一种检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种检测试剂盒，包括试剂盒体；所述试剂盒体由PCR检测试剂存储仓及质控品存储仓构成；所述PCR检测试剂存储仓包括甲型流感病毒PT‑PCR反应液存储管、甲型H1N1流感病毒PT‑PCR反应液存储管、PT‑PCR缓冲液存储管和酶混合液存储管；所述质控品存储仓由阴性质控品存储管、甲型H1N1阳性质控品存储管和甲型阳性质控品存储管组成；本实用新型专利技术的检测试剂盒，能够对特异型体系的甲型H1N1流感病毒及通用型的甲型流感病毒进行双重检测，检测结果可信度更高；通过双重检测甲型H1N1流感病毒，检测结果相互印证，使检测结果更加可靠。

A detection kit

The utility model discloses a detection kit, including a kit body, which is composed of a PCR detection kit storehouse and a quality control substance storehouse; the PCR detection kit storehouse comprises a influenza A virus PT_PCR reaction liquid storage tube, a H1N1 influenza virus PT_PCR reaction liquid storage tube, and a PT_PCR buffer storage. The quality control warehouse is composed of a negative control material storage tube, a H1N1 positive quality control material storage tube and a positive quality control material storage tube; the testing agent box of the utility model can double detect the A H1N1 influenza virus of the special type system and the universal A influenza virus. Through double detection of influenza A (H1N1) virus, the results of the test corroborate each other, making the test results more reliable.

