CYP2C19基因多态性检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了CYP2C19基因多态性检测试剂盒。本发明专利技术试剂盒具有如下优点：(1)检测灵敏度高，最低检测限为62.5pg DNA；(2)操作简便，无需专业知识，可以实现床旁检测；(3)检测时间短，最短只需45分钟；(4)检测特异性高，使用特异性的荧光探针，具有很高的准确性；(5)无需核酸提取，加入低熔点琼脂糖(agarose)，很大程度避免了PCR污染。本发明专利技术的试剂盒搭配ParaDNA基因扩增检测仪器实现床旁检测(POCT)，可用于在临床上指导氯吡格雷和伏立康唑用药。

【技术实现步骤摘要】
CYP2C19基因多态性检测试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及CYP2C19基因多态性检测试剂盒。
技术介绍
CYP2C19即细胞色素P450同工酶2C19，涉及多种药物的代谢，包括氯吡格雷、S-美芬妥英、依他普仑、丙咪嗪、多种质子泵抑制剂(如兰索拉唑、奥美拉唑)、伏立康唑、地西泮和去甲西泮等药物的代谢。CYP2C19基因位于人类第10号染色体上，该基因的多态性会导致其编码酶活性出现较大的个体差异。CYP2C19基因多态性在不同人种分布差异较大，其中，*1、*2、*3和*17在不同的人群中所占的比例比较稳定并且较高。其中，CYP2C19*1编码正常功能的酶；CYP2C19*2导致剪接缺失，CYP2C19*3为终止密码子突变，二者会导致编码的酶活性丧失；而CYP2C19*17(rs12248560)可引起CYP2C19基因编码的酶活性增强，代谢底物的能力增强。这些不同的CYP2C19基因使人群出现超快代谢者(ultrarapidmetabolizer，UM)、快代谢者(extensivemetabolizer，EM)、中间代谢者(intermediatemetabolizer本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测CYP2C19基因多态性的成套引物，其由成套引物甲、成套引物乙和成套引物丙组成；所述成套引物甲由用于检测rs4244285位点的引物对甲和探针甲组成；所述引物对甲由引物1和引物2组成；所述成套引物乙由用于检测rs4986893位点的引物对乙和探针乙组成；所述引物对乙由引物3和引物4组成；所述成套引物丙由用于检测rs12248560位点的引物对丙和探针丙组成；所述引物对丙由引物5和引物6组成；所述引物1为如下a1)或a2)：a1)序列1所示的单链DNA分子；a2)将a1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与a1)限定的单链DNA分子具有相同功能的...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测CYP2C19基因多态性的成套引物，其由成套引物甲、成套引物乙和成套引物丙组成；所述成套引物甲由用于检测rs4244285位点的引物对甲和探针甲组成；所述引物对甲由引物1和引物2组成；所述成套引物乙由用于检测rs4986893位点的引物对乙和探针乙组成；所述引物对乙由引物3和引物4组成；所述成套引物丙由用于检测rs12248560位点的引物对丙和探针丙组成；所述引物对丙由引物5和引物6组成；所述引物1为如下a1)或a2)：a1)序列1所示的单链DNA分子；a2)将a1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与a1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物2为如下b1)或b2)：b1)序列2所示的单链DNA分子；b2)将b1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与b1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物3为如下c1)或c2)：c1)序列3所示的单链DNA分子；c2)将c1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与a1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物4为如下d1)或d2)：d1)序列4所示的单链DNA分子；d2)将d1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与b1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物5为如下e1)或e2)：e1)序列5所示的单链DNA分子；e2)将e1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与a1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物6为如下f1)或f2)：f1)序列6所示的单链DNA分子；f2)将f1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与b1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述探针甲为如下g1)或g2)：g1)序列7所示的单链DNA分子；g2)将g1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与c1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述探针乙为如下h1)或h2)：h1)序列8所示的单链DNA分子；h2)将h1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与c1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述探针丙为如下i1)或i2)：i1)序列9所示的单链DNA分子；i2)将i1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与c1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子。2.根据权利要求1所示的成套引物，其特征在于：所述成套引物甲中，所述引物1、所述引物2和所述探针甲的摩尔量比为(1-5):(1-5):1；所述成套引物乙中，所述引物3、所述引物4和所述探针乙的摩尔量比为(1-5):(1-5):1；所述成套引物丙中，所述引物5、所述引物6和所述探针丙的摩尔量比为(1-5):(1-5):1。3.根据权利要求1或2所述的成套引物，其特征在于：所述探针甲的第2位和第7位碱基均为荧光基团修饰的碱基T，所述荧光基团具体为FAM；所述探针乙的第5位和第9位碱基均为荧光基团修饰的碱基T，所述荧光基团具体为FAM；所述探针丙的第9位和第12位碱基均为荧光基团修饰的碱基T，所述荧光基团具体为FAM。4.一种用于检测CYP2C19基因多态性的PCR试剂，其包括权利要求1-3中任一所述的成套引物和DNA聚合酶。5.根据权利要求4所述的PCR试剂，其特征在于：所述DNA聚合酶为PhireHotstartIIDNA聚合酶；所述PCR试剂由所述引物1、所述引物2、所述探针甲、所述PhireHotstartIIDNA聚合酶、琼脂糖、dNTPs、buffer和水组成；所述PCR试剂由所述引物3、所述引物4、所述探针乙、所述PhireHotstartIIDNA聚合酶、琼脂糖、dNTPs、buffer和水组成；所述PCR试剂由所述引物5、所述引物6、所述探针丙、所述PhireHotstartIIDNA聚合酶、琼脂糖、dNTPs、buffer和水组成；所述引物1或引物3或引物5在所述PCR试剂中的浓度均为(0.01-5)μM；所述引物2或引物4或引物6在所述PCR试剂中的浓度均为(0.01-5)μM；所述探针甲或探针乙或引物丙在所述PCR试剂中的浓度均为(0.01-5)μM；所述PhireHotstartIIDNA聚合酶在所述PCR试剂中的浓度为(0.05-5)U/μL；所述琼脂糖在所述PCR试剂中的质量分数为(0.1-10)％。6.一种用于检测CYP2C19基因多态性的试剂盒，其包括权利要求1-3中任一所述的成套引物或权利要求4或5所述的PCR试剂。7.权利要求1-3中任一所述的成套引物或权利要求4或5所述的PCR试剂或权利要求6所述的试剂盒在如下m1)-m8)中任一种中的应用：m1)制备检测或辅助检测CYP2C19基因多态位点的产品；m2)检测或辅助检测CYP2C19基因多态位点；m3)制备检测或辅助检测待测患者CYP2C19基因型的产品；m4)检测或辅助检测待测患者CYP2C19基因型；m5...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴维·约翰·弗伦奇，莫妮卡·帕纳苏，杨松江，
申请(专利权)人：滨江华康北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11