一种预测儿童急性淋巴细胞性白血病的试剂体系及方法技术

技术编号:19954092 阅读:58 留言:0更新日期:2019-01-03 08:29
本发明专利技术涉及生物检测医学分子技术领域,具体涉及一种预测儿童急性淋巴细胞性白血病的试剂体系及方法。目前市场上预测儿童急性淋巴细胞性白血病多以血液生化检测为主,本发明专利技术对基因与疾病相关性上研究发现一系列与儿童白血病发生相关联的基因位点,在这些位点上表现出的人与人之间的差异能一定程度上反映儿童对白血病的先天抵抗力。在以亚洲人研究为主的大量研究基础上,选取2个有代表性的基因位点。采用限制性内切酶的方法检测TP63和IKZF1基因上的单核苷酸多态性,准确性高,特异性好,假阳性假阴性率低,操作简单方便,仪器设备要求低,适应性广,能够科学地评估儿童对白血病的先天抗病能力,帮助预防该病。

A reagent system and method for predicting childhood acute lymphoblastic leukemia

The invention relates to the field of biological detection medical molecular technology, in particular to a reagent system and method for predicting childhood acute lymphoblastic leukemia. At present, most of the predictions of childhood acute lymphoblastic leukemia in the market are based on blood biochemical tests. A series of gene loci associated with childhood leukemia have been found in the study of the correlation between genes and diseases. The differences between human and human on these loci can reflect the childhood's innate resistance to leukemia to a certain extent. Based on a large number of studies in Asia, two representative gene loci were selected. The single nucleotide polymorphisms of TP63 and IKZF1 genes were detected by restriction endonuclease assay with high accuracy, specificity, low false-positive and false-negative rate, simple operation, low equipment requirements and wide adaptability. It can scientifically evaluate children's innate resistance to leukemia and help prevent the disease.

