一种血红素溶液浓度的检测方法技术

本发明专利技术提供一种血红素溶液浓度的检测方法，属于生物检测领域。本发明专利技术使用硫胺素代替鲁米诺，成本低且较为环保，荧光信号较为稳定，提高了检测结果的重现性，青蒿素在血红素存在时，分解产生超氧自由基，硫胺素本身没有荧光，在超氧自由基存在时，氧化生成有荧光性质的硫色素，利用荧光光谱法检测血红素浓度，相比化学发光法检测，重现性较好。实施例的数据表明，本发明专利技术提供的检测方法对300nmol/L的血红素进行了6次重复测定，相对标准偏差为6.8％。

A method for detecting the concentration of heme solution

The invention provides a method for detecting the concentration of heme solution, belonging to the field of biological detection. The invention uses thiamine instead of Lumino, which has low cost and more environmental protection, the fluorescence signal is more stable, and the reproducibility of detection results is improved. When the heme exists, the artemisinin produces the superoxide radical, the thiamine itself has no fluorescence, and when the superoxide free radical exists, it oxidize to the sulfur pigment with fluorescence properties. The detection of heme concentration by fluorescence spectrometry has a good reproducibility compared with chemiluminescence detection. The data of the embodiment show that the detection method provided by the invention has 6 repeated determination of the heme of 300nmol/L, and the relative standard deviation is 6.8%.

