浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法技术

本发明专利技术属于药物检测领域，公开了一种浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法。该浓缩活心丸中蟾酥的含量以高效液相色谱法测定，检测条件及方法如下：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈‑0.5％磷酸二氢钾溶液＝44:56，用磷酸调节pH值至3.2；检测波长为296nm。先制备对照品溶液与供试品溶液，然后精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。浓缩活心丸每1g含蟾酥以华蟾酥毒基(C26H34O6)和脂蟾毒配基(C24H32O4)的总量计，不得少于1.8mg。

Determination of Bufonis in Concentrated Huoxin Pills

The invention belongs to the field of drug detection, and discloses a method for detecting the content of toad venom in concentrated Huoxin pills. The content of toad venom in the concentrated Huoxin pills was determined by high performance liquid chromatography. The detection conditions and methods were as follows: octadecyl silane bonded silica gel was used as filler; acetonitrile 0.5% potassium dihydrogen phosphate solution = 44:56 was used as mobile phase; pH value was adjusted to 3.2 with phosphoric acid; detection wavelength was 296 nm. First, the reference solution and the test solution were prepared, and then the reference solution and the test solution were precisely absorbed at 10 ml each. The reference solution and the test solution were injected into the liquid chromatograph for determination. Concentrated Huoxin Pills should not be less than 1.8 mg per g of toad venom in the total amount of cinobufogenin (C26H34O6) and lipobufogenin ligand (C24H32O4).