【技术实现步骤摘要】
一种预测儿童急性淋巴细胞性白血病的试剂体系及方法
本专利技术涉及生物检测医学分子
,具体涉及一种预测儿童急性淋巴细胞性白血病的试剂体系及方法。
技术介绍
急性淋巴细胞性白血病(ALL),是最常见的儿童肿瘤性疾病,是指前体B、T或成熟B淋巴细胞发生克隆性异常增殖所致的恶性疾病,在急性白血病中,恶性细胞失去成熟和定向(分化)产生其功能的能力。这些细胞迅速分裂并取代正常细胞。当恶性细胞取代正常的骨髓成分时即发生骨髓衰竭。因为正常细胞的数目减少,此患者就会变得容易出血和感染。急性淋巴细胞性白血病占儿童急性白血病的80%,发病率高峰在3岁至7岁之间。我国小儿急性白血病的发病率约为1/10万。急性淋巴细胞性白血病的发生与遗传、环境等诸多因素有关。1)先天性基因(遗传)因素(30%)儿童急性淋巴细胞白血病为胎内起源,有报告白血病患儿(包括ALL)同胞的白血病发病率比普通人群高2~4倍,单卵双胎中一个发生白血病后,另一个发生白血病的机会高达25%;发病年龄越小,另一个发病的机会越高;当发病年龄>7岁时,另一个发病的机会明显减少,说明白血病的发生有先天性遗传因素参与。2)环境因素(30%)随着现在科技的发达,电子科技产品越来越广泛,辐射随处不在,接触电离辐射有利于白血病的发生。除此之外,一些化学物品如除草剂、杀虫剂、烟草、苯等都与急性非淋巴细胞白血病有关。3)感染因素(20%)孕妇宫内胎儿感染可增加5岁以下儿童患急性淋巴细胞性白血病的危险。急性淋巴细胞性白血病是由遗传因素、环境因素、感染因素等共同作用的结果。急性淋巴细胞性白血病(ALL)是儿童最常见恶性肿瘤,随着诊疗水平的提高及治疗方案的改进,目前儿童急性淋巴细胞性白血病5年生存率较之前已有很大提高,但许多高危病例及特殊亚型仍缺乏有效治疗,化疗副反应所引起的严重合并症仍是治疗过程中面临的巨大挑战。因此,新的治疗策略要为患儿研究更为有效的治疗方案。基因检测已被证明是预测疾病风险的有效手段。通过对急性淋巴细胞性白血病相关某些基因的检测可以对急性淋巴细胞性白血病发生风险进行预测。帮助家长提早发现孩子可能存在的急性淋巴细胞性白血病高风险情况,从而引起足够的重视,在日常的生活中对孩子减少或者避免有害物质,如电离辐射、化学物质的接触,达到尽可能预防的目的。TP63基因是与急性淋巴细胞性白血病相关的基因,参与重要的p53通路,是一个主要的抑癌基因,在抗凋亡通路中,调控正常的B淋巴细胞和慢性淋巴细胞白血病细胞的生存。抑癌基因在检测到DNA发生损坏或细胞有不受控制的生长倾向时,强行启动细胞的自杀程序,所以可以有效抵御癌变。如果抑癌基因的功能减弱,在恶劣环境下细胞发生癌变的可能性也会增加。该基因上的一个单核苷酸多态性位点rs17505102的多态性与急性淋巴细胞性白血病相关。当该位点基因型为CC时,患急性淋巴细胞性白血病风险比未发生突变的低1.2倍;该位点的基因型为GG时,患急性淋巴细胞性白血病的风险则增加1.2倍;GC基因型患近视的风险居中。IKZF1基因编码的转录因子属于锌指DNA结合蛋白家族,可以调控淋巴细胞的分化,它的缺失能够促进儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)。该基因上的一个单核苷酸多态性位点rs6964969的多态性与儿童急性淋巴细胞性白血病高度相关。当该位点基因型为GG时,患儿童急性淋巴细胞性白血病风险比未发生突变的高5倍;该位点的基因型为AA时,患儿童急性淋巴细胞性白血病的风险较低;GA基因型患近视的风险居中。目前市场上预测儿童急性淋巴细胞性白血病多以血液生化检测为主,本专利对基因与疾病相关性上研究发现一系列与儿童白血病发生相关联的基因位点,在这些位点上表现出的人与人之间的差异能一定程度上反映儿童对白血病的先天抵抗力。在以亚洲人研究为主的大量研究基础上,选取2个有代表性的基因位点。采用限制性内切酶的方法检测TP63和IKZF1基因上的单核苷酸多态性,准确性高,特异性好,假阳性假阴性率低,操作简单方便,仪器设备要求低,适应性广,能够科学地评估儿童对白血病的先天抗病能力,帮助预防该病。
技术实现思路
儿童急性淋巴细胞性白血病是遗传因素、环境因素、感染引起的,但目前的急性淋巴细胞性白血病风险预测方法仅针对病发检测,无法预测急性淋巴细胞性白血病的风险性。本专利引入最新研究成果,对TP63和IKZF1基因的急性淋巴细胞性白血病相关单核苷酸多态性进行检测。目前检测单核苷酸多态性的常用方法有PCR-RFLP、基因芯片,sanger测序等方法。PCR-RFLP操作复杂耗时,并且结果可信度差。PCR-RFLP扩增条件要求严格,操作繁琐。基因芯片快速高效,但其造价高。Sanger测序费用较高,且杂合体不易分型。而限制性内酶切的方法检测TP63和IKZF1基因准确性高,特异性好,假阳性假阴性率低,操作简单方便,仪器设备要求低,适应性广。具体实施方式下面结合附图和各个具体实施方式,对本专利技术及其有益技术效果进行详细说明,其中:1)首先通过设计获得检测TP63、IKZF1基因单核苷酸多态性所用的引物。2)样本DNA提取:取口腔粘膜拭子,在口腔内侧反复擦拭二十下,取出拭子折下棉絮部分,至于Chelex100液150μl的1.5ml离心管中,使其浸没标本,再加人蛋白酶K(20mg/m1)20μl,漩涡混匀。50℃水浴消化过夜,煮沸10min,置于冰上静置3min,l2,000r/min离心2min,取上清液,-20℃保存待用。3)进行PCR扩增。PCR扩增条件:4)限制性酶切:将上一步PCR扩增所得产物进行内切酶酶切,按如下体系配置反应,在37℃恒温箱中反应3小时。TP63基因的多态性用RsaI进行检测;IKZF1基因的多态性用NcoI进行检测(RsaI和NcoI均购自NEB公司)。5)结果判读:将上一步所得的酶切产物用1%的琼脂糖凝胶进行电泳后,根据条带大小按照以下指标进行结果判读,简单易识别。附图说明图1为结果判读标准标准。本专利引入最新研究成果,对TP63基因的儿童急性淋巴细胞性白血病相关单核苷酸多态性进行检测,TP63基因突变与儿童急性淋巴细胞性白血病的风险有关。结合对IKZF1基因的多态性检测,反映遗传,环境,感染等因素带来的风险。本专利采用限制性内酶切的方法检测TP63和IKZF1基因准确、准确性高,特异性好,假阳性假阴性率低,操作简单方便,仪器设备要求低,适应性广。实施例一1)设计获得检测TP63、IKZF1基因单核苷酸多态性所用的引物:TP63-For:CAGTGTTCTGGTGCTCTCTCAAGTP63-Rev:GTGTGGCCTCCATGGAAACACAGIKZF1-For:TGCACACATATGTTCATTGCAGIKZF1-Rev:CAGGCCCCAGTGTGTGATGTTC2)样本DNA提取:取口腔粘膜拭子,在口腔内侧反复擦拭二十下,取出拭子折下棉絮部分,至于Chelex100液150μl的1.5ml离心管中,使其浸没标本,再加人蛋白酶K(20mg/m1)20μl,漩涡混匀。50℃水浴消化过夜,煮沸10min,置于冰上静置3min,l2,000r/min离心2min,取上清液,-20℃保存待用。3)PCR扩增:PCR反应体系10×buffer2.本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种预测儿童急性淋巴细胞性白血病的试剂体系及方法其特征在于,所述的试剂体系包括设计获得的检测TP63、IKZF1基因单核苷酸多态性所用的引物:TP63‑For:CAGTGTTCTGGTGCTCTCTCAAGTP63‑Rev:GTGTGGCCTCCATGGAAACACAGIKZF1‑For:TGCACACATATGTTCATTGCAGIKZF1‑Rev:CAGGCCCCAGTGTGTGATGTTC 。

【技术特征摘要】
1.一种预测儿童急性淋巴细胞性白血病的试剂体系及方法其特征在于,所述的试剂体系包括设计获得的检测TP63、IKZF1基因单核苷酸多态性所用的引物:TP63-For:CAGTGTTCTGGTGCTCTCTCAAGTP63-Rev:GTGTGGCCTCCATGGAAACACAGIKZF1-For:TGCACACATATGTTCATTGCAGIKZF1-Rev:CAGGCCCCAGTGTGTGATGTTC。2.根据权利要求1所述的TP63、IKZF1基因单核苷酸多态性所用的引物,其特征在于:所述扩增引物包括根据TP63(rs4598542位点)和IKZF1(rs6...

【专利技术属性】
技术研发人员:任贺
申请(专利权)人:天津脉络医学检验有限公司
类型:发明
国别省市:天津,12

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