【技术实现步骤摘要】
一种检测试剂盒
本技术涉及一种试剂盒，具体涉及一种检测试剂盒，属于生物检测

技术介绍
流行性感冒（influenza，简称流感）是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，临床上具有高热、乏力、全身肌肉酸痛和轻度呼吸道等症状，该疾病病程短，有自限性，中年人伴有慢性呼吸道疾病或心脏病患者易并发肺炎；流感病毒，尤其是甲型流感病毒极易变异，容易爆发大规模流行；其中甲型H1N1流感病毒传播速度快，可由人传染给猪，猪传染给人，也可在人群间传播；目前国内外检验确诊的方法主要有：1）甲型H1N1流感病毒的核酸扩增，2）细胞培养的方法分离鉴定甲型H1N1流感病毒，3）甲型H1N1流感抗原检查，4）血清学检查等，但这些方法都费时耗力，不适于快速的检验诊断；而目前对病毒检测最有效、最灵敏、最准确的方法就是荧光定量PCR(聚合酶链式反应)；PCR技术已广泛应用于动物疫病检测，该技术主要是基于病原微生物核酸的特异性，针对靶标设计特异性引物对DNA或RNA片段进行指数扩增；实时荧光PCR技术由传统PCR技术发展而来，实时荧光PCR在反应体系中加入标记荧光基团的探针，在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号出现的先后顺序来即时分析DNA或RNA样本的拷贝数；实时荧光PCR与传统PCR法相比，一方面加入的TaqMan探针在反应中只与模板的特异序列结合，不进行延伸，减少错配，提高检测准确性和特异性；另一方面实时荧光PCR在封闭的体系中进行扩增和实时检测，无需电泳就可以对结果进行分析，避免了传统PCR产物的污染，自动化程度高，重复性好，检测周期短，广泛应用于科研和临床检测；因此，应用荧光PCR技术建立甲型H1N1流感病毒检测方法对于快速、准确的检测甲型H1N1流感病毒具有重要的意义。
技术实现思路
为解决上述问题，本技术提出了一种检测试剂盒，能够对特异型体系的甲型H1N1流感病毒及通用型的甲型流感病毒进行双重检测，检测结果可信度更高。本技术的检测试剂盒，包括试剂盒体；所述试剂盒体由PCR检测试剂存储仓及质控品存储仓构成；所述PCR检测试剂存储仓包括甲型流感病毒PT-PCR反应液存储管、甲型H1N1流感病毒PT-PCR反应液存储管、PT-PCR缓冲液存储管和酶混合液存储管；所述质控品存储仓由阴性质控品存储管、甲型H1N1阳性质控品存储管和甲型阳性质控品存储管组成；所述甲型流感病毒PT-PCR反应液存储管中存放有甲型流感病毒PT-PCR反应液；所述甲型流感病毒PT-PCR反应液由甲型流感病毒特异引物和甲型流感病毒TaqMan荧光探针组成；所述甲型流感病毒特异引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物如SeqIDNo.1所示序列；所述反向引物如SeqIDNo.2所示序列；所述甲型流感病毒TaqMan荧光探针如SeqIDNo.3所示序列；SeqIDNo.1：5’-GACCRATCCTGTCACCTCTGAC-3’；SeqIDNo.2：5’-AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA-3’；SeqIDNo.3：5’-FAM-TGCAGTCCTCGCTCACTGGGCACG-TAMRA-3’；所述甲型H1N1流感病毒PT-PCR反应液存储管中存放有甲型H1N1流感病毒PT-PCR反应液；所述甲型H1N1流感病毒PT-PCR反应液由甲型H1N1流感病毒特异引物和甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光探针组成；所述甲型H1N1流感病毒特异引物包括上游引物和下游引物；所述上游引物如SeqIDNo.4所示序列；所述下游引物如SeqIDNo.5所示序列；所述甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光探针如SeqIDNo.6所示序列；SeqIDNo.4：5’-GACCRATCCTGTCACCTCTGAC-3’；SeqIDNo.5：5’-AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA-3’；SeqIDNo.6：5’-HEX-ACGACACCACGCCCCCTCAGATT-BHQ-3’；所述PT-PCR缓冲液存储管中装有2×PT-PCR缓冲液；所述酶混合液存储管中存放有酶混合液；所述酶混合液由聚合酶和逆转录酶组成；所述阴性质控品存储管放置有阴性质控品；所述阴性质控品为不含有引物对扩增靶标序列片段的慢病毒的空载溶液；所述甲型阳性质控品存储管放置有甲型阳性质控品；所述甲型阳性质控品为含有引物对扩增靶标序列片段的慢病毒溶液，靶标序列片段基因如SeqIDNo.7所示序列；SeqIDNo.7：5’-AAGACCAATCTTGTCACCTCTGACTAAGGGAATTTTAGGATTTGTGTTCACGCTCACCGTGCCCAGTGAGCGAGGACTGCAGCGTAGACGCTTTGTCCAAAATGCCCTAA-3’；所述甲型H1N1阳性质控品存储管放置有甲型H1N1阳性质控品；所述甲型阳H1N1性质控品为含有引物对扩增靶标序列片段的慢病毒溶液，靶标序列片段基因如SeqIDNo.8所示序列；SeqIDNo.8：5’-TCAAAAGAAGTGAACGCCAAAATTGAACCATTCTTGAGGACGACACCACGCCCCCTCAGATTGCCTGATGGGCCTCTTTGCCATCAGCGGTCAAAGTTCCTG-3’。进一步地，所述甲型流感病毒TaqMan荧光探针其5’端的荧光基团为6-羧基荧光素，其3’端的淬灭剂为6-羧基四甲基若丹明；所述甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光探针其5’端的荧光基团为6-羧基荧光素，其3’端的淬灭剂为6-羧基四甲基若丹明。进一步地，所述阴性质控品为灭菌焦碳酸二乙酯水。进一步地，所述聚合酶为热启动ExTaq酶。进一步地，所述逆转录酶为PrimeScript逆转录酶。再进一步地，所述酶混合液由热启动ExTaq酶和PrimeScript逆转录酶以体积比1：1混合组成。作为优选的实施方案，所述试剂盒体中还放置有ROX校正液存储管。本技术的检测试剂盒置于-20~4℃保存。本技术的检测试剂盒的使用方法如下：每次检测可根据不同反应体系及PCR仪的需要，按比例配制试剂盒体中的各组份；且每次检测均设立相应的阳性对照和阴性对照；优选的，实时荧光RT-PCR检测的反应体系为50μL，包括2×RT-PCR缓冲液25μL，甲型流感病毒TaqMan荧光探针1μL，甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光探针1μL，正向引物和反向引物各1μL，上游引物和下游引物各1μL，热启动ExTaq酶1μL，PrimeScript逆转录酶1μL，甲型H1N1RNA模板溶液4μL，ROX校正液1μL，并加灭菌焦碳酸二乙酯水定容至50μL；实时荧光定量PCR反应过程如下：反转录：42℃5分钟，反转录酶灭活：95℃10秒；40个循环：95℃5秒→60℃31秒；荧光定量PCR检测，荧光定量RT-PCR结束后，PCR仪器将自动记录保存每个循环的荧光信号，分别选中荧光通道FAM、HEX进行阈值调整后，通过观察甲型流感病毒和甲型H1N1流感病毒的扩增曲线及Ct值进行结果判断。本技术与现有技术相比较，本技术的检测试剂盒，能够对特异型体系的甲型H1N1流感病毒及通用型的甲型流感病毒进行双重检测，检测结果可信度更高；通过双重检测甲型H1N1流感病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测试剂盒，包括试剂盒体；其特征在于：所述试剂盒体由PCR检测试剂存储仓及质控品存储仓构成；所述PCR检测试剂存储仓包括甲型流感病毒PT‑PCR反应液存储管、甲型H1N1流感病毒PT‑PCR反应液存储管、PT‑PCR缓冲液存储管和酶混合液存储管；所述质控品存储仓由阴性质控品存储管、甲型H1N1阳性质控品存储管和甲型阳性质控品存储管组成；所述甲型流感病毒PT‑PCR反应液存储管中存放有甲型流感病毒PT‑PCR反应液；所述甲型流感病毒PT‑PCR反应液由甲型流感病毒特异引物和甲型流感病毒TaqMan荧光探针组成；所述甲型流感病毒特异引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物如Seq ID No.1所示序列；所述反向引物如Seq ID No.2所示序列；所述甲型流感病毒TaqMan荧光探针如Seq ID No.3所示序列；Seq ID No.1：5’‑GACCRATCCTGTCACCTCTGAC‑3’；Seq ID No.2：5’‑AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA‑3’；Seq ID No.3：5’‑FAM‑TGCAGTCCTCGCTCACTGGGCACG‑TAMRA‑3’；所述甲型H1N1流感病毒PT‑PCR反应液存储管中存放有甲型H1N1流感病毒PT‑PCR反应液；所述甲型H1N1流感病毒PT‑PCR反应液由甲型H1N1流感病毒特异引物和甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光探针组成；所述甲型H1N1流感病毒特异引物包括上游引物和下游引物；所述上游引物如Seq ID No.4所示序列；所述下游引物如Seq ID No.5所示序列；所述甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光探针如Seq ID No.6所示序列；Seq ID No.4：5’‑GACCRATCCTGTCACCTCTGAC‑3’；Seq ID No.5：5’‑AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA‑3’；Seq ID No.6：5’‑HEX‑ACGACACCACGCCCCCTCAGATT‑BHQ‑3’；所述PT‑PCR缓冲液存储管中装有2×PT‑PCR缓冲液；所述酶混合液存储管中存放有酶混合液；所述酶混合液由聚合酶和逆转录酶组成；所述阴性质控品存储管放置有阴性质控品；所述阴性质控品为不含有引物对扩增靶标序列片段的慢病毒的空载溶液；所述甲型阳性质控品存储管放置有甲型阳性质控品；所述甲型阳性质控品为含有引物对扩增靶标序列片段的慢病毒溶液，靶标序列片段基因如Seq ID No.7所示序列；Seq ID No.7：5’‑AAGACCAATCTTGTCACCTCTGACTAAGGGAATTTTAGGATTTGTGTTCACGCTCACCGTGCCCAGTGAGCGAGGACTGCAGCGTAGACGCTTTGTCCAAAATGCCCTAA‑3’；所述甲型H1N1阳性质控品存储管放置有甲型H1N1阳性质控品；所述甲型阳H1N1性质控品为含有引物对扩增靶标序列片段的慢病毒溶液，靶标序列片段基因如Seq ID No.8所示序列；Seq ID No.8：5’‑TCAAAAGAAGTGAACGCCAAAATTGAACCATTCTTGAGGACGACACCACGCCCCCTCAGATTGCCTGATGGGCCTCTTTGCCATCAGCGGTCAAAGTTCCTG‑3’。...

