高效便捷提取水稻DNA的方法技术

本申请公开了一种高效便捷提取水稻DNA的方法，包括如下步骤：(1)将200μL96孔PCR板置于冰上，用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上；(2)每孔加入70μL缓冲液A，用封板膜封好，立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃，保持10min；(3)取出平板，迅速加入等体积的缓冲液B，混匀。步骤(3)中的提取液1μL能够直接作为模板DNA进行PCR检测。本发明专利技术方法利用PCR板高效便捷提取水稻DNA，并缩短PCR加样时间。

【技术实现步骤摘要】
高效便捷提取水稻DNA的方法
本专利技术涉及分子生物学遗传育种
，具体地说涉及一种利用PCR板高效便捷提取水稻DNA的方法。
技术介绍
DNA的提取是植物分子遗传学及遗传工程的前提。通常DNA提取方法需要满足以下几个主要条件：所得DNA具备理想的纯度；DNA完整，断裂少，降解程度小；方法方便便捷，成本低。提高基因组DNA制备的效率和降低成本是从事DNA分子标记工作者共同关心的问题。目前，关于水稻基因组DNA提取方法有诸多报道，但常规提取方法如CTAB法和大量面市的DNA提取试剂盒，虽然可提到高质量的DNA，但提取过程烦琐，成本较高，不便于应用在大规模的基因型检测作业中。而一些简易的适用于分子标记辅助选择、作图群体、突变体筛选、种子检验等需要大批量样品进行基因型分析的DNA提取方法，虽然已有不少简化，但仍存在操作步骤复杂、成本较高或其制备的模板DNA的扩增结果不够稳定或只适用于叶片DNA的提取等问题，因而还需进一步探索高效、快速、简便、低成本的DNA提取方法
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于，提供了一种利用PCR板高效便捷提取水稻DNA，并缩短PCR加样时间的方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种高效便捷提取水稻DNA的方法，包括如下步骤：(1)将200μL96孔PCR板置于冰上，用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上；(2)每孔加入70μL缓冲液A，用封板膜封好，立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃，保持10min；(3)取出平板，迅速加入等体积的缓冲液B，混匀。步骤(3)中的提取液1μL能够直接作为模板DNA进行PCR检测。进一步的，如需存留一周以上的时间进行PCR检测，则用排枪吸取上述提取液40μL到一块新的200μL96孔PCR孔板内，加入3倍提取液体积的TE缓冲液；放入4℃冰箱保存，备用。步骤(2)中所述缓冲液A为新鲜溶液。步骤(2)中所述缓冲液A进一步包括：800μL20％Tween20。步骤(2)中所述缓冲液A进一步包括：160μL5mol/LNaOH。步骤(2)中所述缓冲液A进一步包括：7.04mLddH2O步骤(3)中所述缓冲液B进一步包括：1mLpH8.01mol/LTris-HCl。步骤(3)中所述缓冲液B进一步包括：40μLpH8.00.5mol/LEDTA。步骤(3)中所述缓冲液B进一步包括：8.96mLddH2O。本专利技术有益的技术效果包括：(1)本专利技术仅用NaOH、Tween20、Tris-HCl和EDTA4种化学试剂，共140μL提取液，成本低。(2)本专利技术操作简便，仅需3步，每人每天可以提取上千份样品。(3)本专利技术仪器设备简单，只需常规的PCR仪。(4)本专利技术使用96孔PCR板提取DNA，使用排枪移取提取液，可缩短进一步PCR加样的时间。附图说明图1是盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的叶片取样后的PCR板；图2是使用盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的叶片利用PCR板提取的DNA和传统CTAB法提取的DNA电泳的对比图(1-8为PCR板提取的DNA电泳图，9-16为传统CTAB法提取的电泳图)；图3是使用盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的干籽粒利用PCR板提取的DNA和传统CTAB法提取的DNA电泳的对比图(1-8为PCR板提取的DNA电泳图，9-16为传统CTAB法提取的电泳图)；图4是使用盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的根利用PCR板提取的DNA和传统CTAB法提取的DNA电泳的对比图(1-8为PCR板提取的DNA电泳图，9-16为传统CTAB法提取的电泳图)。具体实施方式下面结合实施例详述本专利技术。为使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚、明确，以下参照附图并举实施例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术并不局限于这些实施例。为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种利用PCR板高效便捷提取水稻DNA的方法。一种利用PCR板高效便捷提取水稻DNA的方法，包括如下步骤：(1)将200μL96孔PCR板置于冰上，用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上(图1)；(2)每孔加入70μL缓冲液A，用封板膜封好，立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃，保持10min；(3)取出平板，迅速加入等体积的缓冲液B，混匀。