要人工进行大量的数据处理、组合，十分耗时耗力，特别是高通量样品检测时，每次实验均需平均耗时3～4小时进行数据分析，并且需要多次重复实验验证，直到找到DP、CE优化组合条件，另外，人工数据分析容易出错，造成实验反复失败，因此，如何快速有效的进行DP、CE组合优化，甚至实现不必经过反复多次实验即可直接得出最佳DP、CE组合是现有技术亟待解决的问题。
技术实现思路
本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。鉴于上述的技术缺陷，提出了本专利技术。因此，作为本专利技术其中一个方面，本专利技术克服现有技术中存在的不足，提供一种代谢物液相色谱-质谱联用检测方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种代谢物液相色谱-质谱联用检测方法，其包括，待测样品首次上机检测；导入标准品检测数据库文件；准备待测样品首次检测结果下机数据；准备DP、CE组合梯度信息；设定峰高阈值；导出DP、CE优化结果；根据优化检测结果建立DP、CE优化数据库。作为本专利技术所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法的一种优选方案：所述导入标准品检测数据库文件，包括导入标准品检测数据库文件的DP、CE信息。作为本专利技术所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法的一种优选方案：所述准备待测样品首次检测结果下机数据，包括获得首次上机质谱检测的原始下机积分结果数据。作为本专利技术所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法的一种优选方案：所述准备DP、CE组合梯度信息，包括根据所述标准品检测数据库文件给出DP、CE组合梯度信息。作为本专利技术所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法的一种优选方案：所述根据优化检测结果建立DP、CE优化数据库，包括，根据所述DP、CE优化数据库能够直接选取最优DP、CE条件，不需重复实验验证。作为本专利技术所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法的一种优选方案：还包括，将2-氯苯丙氨酸代替溶剂作为内标，在检测过程中，通过2-氯苯丙氨酸峰面积和保留时间反映实际样本的采集情况；所述2-氯苯丙氨酸浓度为1μg/mL。作为本专利技术所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法的一种优选方案：还包括，使用4,4’-亚甲基双(2-氯苯胺)、对茴香胺、L-酪氨酸甲酯、3-氯苯胺、2，4-二甲基喹啉、磺胺吡啶、阿特拉津、磺胺多辛、DL-亮氨酸、N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯、6-苯基-2-硫脲嘧啶、N-(邻甲苯酰)甘氨酸、2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇、甘草次酸、黄烷酮、ε-己内酯、2-氨基吡啶的混合标样作为通用质控品，每次检测至少进两针通用质控品，根据谱图重叠情况分析检测仪器的状态。作为本专利技术所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法的一种优选方案：以质量比计，所述4,4’-亚甲基双(2-氯苯胺)：对茴香胺：L-酪氨酸甲酯：3-氯苯胺：2，4-二甲基喹啉：磺胺吡啶：阿特拉津：磺胺多辛：DL-亮氨酸：N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯：6-苯基-2-硫脲嘧啶：N-(邻甲苯酰)甘氨酸：2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇：甘草次酸：黄烷酮：ε-己内酯：2-氨基吡啶＝1：0.5：0.5：2：1：0.4：0.1：0.1：0.2：0.5：0.5：1：1：0.1：0.5：2：0.2。作为本专利技术所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法的一种优选方案：所述4,4’-亚甲基双(2-氯苯胺)的浓度为1μg/mL、对茴香胺的浓度为0.5μg/mL、L-酪氨酸甲酯的浓度为0.5μg/mL、3-氯苯胺的浓度为2μg/mL、2，4-二甲基喹啉的浓度为1μg/mL、磺胺吡啶的浓度为0.4μg/mL、阿特拉津的浓度为0.1μg/mL、磺胺多辛的浓度为0.1μg/mL、DL-亮氨酸的浓度为0.2μg/mL、N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯的浓度为0.5μg/mL、6-苯基-2-硫脲嘧啶的浓度为0.5μg/mL、N-(邻甲苯酰)甘氨酸的浓度为1μg/mL、2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇的浓度为1μg/mL、甘草次酸的浓度为0.1μg/mL、黄烷酮的浓度为0.5μg/mL、ε-己内酯的浓度为2μg/mL、2-氨基吡啶的浓度为0.2μg/mL。