【技术实现步骤摘要】
一种血红素溶液浓度的检测方法
本专利技术涉及生物检测
，特别涉及一种血红素溶液浓度的检测方法。
技术介绍
血红素是一种天然的卟啉铁合物，在氧运输中起着关键的作用，它使人体器官正常运转。过量的血红素可能导致出血性中风后永久性的脑继发性损害，而血红素的缺乏可能会诱导神经细胞中的神经球蛋白表达，加速内源性一氧化碳的产生。此外，其作为一种新型的铁补充剂，被广泛应用于药物，食品及其他领域中。目前，报道检测血红素的方法有化学发光法，电化学法，毛细管电泳法及荧光光光谱法等，存在检测方法重现性差的问题，如徐等人利用青蒿素-鲁米诺体系实现了血红素的化学发光法检测，不同浓度的血红素加入到含有鲁米诺及青蒿素的缓冲溶液中，进行化学发光检测(参见《Artemisinin-luminolchemiluminescenceforforensicbloodstaindetectionusingasmartphoneasadetector》，G.B.Xu等，Anal.Chem.,2017，89：6160～6165)，但是鲁米诺发光时间有限，样品制备好后需要立刻进行测量，重现性差。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种血红素溶液浓度的检测方法，重现性好。本专利技术提供了一种血红素溶液浓度的检测方法，包括以下步骤：(1)将待测血红素溶液、乙二胺四乙酸二钠、青蒿素、硫胺素、无机碱与水混合，将得到的待测混合溶液进行孵育，得到待测孵育溶液，检测所述待测孵育溶液的荧光强度；(2)根据所述步骤(1)得到的待测孵育溶液的荧光强度以及预定的标准曲线，得到待测血红素溶液中血红素的浓度；所述标准曲线以血红素标准溶液的浓度为横坐标、以加入血红素标准溶液后的荧光强度与青蒿素和硫胺素混合溶液的初始荧光强度的差值为纵坐标。优选地，所述步骤(1)中孵育的温度为15～40℃，所述孵育的时间为5～30min。优选地，所述步骤(1)中待测血红素溶液中青蒿素与硫胺素的摩尔比为10～2000:0.5～500。优选地，所述步骤(1)中无机碱为氢氧化钠或氢氧化钾。优选地，所述步骤(1)中无机碱以无机碱溶液的形式加入，所述无机碱溶液的浓度为5～500mmol/L。优选地，所述步骤(1)中青蒿素以青蒿素溶液的形式加入，所述青蒿素溶液的浓度为0.05～50mmol/L。优选地，所述步骤(1)中硫胺素以硫胺素溶液的形式加入，所述硫胺素溶液的浓度为5μmol/L～2mmol/L。优选地，所述步骤(2)中标准曲线的线性范围为2.0～300.0nmol/L。本专利技术提供了一种血红素溶液浓度的检测方法，包括以下步骤：将待测血红素溶液、乙二胺四乙酸二钠、青蒿素、硫胺素、无机碱与水混合，将得到的待测混合溶液进行孵育，得到待测孵育溶液，检测所述待测孵育溶液的荧光强度；根据待测孵育溶液的荧光强度以及预定的标准曲线，得到待测血红素溶液中血红素的浓度；所述标准曲线以血红素标准溶液的浓度为横坐标、以加入血红素标准溶液后的荧光强度与青蒿素和硫胺素混合溶液的初始荧光强度的差值为纵坐标。本专利技术使用硫胺素代替鲁米诺，成本低且较为环保，荧光信号较为稳定，提高了检测结果的重现性，青蒿素在血红素存在时，分解产生超氧自由基，硫胺素本身没有荧光，在超氧自由基存在时，氧化生成有荧光性质的硫色素，利用荧光光谱法检测血红素浓度，相比化学发光法检测，重现性较好。实施例的数据表明，本专利技术提供的检测方法对300nmol/L的血红素溶液进行了6次重复测定，相对标准偏差为6.8％。且具有良好的选择性。附图说明图1是本专利技术实施例1加入不同浓度血红素标准溶液后荧光强度的变化；图2是本专利技术实施例1体系荧光强度与血红素浓度关系曲线，插图为荧光强度变化和血红素的标准方程；图3是本专利技术实施例2其他干扰物质加入后体系荧光强度变化。具体实施方式本专利技术提供了一种血红素溶液浓度的检测方法，包括以下步骤：(1)将待测血红素溶液、乙二胺四乙酸二钠、青蒿素、硫胺素、无机碱与水混合，将得到的待测混合溶液进行孵育，得到待测孵育溶液，检测所述待测孵育溶液的荧光强度；(2)根据所述步骤(1)得到的待测孵育溶液的荧光强度以及预定的标准曲线，得到待测血红素溶液中血红素的浓度；所述标准曲线以血红素标准溶液的浓度为横坐标、以加入血红素标准溶液后的荧光强度与青蒿素和硫胺素混合溶液的初始荧光强度的差值为纵坐标。本专利技术将待测血红素溶液、乙二胺四乙酸二钠、青蒿素、硫胺素、无机碱与水混合，得到待测混合溶液进行孵育，得到待测孵育溶液，检测待测孵育溶液的荧光强度。在本专利技术中，所述孵育的温度优选为15～40℃，更优选为25℃，所述孵育的时间优选为5～30min，更优选为20min。在本专利技术中，所述待测血红素溶液中青蒿素与硫胺素的摩尔比优选为10～2000:0.5～500。本专利技术中，血红素溶液浓度的检测原理为：青蒿素在血红素存在时，分解产生超氧自由基；硫胺素本身没有荧光，在超氧自由基存在时，氧化生成有荧光的硫色素，如下式所示：在本专利技术中，所述待测混合溶液的pH值优选为12～13。本专利技术通过无机碱的用量调节待测混合溶液的pH值。在本专利技术中，所述无机碱优选为氢氧化钠或氢氧化钾。在本专利技术中，所述无机碱优选以无机碱溶液的形式加入，所述无机碱溶液的浓度优选为5～500mmol/L，更优选为5，10，20，50，100，200，500mmol/L；所述无机碱溶液的体积为870μL。在本专利技术中，所述待测血红素溶液的浓度优选为2.0～300.0nmol/L。金属离子、葡萄糖和氨基酸对本专利技术提供的血红素溶液浓度的检测方法没有影响，不会影响本专利技术检测方法的选择性。在本专利技术中，所述金属离子优选包括钴离子、镁离子、铜离子、锌离子和铁离子；所述氨基酸优选包括苯丙氨酸、亮氨酸、甘氨酸、丙氨酸和半胱氨酸。在本专利技术中，所述青蒿素优选以青蒿素溶液的形式加入，所述青蒿素溶液的优选浓度为0.05～50mmol/L，更优选为5mmol/L；所述青蒿素溶液的加入体积优选为10μL。在本专利技术中，所述硫胺素优选以硫胺素溶液的形式加入，所述硫胺素溶液的浓度优选为5μmol/L～2mmol/L，更优选为1mmol/L；所述硫胺素溶液的加入体积优选为100μL。本专利技术对所述乙二胺四乙酸二钠(EDTA)的用量没有特殊的限定，对待测混合溶液没有影响即可。本专利技术对所述待测血红素溶液、乙二胺四乙酸二钠、青蒿素、硫胺素、无机碱与水的加入顺序没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的加料顺序即可，具体的，将乙二胺四乙酸二钠、青蒿素溶液、硫胺素溶液、待测血红素溶液依次加入到无机碱溶液中。本专利技术对所述检测待测孵育溶液的荧光强度的方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的荧光光谱法测定血红素的方式即可。得到待测孵育溶液的荧光强度值后，本专利技术根据得到的待测孵育溶液的荧光强度以及预定的标准曲线，得到待测血红素溶液中血红素的浓度；所述标准曲线以血红素标准溶液的浓度(c)为横坐标、以加入血红素标准溶液后的荧光强度与青蒿素和硫胺素混合溶液的初始荧光强度的差值为纵坐标。在本专利技术的实施例中，所述标准曲线为ΔF＝32.01+23.54c(c单位是nmol/L)，线性系数为0.9954，线性范围是2.0～300.0nmol/L，检出限为0.68nmol/L。在本专利技术中，所述标准曲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血红素溶液浓度的检测方法，包括以下步骤：(1)将待测血红素溶液、乙二胺四乙酸二钠、青蒿素、硫胺素、无机碱与水混合，将得到的待测混合溶液进行孵育，得到待测孵育溶液，检测所述待测孵育溶液的荧光强度；(2)根据所述步骤(1)得到的待测孵育溶液的荧光强度以及预定的标准曲线，得到待测血红素溶液中血红素的浓度；所述标准曲线以血红素标准溶液的浓度为横坐标、以加入血红素标准溶液后的荧光强度与青蒿素和硫胺素混合溶液的初始荧光强度的差值为纵坐标。

【技术特征摘要】
1.一种血红素溶液浓度的检测方法，包括以下步骤：(1)将待测血红素溶液、乙二胺四乙酸二钠、青蒿素、硫胺素、无机碱与水混合，将得到的待测混合溶液进行孵育，得到待测孵育溶液，检测所述待测孵育溶液的荧光强度；(2)根据所述步骤(1)得到的待测孵育溶液的荧光强度以及预定的标准曲线，得到待测血红素溶液中血红素的浓度；所述标准曲线以血红素标准溶液的浓度为横坐标、以加入血红素标准溶液后的荧光强度与青蒿素和硫胺素混合溶液的初始荧光强度的差值为纵坐标。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中孵育的温度为15～40℃，所述孵育的时间为5～30min。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中待测混合溶液中青蒿素与硫胺素的摩尔比为10...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪朋娟，逯一中，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东,37