一种样本杂交前预处理试剂及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种样本杂交前预处理试剂及其使用方法，使用预处理液、酶缓冲液、胃蛋白酶以及洗脱液依次为样本进行烤片、脱蜡、脱水、预处理浸泡、去除溶液、使用胃蛋白酶工作液消化、纯化水浸泡、再次脱水以及干燥的工序，能够充分的提高样本组织的通透性，与探针杂交时能够保证探针和目标DNA能充分接触并杂交，复染液复染后，在匹配的荧光显微镜下观察荧光信号，效果能到细胞分散、细胞核完整，可以发出被肉眼识别的荧光信号，有利于提高检测效果。有利于提高检测效果。

【技术实现步骤摘要】
一种样本杂交前预处理试剂及其使用方法


[0001]本专利技术涉及样本处理
，具体为一种样本杂交前预处理试剂及其使用方法。

技术介绍

[0002]石蜡包埋的组织切片(FFPE样本)通常用于原位杂交检测，原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。
[0003]由于待检测的石蜡包埋样本的靶序列(DNA)位于细胞核中，且被蛋白包裹，因此需要对样本进行原位杂交检测之前需要进行预处理。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种样本杂交前预处理试剂及其使用方法，使用预处理液、酶缓冲液、胃蛋白酶以及洗脱液依次为样本进行烤片、脱蜡、脱水、预处理浸泡、去除溶液、使用胃蛋白酶工作液消化、纯化水浸泡、再次脱水以及干燥的工序，能够充分的提高样本组织的通透性，在样本杂交时能够保证探针和目标DNA能充分接触并杂交，提高检测效果。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种样本杂交前预处理试剂，特征在于：其特征在于：所述预处理试剂由预处理液、酶缓冲液、胃蛋白酶以及洗脱液组成：(1)预处理液:称取81.07
‑
81.1g硫酸氰钠于玻璃瓶内加纯化水定容至1L，搅拌至完全溶解，即得预处理液；
[0006](2)酶缓冲液：称取5.5
‑
5.6ml的浓盐酸于玻璃瓶内，加纯化水稀释至1000ml，混合均匀，即得酶缓冲液；
[0007](3)胃蛋白酶：称取140
>‑
141mg胃蛋白粉倒入冻存管中，盖紧盖子，即得胃蛋白酶；
[0008](4)洗脱液：称取175
‑
175.3g氯化钠和88
‑
88.2g柠檬酸三钠，加入合适的容器中，加纯化水定容至1L，搅拌至完全溶解，用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调PH值至5.3
±
0.1，即得20
×
SSC溶液；
[0009]将得到的20
×
SSC溶液量取100ml和3ml的NP
‑
40，加入合适的容器中，加纯化水定容至1L，搅拌均匀后，用11mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调PH值至7.0
‑
7.5，即得洗脱液。
[0010]一种样本杂交前预处理试剂使用方法，其特征在于：包括试剂准备、样本处理以及杂交后洗脱的工序。
[0011]所述试剂准备包括下述步骤：
[0012]S1：将50mL预处理液倒入染缸中，将染缸置于80
±
1℃水浴锅中，保持染缸内溶液温度为80
±
1℃备用；
[0013]S2：将50mL酶缓冲液倒入染缸并置于37
±
1℃水浴锅中，保持确保染缸内溶液温度
为37
±
1℃备用，在样本脱蜡之前添加140mg的胃蛋白酶进入酶缓冲液中，充分溶解后得到胃蛋白酶工作液；
[0014]S3：准备2个染缸各加入50mL的洗脱液，分别置于常温和73
±
1℃水浴锅中备用；
[0015]S4：分别量取700mL以及850mL的无水乙醇，使用纯化水分别稀释至1000mL，室温密封保存备用。
[0016]所述样本处理包括下述步骤：
[0017]S1烤片：将切片在空气中略微干燥后，放在65℃
‑
70烤片机上烤片3.8
‑
4h，备用；
[0018]S2脱蜡：在室温下，将玻片浸入二甲苯或二甲苯替代剂中脱蜡两次，各10～15分钟；
[0019]S3脱水：脱蜡完成后，在室温下，将玻片浸入无水乙醇中脱水两次，各5分钟；取出玻片，去除玻片上的残余溶液；
[0020]S4预处理：将玻片浸入步骤一中准备的80
±
1℃预处理液中处理10分钟；
[0021]S5去除溶液：取出玻片，将其浸入纯化水中处理1分钟，取出后去除玻片上的残余溶液；
[0022]S6消化：将玻片置于胃蛋白酶工作液中37℃消化10～60分钟；
[0023]S7浸泡：消化后，将玻片在纯化水浸泡1分钟；
