用于加工含有活细胞的生物药物的方法技术

本发明专利技术包括用于加工在无营养的缓冲液中的活细胞组合物的方法。在所述组合物中的所述细胞被储存在无营养的培养基超过约72小时后维持其特性和功能性特征。所述储存方法使得所述细胞可以在加工设施处生产并被运送到医疗点现场。本发明专利技术还包括组合物，所述组合物在储存温度下被储存于无营养的缓冲液中的同时维持所述功能性特征。

Method for processing biological medicine containing living cells

The invention includes a method for processing living cell compositions in a nutrient free buffer. The cells in the composition are stored in a nutrient free medium for more than 72 hours to maintain their characteristic and functional characteristics. The storage method enables the cells to be produced at the processing facility and transported to the medical point site. The invention also includes a composition which is stored in a nutrient free buffer at storage temperature while maintaining the functional characteristics.

【技术实现步骤摘要】
用于加工含有活细胞的生物药物的方法
本专利技术涉及用于加工生物药物的方法，该含有活细胞悬浮液的生物药物被配制在无营养的缓冲液中。更具体地，本专利技术涉及在无营养的培养基中活的免疫细胞悬浮液的包装、运送和配送，从而所述细胞维持其独特特性、功能和活性的属性。
技术介绍
细胞治疗对于肿瘤、病毒和细菌性病原体是一个潜在的根治性治疗。细胞治疗也可以被用于治疗自身免疫型疾病(如类风湿性关节炎、多发性硬化症和I型糖尿病)，神经系统疾病(例如老年痴呆症(Alzheimer’s)、肌萎缩侧索硬化症(ALS)和帕金森氏病)，以及抗衰老治疗，心血管障碍的创伤修复和治疗。利用免疫系统的力量治疗或预防疾病是免疫疗法的一个主要的目的。为了增强或抑制在患者中的免疫应答，多种免疫治疗方法和组合物被开发出来。细胞治疗方法一般包含如细胞增殖、分化和/或激活的体外操作。对其操作多于最低限度的细胞被美国食品和药品监督管理局(USFDA)或在其他司法管辖区的监管机构认为是生物药物。在这种可以用于治疗或预防各种疾病的生物药物在市场上被销售前，这些产品必须在试验性新药申请(IND)下首先在人体临床试验中被研究，或等同的研究。对于商业用途，用于生产含有活细胞的生物药物的方法必须是标准化的，从而所获得的细胞具有预定特性、功能和活性释放标准。设计作为生物药物使用的细胞的增殖、分化和/或激活的方法通常在所述细胞被保持在营养丰富培养基中的体外发生。然而，在对人体给药所述细胞前，所述细胞必须被转移至无营养的输注缓冲液中。由于这些缓冲溶液不含有营养成分，所述细胞只在短时期内保持活性。此外，即使所述细胞在被置于无营养的输注缓冲液中后保持活性，它们快速丧失其独特特性和功能性特征。丧失其独特特性和功能性特征使得所述细胞不能作为生物药物使用。这个限制需要所述作为生物药物使用的细胞必须被配制在所述医疗点或接近所述医疗点。由于在制剂中所述活细胞产品有限的保存期限，细胞被配制在所述医疗点或接近所述医疗点的需求严重地限制了这类产品的所述商业活性。活细胞在营养丰富的培养基中是比较稳定的。营养丰富的培养基的示例包括：例如，X-Vivol5(BioWhittaker,Walkersville,DM)、PRMI1640、DMEM、Ham’sF12、McCoys7A和Medium199。所述培养基可以补充以添加剂，所述添加剂包括血清、血清蛋白、生长抑制和生长促进物质，例如促有丝分裂单克隆抗体和用于选择基因设计或修饰细胞的选择性试剂。然而，例如对患者给药所需要的将所述细胞向无营养的缓冲液的转移可导致所述细胞的特性、细胞活性和所述细胞的所述功能性特征的快速降解。无营养的缓冲液的示例包括：例如，如生理盐水、磷酸盐缓冲液、5％右旋糖、Plasma-Lyte(BaxterScientific,Deerfield,IL)和Normasol(AbbottLaboratories,AbbottPark,IL)的等渗溶液。