本专利技术的有益效果：本专利技术大大缩减常规项目DPCE优化条件分析、摸索耗时，此前单个物质检测DPCE参数优化调整数据分析耗时约3～4小时，使用该方法后单个项目DPCE优化调整省去该步骤，能够根据所述DP、CE优化数据库直接选取最优DP、CE条件，并且不需人工进行数据分析；本发自动化生成后续上机所需文件，避免人工处理可能带来的错误，保障了结果的准确有效性。在进行数据处理的同时，DPCE1界面工具会对项目中出现的峰高物质进行记录汇总建库，方便后期相同情况进行数据查询，达到数据积累使用的目的。本专利技术方法从筛选质谱检测峰值过高异常结果到构建新的DP、CE优化条件用于再次检测验证进行自动化，避免人为操作带来的错误；本专利技术将项目中检测的DPCE优化结果进行整理建库，能够根据数据库信息直接判断DPCE优化条件，无需经过实验验证。本专利技术通过2-氯苯丙氨酸作为通用内标，准确监控样品采集情况，并采用17个混标作为通用质控品，监控仪器波动状态，本专利技术大大缩减了数据分析和时间，并实现了对采用过程和仪器波动的准确监控，提高了液相色谱-质谱串联检测的实验效率。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：图1为本专利技术DPCE优化step1界面图。图2为本专利技术DPCE优化step2界面图。图3为本专利技术方法MultiQuant软件参数设置示范。图4为本专利技术检测的样本内标异常的数据图。图5为本专利技术检测的异常样本的出峰图。图6为本专利技术重新采集后正常样本的出峰图。图7为本专利技术质控品在液相色谱-质谱联用仪器上出峰情况图。图8为本专利技术质控品在液相色谱-质谱联用仪器上的峰重叠情况图。图9为在一次验证实验中，本专利技术混标质控品的出峰及峰重叠情况图。图10为在一次验证实验中，已知样本的出峰及峰重叠情况图。图11为在一次验证实验中，本专利技术混标质控品的出峰情况图。图12为在一次验证实验中，已知样本的出峰及峰重叠情况图。图13为在一次验证实验中，本专利技术混标质控品的出峰及峰重叠情况图。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种代谢物液相色谱‑质谱联用检测方法，其特征在于：包括，待测样品首次上机检测；导入标准品检测数据库文件；准备待测样品首次检测结果下机数据；准备DP、CE组合梯度信息；设定峰高阈值；导出DP、CE优化结果；根据优化检测结果建立DP、CE优化数据库。

【技术特征摘要】
1.一种代谢物液相色谱-质谱联用检测方法，其特征在于：包括，待测样品首次上机检测；导入标准品检测数据库文件；准备待测样品首次检测结果下机数据；准备DP、CE组合梯度信息；设定峰高阈值；导出DP、CE优化结果；根据优化检测结果建立DP、CE优化数据库。2.如权利要求1所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法，其特征在于：所述导入标准品检测数据库文件，包括导入标准品检测数据库文件的DP、CE信息。3.如权利要求1或2所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法，其特征在于：所述准备待测样品首次检测结果下机数据，包括获得首次上机质谱检测的原始下机积分结果数据。4.如权利要求1或2所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法，其特征在于：所述准备DP、CE组合梯度信息，包括根据所述标准品检测数据库文件给出DP、CE组合梯度信息。5.如权利要求1或2所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法，其特征在于：所述根据优化检测结果建立DP、CE优化数据库，包括，根据所述DP、CE优化数据库能够直接选取最优DP、CE条件，不需重复实验验证。6.如权利要求1或2所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法，其特征在于：还包括，将2-氯苯丙氨酸代替溶剂作为内标，在检测过程中，通过2-氯苯丙氨酸峰面积和保留时间反映实际样本的采集情况；所述2-氯苯丙氨酸浓度为1μg/mL。7.如权利要求1或2所述的代谢物液相色谱-质谱联用检测方法，其特征在于：还包括，使用4,4’-亚甲基双(2-氯苯胺)、对茴香胺、L-酪氨酸甲酯、3-氯苯胺、2，4-二甲基喹啉、磺胺吡啶、阿特拉津、磺胺多辛、DL-亮氨酸、N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯、6-苯基-2-硫脲嘧啶、N-(...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐堂，高猛，董学奎，王宏，郑彬，石坚，
申请(专利权)人：嘉兴迈维代谢生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33