[0024]S8脱水：浸泡后将玻片分别浸入步骤一中的到的70％和85％的乙醇溶液，以及100％乙醇中进行梯度脱水各1分钟；
[0025]S9干燥：脱水后取出玻片，室温干燥，备用，即可进行杂交。
[0026]所述杂交后洗脱包括下述步骤：
[0027]S1：结束后，从杂交仪中取出玻片，用镊子去掉封片胶；
[0028]S2：在室温下，将玻片浸入步骤一中置于常温状态下备用的洗脱液中浸泡5分钟，除去盖玻片；
[0029]S3：取出玻片，将其放入步骤一中置于水浴锅中备用的已经预热至73
±
1℃的另一洗脱液中，漂洗2分钟；
[0030]S4：取出玻片，去除残留液体后，暗处晾干备用。
[0031]所述染缸采用考普林染缸。
[0032]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0033]使用预处理液、酶缓冲液、胃蛋白酶以及洗脱液依次为样本进行烤片、脱蜡、脱水、预处理浸泡、去除溶液、使用胃蛋白酶工作液消化、纯化水浸泡、再次脱水以及干燥的工序，能够充分的提高样本组织的通透性，与探针杂交时能够保证探针和目标DNA能充分接触并杂交，复染液复染后，在匹配的荧光显微镜下观察荧光信号，效果能到细胞分散、细胞核完整，可以发出被肉眼识别的荧光信号，有利于提高检测效果。
具体实施方式
[0034]下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0035]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种样本杂交前预处理试剂，特征在于：其特征在于：所述预处理试剂由预处理液、酶缓冲液、胃蛋白酶以及洗脱液组成：(1)预处理液:称取81.07
‑
81.1g硫酸氰钠于玻璃瓶内加纯化水定容至1L，搅拌至完全溶解，即得预处理液；
[0036](2)酶缓冲液：称取5.5
‑
5.6ml的浓盐酸于玻璃瓶内，加纯化水稀释至1000ml，混合均匀，即得酶缓冲液；
[0037](3)胃蛋白酶：称取140
‑
141mg胃蛋白粉倒入冻存管中，盖紧盖子，即得胃蛋白酶；
[0038](4)洗脱液：称取175
‑
175.3g氯化钠和88
‑
88.2g柠檬酸三钠，加入合适的容器中，加纯化水定容至1L，搅拌至完全溶解，用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调PH值至5.3
±
0.1，即得20
×
SSC溶液；
[0039]将得到的2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种样本杂交前预处理试剂，其特征在于：所述预处理试剂由预处理液、酶缓冲液、胃蛋白酶以及洗脱液组成：(1)预处理液:称取81.07
‑
81.1g硫酸氰钠于玻璃瓶内加纯化水定容至1L，搅拌至完全溶解，即得预处理液；(2)酶缓冲液：称取5.5
‑
5.6ml的浓盐酸于玻璃瓶内，加纯化水稀释至1000ml，混合均匀，即得酶缓冲液；(3)胃蛋白酶：称取140
‑
141mg胃蛋白粉倒入冻存管中，盖紧盖子，即得胃蛋白酶；(4)洗脱液：称取175
‑
175.3g氯化钠和88
‑
88.2g柠檬酸三钠，加入合适的容器中，加纯化水定容至1L，搅拌至完全溶解，用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调PH值至5.3
±
0.1，即得20
×
SSC溶液；将得到的20
×
SSC溶液量取100ml和3ml的NP
‑
40，加入合适的容器中，加纯化水定容至1L，搅拌均匀后，用11mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调PH值至7.0
‑
7.5，即得洗脱液。2.一种如权利要求1所述的样本杂交前预处理试剂使用方法，其特征在于：包括试剂准备、样本处理以及杂交后洗脱的工序。3.根据权利要求2所述的样本杂交前预处理试剂使用方法，其特征在于：所述试剂准备包括下述步骤：S1：将50mL预处理液倒入染缸中，将染缸置于80
±
1℃水浴锅中，保持染缸内溶液温度为80
±
1℃备用；S2：将50mL酶缓冲液倒入染缸并置于37
±
1℃水浴锅中，保持确保染缸内溶液温度为37
±
1℃备用，待需要时添加140mg的胃蛋白酶进入酶缓冲液中，充分溶解后得到胃蛋白酶工作液；S3：准备2...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏建平，
申请(专利权)人：山东博思源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：