一种测定奥贝胆酸原料药有关物质的方法技术

本发明专利技术建立了一种能够控制奥贝胆酸有关物质的检测方法，具体地，选择适当的溶剂，通过HPLC‑ELSD对样品进行检测，已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分对照品对产品的有关物质进行控制。

A method for determination of related substances in raw materials of OBE cholic acid

A method for the determination of related substances in obecholic acid is established. Specifically, suitable solvents are selected and the samples are detected by HPLC ELSD. The known impurities are determined by external standard method. The unknown impurities and total impurities are controlled by 1% of the principal components of the product.

【技术实现步骤摘要】
一种测定奥贝胆酸原料药有关物质的方法
本专利技术涉及原料药有关物质的测定，具体的，本专利技术涉及奥贝胆酸原料药有关物质的测定。
技术介绍
奥贝胆酸(OBDS)是鹅去氧胆酸的结构修饰物6-乙基鹅去氧胆酸,它是Intercept制药公司开发的一种法尼酯X受体激动剂，可通过活化法尼醇X受体，间接抑制胆酸生物合成的限速酶细胞色素7A1(CYP7A1)的基因表达，进而抑制胆酸合成，可用于治疗原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。非酒精性脂肪肝炎是一种脂肪肝疾病，据Intercept称，非酒精性脂肪肝炎到2020年有望成为肝脏移植的主要因素。这种疾病目前尚无获得批准的治疗药物，这就催生了一个潜在重磅级的市场，促使生物制药公司在这一领域投入巨资进行药物研发。奥贝胆酸具有较好的临床价值和应用前景，国内外的研究所和药企均十分重视对该药的研发和生产。目前，由于该原料药为三萜类化合物，没有共轭体系，紫外吸收很弱，原料有关物质的控制是难点，检索国内外相关文献及专利，均未见相关检测方法的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于建立一种能够控制奥贝胆酸有关物质的检测方法，具体地，选择适当的溶剂，通过HPLC-ELSD(蒸发光检测器)对样品进行检测，已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分对照品对产品的有关物质进行控制；由于蒸发光检测器灵敏度较差，需要通过适当溶剂的选择，增大样品浓度及进样量，才可满足测定要求；但是，在样品浓度和进样量增大的情况下，主峰严重过载，如果采用面积归一化及主成分自身对照法，均存在较大偏差，若采用外标法，能准确的对杂质的含量进行测定，确保药品的质量，该方法具有以下优点：1、采用适当的溶剂溶解OBDS，可使溶解度达到15-30mg/ml；2、能够将有关物质有效分离、并且能够量化控制；3、该方法具有普遍适用性，适用于向生产公司转移；4、该方法具有足够的灵敏度，可以对杂质进行有效控制。本专利技术提供一种能够控制奥贝胆酸有关物质的检测方法，步骤为：1)使用乙腈和水混合溶剂溶解奥贝胆酸原料药：2)通过HPLC-ELSD对样品进行检测，色谱条件为：使用C18耐酸色谱柱，流动相为乙腈和0.1％甲酸；3)已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分对照品对产品的有关物质进行控制。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述混合溶剂乙腈和水体积比为75：25-85:15，优选地，其体积比为80:20。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述样品的浓度为15-30mg/ml，优选地，所述样品浓度为20mg/ml。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述ELSD的漂移管温度为35-40度。在本专利技术的一个具体实施方案中，色谱柱为C18酸性色谱柱，优选地，色谱柱为ZORBAXSB-C18色谱柱，其参数为4.6*250mm,5um在本专利技术的一个具体实施方案中，流动相为乙腈和0.1％甲酸，其体积比为50:50-60:40，优选地，其体积比为55:45。在本专利技术的一个具体实施方案中，流动相的流速为0.2-1.2ml/min，优选地，流动相的流速为1.0ml/min。附图说明图1：在稀释剂为乙腈：水(80:20，v/v)条件下，主峰平头，对称性良好。图2：稀释剂为乙腈：水(90:10，v/v)条件下，主峰峰形前沿。图3：最优流动相条件乙腈-0.1％甲酸水(55：45，v/v)条件下奥贝胆酸和各杂质分离情况，各峰的保留时间如各峰标注所示，从左向右顺序依次为D-1、SM1、D-5、D-6、D-2、OBDS、D-4。具体实施方式以下实施例用于进一步理解本专利技术，但不是对本专利技术的限制。