表达Th1特性和溶细胞性质的细胞制造技术

已经产生具有Th1特性和溶细胞活性的新细胞类型。这些Th1/杀伤细胞为CD4+细胞，CD4+细胞从外周血纯化且被操作以具有Th1特性，例如类似于细胞毒性T‑细胞(CTL)的、结合溶细胞活性的产生IFN‑γ的。CTL活性以病变细胞为目标，而不以正常细胞为目标。Th1/杀伤细胞的溶细胞活性通过粒酶B‑穿孔素机制介导且导致病变细胞的凋亡性死亡。生产和使用这些Th1/杀伤细胞的方法包括从外周血分离出CD4+细胞，激活CD4+T‑细胞以形成Th1/杀伤细胞，以及向患者给药具有溶细胞活性的Th1/杀伤细胞，其中Th1/杀伤细胞对于该患者是同种异体的。

Cells expressing Th1 characteristics and cellular properties

New cell types with Th1 characteristics and cytolytic activity have been produced. These Th1/ killer cells are CD4+ cells, and CD4+ cells are purified from the peripheral blood and are operated to have Th1 characteristics, such as the cytotoxic T cells (CTL), which combine with the cytotoxic activity of IFN. CTL activity is targeted at diseased cells rather than normal cells. The lytic activity of Th1/ killer cells is mediated by granzyme B PN perforin mechanism and leads to apoptotic death of pathological cells. The methods of producing and using these Th1/ killer cells include separating CD4+ cells from peripheral blood, activating CD4+T cells to form Th1/ killer cells, and Th1/ killer cells that have soluble cell activity to the patient, in which Th1/ killer cells are allogenic to the patient.