此外，当细胞被转移至无营养的缓冲液中时，通常认为提供激活和/或分化信号以及如刺激分子或细胞因子的其他成分的试剂应该被在所述转移至无营养的缓冲液中前去除(参见Berenson等的美国专利6,867,041)。因此，在无营养的缓冲液中的细胞通常具有有限的保存期限并且可以，例如，在数分钟内开始丧失其标识属性和活力，以及很难维持其功能性和特性特征超过几个小时。目前，包括活细胞的免疫治疗的组合物通常是在临近患者的治疗点的cGMP设施中被生产的(参见Gruenberg的美国专利公开号2003/0175242)。包含活细胞的生物药物的配制必须在高度控制和无菌条件的cGMP设施中完成。所述活细胞在cGMP设施处被操作并且被配制用于输注到患者体内。一旦所述细胞被制备用于输注，所述细胞被快速转移至所述医疗点现场并对所述患者给药。该方法的主要缺陷在于cGMP设施需要出现在每个医疗点现场附近。所述cGMP设施需要给职员大量的货币资本，并且所述cGMP设施在所述需要的规章制度下运行。在每个医疗点现场或附近建立大量这些中心的需求是成本高昂的，并且对于这类药物的所述商业潜力是严重的限制。这导致了一个艰难的抉择：通过建设大量cGMP设施以增加对患者可利用率所承担巨大的费用，或通过只建立有限数量的cGMP设施以最小化资本支出而给患者提供有限可利用率。因此，在活细胞治疗领域，使细胞在无营养的缓冲液中具有更长保存期限的方法是必要的。此外，可以使得悬浮于无营养成分的输注缓冲液中经过配制的细胞产品包装、运送和大规模配送的方法是必要的。维持所述配制后用于适应性免疫治疗的细胞的特性和功能的问题被描述于，例如，Gruenberg的美国专利公开号2003/0175272。该公开教导T细胞必须在对患者给药前(输注前不超过4小时)被再激活，以便维持细胞因子产生的功能性特征。所述细胞的功能可以被维持多达48小时，只要所述制剂包括自体同源的血浆。然而，从每个目的患者收集的血浆不利于大规模配送和商业化。
技术实现思路
在第一方面，本专利技术包括一种生物药物组合物。所述药物组合物包括配制于无营养的缓冲液中的活细胞。所述活细胞，在所述无营养的缓冲液中被储存超过约6小时后，维持其在配制于所述无营养的缓冲液中前的特性和定义所述活细胞的至少一种功能性特征。这些活细胞在储存于所述无营养的缓冲液中后可用于免疫治疗。它们维持其在配制于所述无营养的缓冲液中至少72小时前的特性和定义所述活细胞的至少一种功能性特征。在另一个方面，本专利技术包括一种用活细胞加工生物药物组合物的方法。所述方法包括将所述活细胞配制在无营养的缓冲液中；以及在低于约20摄氏度的储存温度下，将所述活细胞维持在所述无营养的缓冲液中。所述活细胞维持其在配制于所述无营养的缓冲液中前的特性和定义所述活细胞的至少一种功能性特征。所述活细胞被储存于所述无营养的缓冲液中超过约72小时后可用于免疫治疗。优选地，所述储存温度在约4摄氏度和约8摄氏度之间的范围内，并且在所述无营养的缓冲液中的所述细胞的浓度为约107个细胞/毫升以上。在T细胞的组合物中，所述活细胞被优选地配制为被激活的状态。为了激活所述T细胞，优选使用对细胞表面分子有反应的固定化的单克隆抗体。优选地，所述细胞表面分子为第一下列中的一个：CD3、MHCI、MHCII、CD2，和第二共刺激分子的组合。优选地，所述共刺激分子为CD28。所述活细胞被置于软质容器或注射器中，其中所述软质容器或注射器被包装于使所述活细胞维持在储存温度的温度控制装置中。所述方法还包括将在温度控制装置中的所述包装运送和配送至所述医疗点。在另一个方面，本专利技术包括一种提供活细胞组合物至医疗设施点的方法。所述方法包括在加工设施处将所述活细胞配制在无营养的缓冲液中；和将所述细胞在包装中运输至所述医疗设施点，所述包装被装备成维持低于约20摄氏度的储存温度。所述活细胞处于所述储存温度多达约72小时，并维持其可用于免疫治疗的活细胞的特性和至少一种功能性特征。在另一个方面，本专利技术包括一种对患者给药免疫治疗的方法。所述方法包括给药包含配制于无营养的缓冲液中的活细胞的组合物，其中所述组合物已经被储存于所述无营养的缓冲液中多达约72小时，其中所述活细胞维持其在配制于所述无营养的缓冲液中前的特性和定义所述活细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物药物组合物，包括配制于无营养的缓冲液中的活细胞，其中所述活细胞已被在培养基中活化、冷冻、复苏和在营养培养基中再活化，其中所述活细胞，在所述无营养的缓冲液中被储存超过约24小时后，维持其在配制于所述无营养的缓冲液中前的定义所述活细胞的特性和至少一种功能性特征，并且所述活细胞在储存于所述无营养的缓冲液后可用于患者的免疫治疗；所述至少一种功能性特征为CD40L、FasL、穿孔素和粒酶B的表达，共刺激分子的表达，粘附分子的表达，细胞因子、趋化因子的分泌，或其组合；和所述分泌的细胞因子为IFN‑γ，并且在储存后所述IFN‑γ的分泌水平被恢复至与在配制时的水平相比至少约80％。