进一步的，步骤(3)中的提取液1μL可直接作为模板DNA进行PCR检测进一步的，如需存留一段时间进行PCR检测(1周以后)，用排枪吸取上述提取液40μL(根据需要决定吸取量)到一块新的200μL96孔PCR孔板内，加入3倍提取液体积的TE缓冲液。放入4℃冰箱保存，备用。进一步地，步骤(2)中所述缓冲液A为新鲜溶液。进一步地，步骤(2)中所述缓冲液A包含：800μL20％Tween20，160μL5mol/LNaOH，7.04mLddH2O(以整块96孔PCR板计)进一步地，步骤(3)中所述缓冲液B包含：1mL1mol/LTris-HCl(pH8.0)，40μL0.5mol/LEDTA(pH8.0)，8.96mLddH2O。本专利技术同样适用于提取水稻干籽粒或水稻根的基因组DNA。中所述的水稻干籽粒不需要去壳，但需压碎。中所述的水稻干籽粒，若取半粒籽粒提取DNA，则用刀片切下无胚的一半即可。本专利技术还提供上述DNA提取的方法在水稻中的应用。实施例1用于提取水稻DNA的材料为：盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的叶片。将200μL96孔PCR板置于冰上，用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上。每份材料放置两行共24孔。每孔加入70μL缓冲液A，用封板膜封好，立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃，保持10min；取出平板，迅速加入等体积的缓冲液B，混匀。取0.15g琼脂糖粉，加入15mL蒸馏水，用微波炉加热至透明，制备1％的琼脂糖胶。分别取A1、B2、C3、D4、E5、F6、H7、I8中的提取液10μL，混合Buffer加入琼脂糖胶孔中，110V，30min电泳后，置于凝胶成像仪中拍摄。实施例2用于提取水稻DNA的材料为：盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的干籽粒。将200μL96孔PCR板置于冰上，将干籽粒压碎后，放入PCR板上。每份材料放置两行共24孔。每孔加入70μL缓冲液A，用封板膜封好，立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃，保持10min；取出平板，迅速加入等体积的缓冲液B，混匀。取0.15g琼脂糖粉，加入15mL蒸馏水，用微波炉加热至透明，制备1％的琼脂糖胶。分别取A1、B2、C3、D4、E5、F6、H7、I8中的提取液10μL，混合Buffer加入琼脂糖胶孔中，110V，30min电泳后，置于凝胶成像仪中拍摄。实施例3用于提取水稻DNA的材料为：盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的根。将200μL96孔PCR板置于冰上，用剪刀取10mg水稻根放入PCR板上(图1)；每份材料放置两行共24孔。每孔加入70μL缓冲液A，用封板膜封好，立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃，保持10min；取出平板，迅速加入等体积的缓冲液B，混匀。取0.15g琼脂糖粉，加入15mL蒸馏水，用微波炉加热至透明，制备1％的琼脂糖胶。分别取A1、B2、C3、D4、E5、F6、H7、I8中的提取液10μL，混合Buffer加入琼脂糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效便捷提取水稻DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将200μL96孔PCR板置于冰上，用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上；(2)每孔加入70μL缓冲液A，用封板膜封好，立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃，保持10min；(3)取出平板，迅速加入等体积的缓冲液B，混匀。

【技术特征摘要】
1.一种高效便捷提取水稻DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将200μL96孔PCR板置于冰上，用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上；(2)每孔加入70μL缓冲液A，用封板膜封好，立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃，保持10min；(3)取出平板，迅速加入等体积的缓冲液B，混匀。2.根据权利要求1所述高效便捷提取水稻DNA的方法，其特征在于，进一步的，步骤(3)中的提取液1μL能够直接作为模板DNA进行PCR检测。3.根据权利要求1所述高效便捷提取水稻DNA的方法，其特征在于，进一步的，如需存留一周以上的时间进行PCR检测，则用排枪吸取上述提取液40μL到一块新的200μL96孔PCR孔板内，加入3倍提取液体积的TE缓冲液；放入4℃冰箱保存，备用。4.根据权利要求1所述高效便捷提取水稻DNA的方法，其特征在于，进一步地，步骤(2)中所述缓冲液A为新鲜溶液。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳音，张国栋，邵晓宇，邹丹丹，张继雨，张佩，王晶，米铁柱，
申请(专利权)人：青岛袁策生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37