【技术实现步骤摘要】
表达Th1特性和溶细胞性质的细胞
技术介绍
治疗性癌症疫苗接种是一类免疫疗法。免疫疗法是一种新的治疗方式，其出现以使化学疗法、放射疗法和外科结合作为用于治疗癌症的一类药物。免疫治疗方法试图利用免疫系统的力量以治疗疾病。治疗性疫苗接种是这样一种类型的免疫疗法，其是针对现有的肿瘤、病毒和细菌性病原体的潜在的治愈性疗法。治疗性疫苗一般由来源于目标疾病的抗原源和旨在增强所需的免疫反应的佐剂组成。在一些治疗性疫苗治疗方案中，活免疫细胞(来源于宿主(自体)，或来源于供体(同种异体))为治疗性疫苗的组分。自体和同种异体的活免疫细胞(例如树突细胞、NK细胞和T-细胞)也可在用于治疗癌症的免疫疗法治疗方案中使用。淋巴细胞是脊椎动物的免疫系统的一部分，且包括大颗粒淋巴细胞和小淋巴细胞。大颗粒淋巴细胞包括天然杀伤细胞(NK细胞)。小淋巴细胞由T-细胞和B细胞组成。NK细胞是先天免疫系统的一部分，且在保护动物免受肿瘤和受病毒感染细胞侵害中起重要作用。NK细胞可以通过多组织相容性复合物(multihistocompatibilitycomplex)(MHC)I类表面分子将受感染细胞和肿瘤细胞与未感染的细胞区分开。NK细胞响应于细胞因子被激活，且在激活时释放破坏受感染细胞或肿瘤细胞的细胞毒性颗粒，例如穿孔素和粒酶(granzyme)B。NK细胞以细胞表面标记CD16+和CD56+为特征，但不表达CD4。T-细胞和B-细胞是适应性免疫反应的一部分，且识别非自身抗原。B-细胞通过抗体产生响应非自身抗原。不同类型的T-细胞以不同方式响应非自身抗原。细胞毒性T细胞(CTL)以标记CD3+、CD8+和TCRαβ为特征，而不表达CD4。肿瘤特异性CD8+CTL主要负责肿瘤消除。此外，CTL可以特异性识别肿瘤细胞，而不攻击相同组织的正常细胞。CTL产生毒性颗粒，毒性颗粒包含效力大的酶，效力大的酶包括粒酶B和穿孔素，其引起病变细胞或癌细胞死亡。T辅助细胞以细胞表面标记CD3+、CD4+和TCRαβ为特征。T辅助细胞产生细胞因子或其他分子，细胞因子或其他分子通过其他细胞或分子引导免疫反应。还未知T辅助细胞直接介导细胞的杀死，因而通常不包含细胞毒性颗粒，例如粒酶B或穿孔素。T辅助细胞的子分类为两种类型：T辅助细胞1型(Th1)和T辅助细胞2型(Th2)。Th1细胞介导细胞免疫且对于免疫介导的肿瘤根除是关键的，而Th2细胞介导体液免疫或抗体免疫。Th1细胞和Th2细胞是反调节的，增加Th1细胞会下调Th2细胞，反之亦然。已经开发了各种各样的免疫治疗方法和组合物，以增强或抑制患者的免疫反应。细胞治疗方法经常包括离体操作，例如细胞的增殖、分化和/或激活以及将这些细胞转移给向患者作为治疗。过继免疫疗法(adoptiveimmunotherapy)包括从患者中除去淋巴细胞，增强淋巴细胞的离体抗癌活性，将细胞生长至大临床相关数目，然后将细胞返回到患者。过继免疫疗法的最初实验包括从患者血液中分离出淋巴细胞，且在淋巴因子白细胞介素-2(IL-2)、免疫刺激物的存在下使淋巴细胞生长。然后将细胞返回到患者。这些淋巴细胞被称为淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)。使用从肿瘤本身分离出的淋巴细胞获得针对肿瘤细胞的更强的反应。使这些肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)在IL-2的存在下生长，且返回到身体以攻击肿瘤。过继免疫疗法是一种形式的免疫疗法，其中离体处理的细胞被引入身体内。临床前研究表明，抗肿瘤活性可以通过使用白细胞介素-2以及离体激活和扩增的自体淋巴细胞而增强。并且，高剂量药团(bolus)白细胞介素-2疗法的第一目标反应在接受白细胞介素2以及LAK细胞的患者中被观察到，其中LAK细胞是通过体外激活经淋巴去除术(lymphopheresis)收获的自体外周血淋巴细胞制备的，且最初，似乎白细胞介素-2/LAK的组合比仅白细胞介素-2活性更高。IL-2是由Th1辅助细胞产生的细胞因子。在临床研究未能证明向IL-2添加激活的LAK或TIL细胞比仅IL-2更有效之后，采用过继免疫疗法的兴趣下降了。CD4+T(Th)细胞对于激活和调节宿主针对感染的防御的大多数方面是至关重要的，且对于细胞毒性CD8+淋巴细胞(CTL)的充分作用是至关重要的。大部分肿瘤免疫学的研究已经集中于天然存在的自体肿瘤特异性T细胞，天然存在的自体肿瘤特异性T细胞主要是CD8+且可以从黑色素瘤和其他一些肿瘤分离出。这些细胞可以在体外扩增和再输入。