【技术实现步骤摘要】
浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法
本专利技术涉及属于药物检测领域，具体涉及一种浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法。
技术介绍
蟾酥是蟾蜍耳后腺及表皮腺体的分泌物，白色乳状液体或浅黄色浆液，有毒。蟾王蟾酥提取浆液，干燥，上色，密封保存后可以入药。有解毒，消肿，强心，止痛的功效。主治疔疮，痈疽，发背，瘰疬，慢性骨髓炎，咽喉肿痛，小儿疳积，心衰，中风、虫牙痛。在临床上应用于治疗心力衰竭、骨关节结核及慢性骨髓炎瘘孔、恶性肿瘤和用于表面麻醉等。由于蟾酥具有较强的生理活性，同时其毒性也较大，用药不当会出现严重的毒副作用。梁晓萍等专家总结出如长期或过量服用蟾酥可出现循环、消化及神经系统等的中毒症状，因此，对蟾酥及其制剂需要严格控制质量和服用剂量。2015版中国药典规定蟾酥不入汤剂，入丸散内服人体用量0.015～0.03g，按成人60kg体重计算，人的服用剂量为0.00025～0.0005g/kg，对蟾酥的服用剂量有严格的要求。活心丸为2010年度国家药品标准提高品种，现行标准收载于部颁标准中药成方制剂第十八册(标准文号：WS3-B-3452-98)，但在活心丸的原有标准中并没有对蟾酥的含量进行检测，需要一个浓缩活心丸中蟾酥的含量检测方法，对浓缩活心丸进行更全面的质量检测和控制。
技术实现思路
本专利技术要解决浓缩活心丸质量检测原有标准中没有对蟾酥进行定量测定的问题，而提出一种浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法，对浓缩活心丸进行更全面的质量检测和控制。本专利技术提供的浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法，其中所述浓缩活心丸的处方为灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g；所述浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法包括：步骤1、对照品溶液的制备：取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含华蟾酥毒基30μg、脂蟾毒配基20μg的混合溶液；步骤2、供试品溶液的制备：取所述浓缩活心丸研细，取0.4g，精密称定，精密加入乙醇20ml，称定重量，超声处理后，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；步骤3、精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。进一步优化为，在步骤2中供试品取样量为0.4g。进一步优化为，在步骤2中超声处理要求为功率350W,频率37kHz；处理时间为15min。进一步优化为，在步骤2超声处理时间为15min。进一步优化为，在步骤3中色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5％磷酸二氢钾溶液＝44:56为流动相；检测波长为296nm。进一步优化为，在步骤3中流动相用磷酸调节pH值至3.2。优点：本专利技术所述浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法在准确度试验中测得平均加样回收率华蟾酥毒基为100.4％，RSD为0.9％(n＝6)；脂蟾毒配基为99.4％，RSD为1.2％(n＝6)，说明所述方法的准确度较好；精密度实验中测得华蟾酥毒基RSD为0.4％(n＝6)、脂蟾毒配基RSD为0.6％(n＝6)，说明所述方法重现性良好；缺蟾酥阴性对照样品无干扰，说明所述方法专属性强；线性关系考察结果，以进样量(mg)(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，线性回归方程为：华蟾酥毒基y＝752.8827x+0.6190，R＝1；脂蟾毒配基y＝733.3296x+0.0754，R＝1，说明华蟾酥毒基在0.03159～2.106mg及脂蟾毒配基在0.02122～2.12239mg的范围内，线性关系良好，所述方法能够准确测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量。本专利技术所述浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法填补了浓缩活心丸质量检测原标准中蟾酥含量检测的空白，不仅能够有效鉴别活心丸中微量成份蟾酥的有无，也能及时准确检测蟾酥的含量，使得对浓缩活心丸的质量控制更加全面、有效。附图说明图1是蟾酥液相色谱图(A华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品；B样品；C缺蟾酥阴性对照样品)；图2-1是华蟾酥毒基的线性图谱；图2-2脂蟾毒配基的线性图谱；图3是华蟾酥毒基、脂蟾毒配基紫外光谱扫描图；图4是蟾酥液相色谱图(色谱柱A：SymmetryShieldTMRP18；B：UltimateAQ-C18；C：COSMOSILPackedColumn5C18-PAQ)。具体实施方式(一)试验材料(1)仪器：高效液相色谱仪：安捷伦1100；超声波清洗仪：ElmasonicS300H超声波清洗器(功率350W，频率37kHz)；电子天平：Sartorius-CP225D，Sartorius-CP224S；色谱柱：A：SymmetryShieldTMRP18(250mm×4.6mm，5μm)；B：UltimateAQ-C18(250mm×4.6mm，5μm)；C：COSMOSILPackedColumn5C18-PAQ(250mm×4.6mm，5μm)。(2)试剂：乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。(3)对照品：华蟾酥毒基，批号为110803-200605；脂蟾毒配基，批号为110718-201108，含量以98.9％计。均购自中检院。(4)供试品：批号为12030201、12050101、12060101、12070101、12080101的浓缩活心丸，由广州悦康生物制药有限公司提供。(5)阴性样品：缺蟾酥阴性对照样品。由广州悦康生物制药有限公司制备提供。(二)实施例色谱条件与系统适应性试验：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈-0.5％磷酸二氢钾溶液44:56，用磷酸调节pH值至3.2；检测波长为296nm。理论板数按华蟾酥毒基峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备：取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含华蟾酥毒基30μg、脂蟾毒配基20μg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备：分别取上述5批供试品，研细，各取约0.4g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇20ml，称定重量，以功率350W,频率37kHz的超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得各供试品中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量，结果如表1。表1样品含量测定结果以下通过验证试验说明本专利技术检测方法的可行性。(三)验证试验1、准确度(加样回收率试验)考察回收用对照品溶液的制备：分别精密称取华蟾酥毒基对照品0.01053g，置50ml容量瓶中，加乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含华蟾酥毒基0.2106mg的溶液，作为回收用对照品溶液Ⅰ；取质量分数为98.9％的脂蟾毒配基对照品0.01073g，置50ml容量瓶中，加乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含脂蟾毒配基0.2122mg的溶液，作为回收用对照品溶液Ⅱ。取含华蟾酥毒基1.41mg/g、脂蟾毒配基0.69mg/g，批号为12070101的供试品，研细，取6份，每份约0.2g，精密称定，精密加入对照品溶液Ⅰ2ml和对照品溶液Ⅱ1ml。按含量测定方法测定，计算华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的回收率。结果华蟾酥毒基为100.4％本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法，所述浓缩活心丸的处方为灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g，其特征在于，所述浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法包括以下几个步骤：步骤1、对照品溶液的制备：取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含华蟾酥毒基30μg、脂蟾毒配基20μg的混合溶液；步骤2、供试品溶液的制备：取所述浓缩活心丸研细，取0.4g，精密称定，精密加入乙醇20ml，称定重量，超声处理后，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；步骤3、精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。

【技术特征摘要】
1.一种浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法，所述浓缩活心丸的处方为灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g，其特征在于，所述浓缩活心丸中蟾酥含量的检测方法包括以下几个步骤：步骤1、对照品溶液的制备：取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含华蟾酥毒基30μg、脂蟾毒配基20μg的混合溶液；步骤2、供试品溶液的制备：取所述浓缩活心丸研细，取0.4g，精密称定，精密加入乙醇20ml，称定重量，超声处理后，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；步骤3、精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10...

【专利技术属性】
技术研发人员：上官康，
申请(专利权)人：广州悦康生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44