奥贝胆酸原料药及其中间物质的制备参考CN104781272A。实施例1：稀释剂的选择及溶液浓度仪器和条件：Agilent1260液相色谱仪，泵的型号为G1311A，紫外检测器型号G1315D，及Chemstation处理软件，色谱柱：AgilentZorbaxSB-C18(250*4.6mm，5μm)，蒸发光散射检测器(ELSD)，流动相：乙腈-0.1％甲酸水(55:45，v/v)，流速1ml/min，进样量20μl，ELSD的漂移管温度为38度；定量方式：已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分对照品对产品的有关物质进行控制。表1：试验步骤及结论：结论：稀释剂体积比范围为75:25-85:15，样品溶解良好，峰型良好。最佳稀释剂为乙腈：水为80：20。结果参见图1和2。溶液浓度的选择:结论：样品浓度范围为15mg/ml-30mg/ml之间，该浓度范围，峰形较好，且能满足样品测定的限度要求。实施例2：蒸发光散射检测器参数的选择仪器和条件：Agilent1260液相色谱仪，泵的型号为G1311A，紫外检测器型号G1315D，及Chemstation处理软件，色谱柱：AgilentZorbaxSB-C18(250*4.6mm，5μm)，蒸发光散射检测器(ELSD)，溶剂为乙腈和水(80:20，v/v)，溶液浓度为20mg/ml，流动相：乙腈-0.1％甲酸水(55:45，v/v)，流速1ml/min，进样量20μl，ELSD的漂移管温度为38度；定量方式：已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分对照品对产品的有关物质进行控制试验步骤:采用上述色谱条件，调整不同漂移管温度，以谱图的噪声(6*SD)及峰形为考察标准，进行优化。表2：试验结果：漂移管温度(度)噪声(6*SD)及峰形30-34未出峰35-400.13，峰形好41-45峰形差结论：漂移管温度为35-40度峰型良好。实施例3：流动相比例的确定仪器和条件：Agilent1260液相色谱仪，泵的型号为G1311A，紫外检测器型号G1315D，及Chemstation处理软件，色谱柱：AgilentZorbaxSB-C18(250*4.6mm，5μm)，蒸发光散射检测器(ELSD)，溶剂为乙腈和水(80:20，v/v)，溶液浓度为20mg/ml，流动相：乙腈-0.1％甲酸水，流速1ml/min，进样量20μl，ELSD的漂移管温度为38度；定量方式：已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分对照品对产品的有关物质进行控制。试验步骤：系统适用性溶液：取OBDS及各杂质适量，精密称定，置同一容量瓶中，稀释剂稀释定容至刻度，摇匀，即得(OBDS浓度20mg/ml,各杂质浓度0.1mg/ml)。采用上述色谱条件，调整不同流动相比例，以杂质分离度为考察指标，对流动相的比例进行优化。表3：试验结果：结论：流动相乙腈-0.1％甲酸水比例为50:50-60:40，v/v，各杂质可完全分离最优流动相条件为乙腈-0.1％甲酸水为55：45(v/v)，该条件下奥贝胆酸和各杂质分离情况如下表所示(参见附图3)：表4：结论：采用该洗脱条件，各杂质的分离度均符合要求。实施例4：色谱柱类型的确定仪器和条件：Agilent1260液相色谱仪，泵的型号为G1311A，紫外检测器型号G1315D，及Chemstation处理软件，蒸发光散射检测器(ELSD)，溶剂为乙腈和水(80:20，v/v)，溶液浓度为20mg/ml，流动相：乙腈-0.1％甲酸水(55:45，v/v)，流速1ml/min，进样量20μl,ELSD的漂移管温度为38度；定量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种奥贝胆酸有关物质的检测方法，步骤为：1)使用乙腈和水混合溶剂溶解奥贝胆酸得到样品；2)通过HPLC‑ELSD对所述样品进行检测，色谱条件为：使用C18耐酸色谱柱，流动相为乙腈和0.1％甲酸；3)所述样品中的已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分作为对照品，对奥贝胆酸的有关物质进行控制。

【技术特征摘要】
1.一种奥贝胆酸有关物质的检测方法，步骤为：1)使用乙腈和水混合溶剂溶解奥贝胆酸得到样品；2)通过HPLC-ELSD对所述样品进行检测，色谱条件为：使用C18耐酸色谱柱，流动相为乙腈和0.1％甲酸；3)所述样品中的已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分作为对照品，对奥贝胆酸的有关物质进行控制。2.权利要求1的检测方法，所述混合溶剂中乙腈和水体积比为75:25-85:15，优选地，所述混合溶剂中乙腈和水体积比为80:20。3.权利要求1或2的检测方法，其中所述样品的浓度为15-30mg/ml，优选地，其中所述样品的浓度为20mg/ml。4.权利要求3的检测方法，其中所述ELSD的漂移管温度为35-40度。5.权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李赛雷，王海，张希玉，
申请(专利权)人：亚宝药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山西,14