【技术特征摘要】
2011.05.03 US 61/481,991;2011.08.29 US 61/528,493;1.一种生物药物组合物，包括配制于无营养的缓冲液中的活细胞，其中所述活细胞已被在培养基中活化、冷冻、复苏和在营养培养基中再活化，其中所述活细胞，在所述无营养的缓冲液中被储存超过约24小时后，维持其在配制于所述无营养的缓冲液中前的定义所述活细胞的特性和至少一种功能性特征，并且所述活细胞在储存于所述无营养的缓冲液后可用于患者的免疫治疗；所述至少一种功能性特征为CD40L、FasL、穿孔素和粒酶B的表达，共刺激分子的表达，粘附分子的表达，细胞因子、趋化因子的分泌，或其组合；和所述分泌的细胞因子为IFN-γ，并且在储存后所述IFN-γ的分泌水平被恢复至与在配制时的水平相比至少约80％。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述活细胞被置于软质容器或注射器中，其中所述软质容器或注射器被包装于使所述活细胞维持在冷藏温度内的温度控制装置，所述优选的温度范围在约0摄氏度和10摄氏度范围内。3.如权利要求1所述的组合物，其中所述活细胞为CD4+细胞，并且所述活细胞被激活后为Th1细胞。4.如权利要求3所述的组合物，其中所述Th1细胞通过固定化特异性针对T细胞表面分子的单克隆抗体被激活，或者通过固定化抗-CD3和抗-CD28单克隆抗体被激活。5.如权利要求4所述的组合物，其中所述单克隆抗体是交联的。6.如权利要求1所述的组合物，其中在所述无营养的缓冲液中，所述活细胞稳定至少约72小时。7.一种用活细胞加工生物药物组合物的方法，包括：将所述活细胞配制在无营养的缓冲液中，其中所述活细胞己被在培养基中活化、冷冻、复苏和在营养培养基中再活化；以及在低于约20摄氏度的储存温度下，将所述活细胞维持在所述无营养的缓冲液中超过约24小时，其中所述活细胞维持其在配制于所述无营养的缓冲液中前的定义所述活细胞的特性和所述细胞的至少一种功能性特征，所述活细胞在被储存于所述无营养的缓冲液中超过约24小时后可用于免疫治疗；和其中在所述组合物中的所述活细胞储存后表达CD40L，所述表达CD40L的表达量相对于配制时CD40L的表达量为至少约80％。8.如权利要求7所述的方法，其中所述储存温度在约0摄氏度和约10摄氏度的范围内。9.如权利要求7所述的方法，其中在所述无营养的缓冲液中的所述细胞的所述浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔·哈诺伊，
申请(专利权)人：免疫创新治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列,IL