【技术特征摘要】
1.一种检测试剂盒，包括试剂盒体；其特征在于：所述试剂盒体由PCR检测试剂存储仓及质控品存储仓构成；所述PCR检测试剂存储仓包括甲型流感病毒PT-PCR反应液存储管、甲型H1N1流感病毒PT-PCR反应液存储管、PT-PCR缓冲液存储管和酶混合液存储管；所述质控品存储仓由阴性质控品存储管、甲型H1N1阳性质控品存储管和甲型阳性质控品存储管组成；所述甲型流感病毒PT-PCR反应液存储管中存放有甲型流感病毒PT-PCR反应液；所述甲型流感病毒PT-PCR反应液由甲型流感病毒特异引物和甲型流感病毒TaqMan荧光探针组成；所述甲型流感病毒特异引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物如SeqIDNo.1所示序列；所述反向引物如SeqIDNo.2所示序列；所述甲型流感病毒TaqMan荧光探针如SeqIDNo.3所示序列；SeqIDNo.1：5’-GACCRATCCTGTCACCTCTGAC-3’；SeqIDNo.2：5’-AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA-3’；SeqIDNo.3：5’-FAM-TGCAGTCCTCGCTCACTGGGCACG-TAMRA-3’；所述甲型H1N1流感病毒PT-PCR反应液存储管中存放有甲型H1N1流感病毒PT-PCR反应液；所述甲型H1N1流感病毒PT-PCR反应液由甲型H1N1流感病毒特异引物和甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光探针组成；所述甲型H1N1流感病毒特异引物包括上游引物和下游引物；所述上游引物如SeqIDNo.4所示序列；所述下游引物如SeqIDNo.5所示序列；所述甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光探针如SeqIDNo.6所示序列；SeqIDNo.4：5’-GACCRATCCTGTCACCTCTGAC-3’；SeqIDNo.5：5’-AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA-3’；SeqIDNo.6：5’-HEX-ACGACACCACGCCCCCTCAGATT-BHQ-3’；所述P...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏建平，
申请(专利权)人：山东博思源生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：山东,37