这种类型的过继免疫疗法已经导致在一些患者中的目标肿瘤反应和长期生存，这些患者的疾病对于其他干预措施是难治的。虽然有使用CD8+细胞毒性T细胞作为过继免疫疗法的丰富临床经验，临床反应不佳强调需要提高这些疗法，以达到更高比例的患者中的肿瘤排斥。由于缺乏CD4+T细胞的辅助，CD8+淋巴细胞可能在很大程度上未能保持体内功能。在体外，CD8+细胞在暴露于MHC相容的细胞系时释放出大量的干扰素-γ(IFN-γ)，且溶解自体抗原阳性和MHCI类-阳性肿瘤。然而，肿瘤细胞的遗传不稳定性时常导致处理和呈现内源性抗原的能力的损失，内源性抗原使得肿瘤成为CD8+溶细胞T细胞的固有不可靠的目标。此外，CD8+T细胞似乎缺乏协调广大抗肿瘤反应的内在能力，其似乎是一些CD4+T细胞亚群固有的。虽然CTL过继转移的免疫疗法已在许多动物模型中证明有希望，这些结果对人类的翻译已经证明是困难的和难取得的。CD4+细胞(尤其是Th1亚型)将是有吸引力的可用免疫疗法医疗设备的附加物，以为过继转移的CD8+杀伤细胞提供天然的“帮助”。然而，在利用天然存在的肿瘤特异性CD4+细胞进行处理方面存在重大障碍。在任何给定患者人群中与CD4+辅助细胞结合的II类HLA的遗传多样性比在CD8+溶细胞(杀伤)-细胞中发现的I类HLA的情况复杂得多，使识别表位和TCR更有问题。此外，CD4+T-细胞比CD8+细胞在体外扩增更差，且培养条件显著影响它们的特性。最后，缺乏基于肿瘤特异性CD4+细胞的现实的动物模型。这些因素已经限制使用CD4+T细胞的翻译研究，且已经限制其临床应用。本专利技术公开了一种用于生产临床相关数目CD4+细胞的方法，CD4+细胞也含有溶细胞颗粒粒酶B和穿孔素，且都作为Th1细胞(产生IFN-γ而不产生IL-4)起作用，且具有用于治疗性癌症疫苗和过继免疫细胞治疗方案的NK样活性(识别和杀伤肿瘤细胞而不识别和杀伤正常细胞)。
技术实现思路
基于细胞的治疗性癌症疫苗(细胞免疫疗法)有希望作为新的毒性最小的用于治疗癌症的方法。这种方法的希望已在动物模型中被证明，但将这种希望翻译到临床是困难的(Bodey，Bodey等，2000)。最近FDA批准第一个细胞免疫治疗药物，(sipuleucel-T)，用于治疗无症状或症状最轻的转移性去势抵抗性前列腺癌的自体树突细胞免疫疗法(Kantoff,Higano等)，已经恢复了开发改善的用于临床应用的细胞治疗产品的热情。因为成功地翻译在动物中开发的细胞免疫治疗策略的免疫介导的抗肿瘤机制已证明是困难的，代替地我们集中于翻译已经已知引起显著的临床抗肿瘤效应的抗肿瘤免疫机制。有争议的是，人类有史以来曾经描述的效力最大和最有效的免疫介导的抗肿瘤机制是在非清髓性调节和移植HLA配对的干细胞之后发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，包括幼稚Th1/杀伤细胞，其中所述Th1/杀伤细胞具有Th1特性和对肿瘤细胞系的直接溶细胞活性；其中所述Th1/杀伤细胞为离体的激活的幼稚CD4+细胞，所述Th1/杀伤细胞表达粒酶B和穿孔素，所述Th1/杀伤细胞是通过以下获得的：在不加入外源性细胞因子的情况下通过使CD3和CD28细胞表面分子发生交联而激活所述幼稚CD4+细胞、冷冻所述激活的细胞、然后通过使CD3和CD28细胞表面分子发生交联而再次激活所述细胞，其中所述组合物包含使所述细胞保持激活状态的试剂。

【技术特征摘要】
2010.08.20 US 61/401,881;2011.06.09 US 61/495,0551.一种组合物，包括幼稚Th1/杀伤细胞，其中所述Th1/杀伤细胞具有Th1特性和对肿瘤细胞系的直接溶细胞活性；其中所述Th1/杀伤细胞为离体的激活的幼稚CD4+细胞，所述Th1/杀伤细胞表达粒酶B和穿孔素，所述Th1/杀伤细胞是通过以下获得的：在不加入外源性细胞因子的情况下通过使CD3和CD28细胞表面分子发生交联而激活所述幼稚CD4+细胞、冷冻所述激活的细胞、然后通过使CD3和CD28细胞表面分子发生交联而再次激活所述细胞，其中所述组合物包含使所述细胞保持激活状态的试剂。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述溶细胞活性包括NK特性。3.如权利要求1所述的组合物，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔·哈诺伊，
申请(专利权)人：免疫创新治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列,IL