通过施用重组VWF治疗凝血疾病制造技术

本发明专利技术提供通过单独地施用重组冯·威利布兰德因子或将其与因子VIII结合施用而治疗包括血友病和冯·威利布兰德病的凝血疾病的方法。

Treatment of coagulant disease by recombinant VWF

The present invention provides a method for the treatment of coagulant diseases including hemophilia and von Willy brandy disease by applying recombinant von Willibrand factor alone or combining it with factor VIII.

【技术实现步骤摘要】
通过施用重组VWF治疗凝血疾病本申请是中国专利申请《通过施用重组VWF治疗凝血疾病》的分案申请，原申请的申请号为201280038870.7，申请日为2012年06月11日。专利技术背景诸如冯·威利布兰德病(VWD)和血友病的凝血疾病通常因凝血级联中的缺陷所致。“冯·威利布兰德病(vonWillebrandDisease)”是指一组由冯·威利布兰德因子的缺陷所致的疾病。冯·威利布兰德因子有助于血小板聚在一起并粘附到血管壁，这是正常凝血的必要条件。甲型血友病是指因子VIII活性的缺陷，而乙型血友病是指因子IX缺陷。这些凝血病的当前治疗包括使用含有正常凝血因子的药物制剂的替代疗法。VWD和甲型血友病患者中的替代疗法涉及通过静脉输注反复施用含有正常凝血因子的制剂，这会对这些患者的生命构成沉重的负担，尤其是当难以实现静脉通路时。如果能够降低输注频率将是有利的。一种潜在可行的疗法是通过与诸如冯·威利布兰德因子(VWF)的第二分子的缔合而稳定因子VIII，结果是因子VIII的血浆半衰期得以延长。VWF是一种糖蛋白，它以一系列大小从约500至20,000kD的多聚体形式在血浆中循环。已经克隆了VWF的全长cDNA；该多肽对应于全长前原VWF(Eikenboom等人(1995)Haemophilia1,7790)的第23至764位氨基酸残基。多聚体形式的VWF由通过二硫键连接在一起的250kD的多肽亚单位组成。VWF介导最初的血小板与受损血管壁内皮下膜的粘附，其中较大的多聚体表现出增强的止血活性。多聚VWF通过VWF的A1结构域中的相互作用结合到血小板表面糖蛋白Gp1bα，从而有利于血小板粘附。VWF上的其他位点介导与血管壁的结合。因此，VWF在血小板与血管壁之间形成桥联，这对高剪切条件下的血小板粘附和初期止血必不可少。通常，内皮细胞分泌较大的多聚形式的VWF，而具有较低分子量的那些形式的VWF则由蛋白水解裂解产生。极大分子质量的多聚体储存在内皮细胞的韦伯潘力氏小体(Weibel-Palladebody)中，并在诸如凝血酶和组胺的激动剂刺激下释放。FVIII药代动力学取决于VWF水平得到多项之前的观察结果的支持。由于降低的VWF蛋白水平或降低的FVIII结合亲和力而导致的冯·威利布兰德病(VWD)中的FVIII结合活性降低导致内源性FVIII的稳态水平降低(在Castaman等人,DisordersofHemostasis88(1):94-108(2003)中有所概述)，并且改善VWF的存活已被提出作为改善FVIII稳定性的可行策略(Denis等人,ThrombHaemost.2008Feb；99(2):271-8；Turecek等人,Blood,2006,108(11):Abstract1002)。在重症甲型血友病患者之中，输注前VWF水平与输注FVIII的半衰期之间的相关性已由Fijnvandraat及其同事证实(Fijnvandraat等人,BrJHaematol.1995Oct；91(2):474-6)。在该项研究中，与具有正常VWF水平的患者中12.5小时的平均值相比，据观察，达平均VWF水平的200-300％的患者的FVIII半衰期为15-29小时。在另一项研究中，经证实，O型血患者具有与A型血患者(19.7小时)相比明显更低的VWF水平和更短的FVIII半衰期(15.3小时)(Vlot等人，ThrombHaemost.2000Jan；83(1):65-9)。已表明，化学修饰的VWF延长rFVIII的存活(Turecek等人,J.Thromb.Haemost.2007Jul9；5(2)，摘要可见于：http/www.blackwellpublishing.com/isth2007/abstract.asp？id＝64898)。因此，共同施用rVWF和rFVIII是治疗诸如冯·威利布兰德病和甲型血友病的凝血疾病的可行策略。专利技术概述因此，本专利技术提供通过向对其有需要的受试者单独地施用重组冯·威利布兰德因子(rVWF)或将其与重组因子VIII(rFVIII)结合施用而结果是因子VIII的体内半衰期得以延长以治疗凝血疾病的方法和组合。在一个方面，本专利技术提供用于治疗对其有需要的受试者中的冯·威利布兰德病或甲型血友病的方法，该方法包括：向受试者施用重组冯·威利布兰德因子(rVWF)，使得因子VIII半衰期与施用血浆源冯·威利布兰德因子的受试者相比得以延长，其中rVWF为高分子量VWF多聚体组合物，其包含至少20％的VWF十聚体或更高级的多聚体，并且其中rVWF具有比血浆源冯·威利布兰德因子更高的比活性。在另外的实施方案中并根据以上内容，本专利技术的方法包括向受试者共同施用重组冯·威利布兰德因子(rVWF)和重组因子VIII(rFVIII)。在另外的实施方案中并根据以上任一个，以单一组合物的形式一起施用rVWF和rFVIII。在另外的实施方案中并根据以上任一个，向受试者每剂施用1.0IU/kgVWF:RCo至150IU/kgVWF:RCo。在另外的实施方案中并根据以上任一个，向受试者每剂施用2IU/kgVWF:RCo至50IU/kgVWF:RCo。在另外的实施方案中并根据以上任一个，向受试者每剂施用5IU/kgVWF:RCo至40IU/kgVWF:RCo。在另外的实施方案中并根据以上任一个，向受试者每剂施用10IU/kgVWF:RCo至20IU/kgVWF:RCo。在另外的实施方案中并根据以上任一个，用于本专利技术方法的rVWF通过用弗林蛋白酶(Furin)处理而体外成熟。在另外的实施方案中并根据以上任一个，rVWF通过在中国仓鼠卵巢中表达(CHO细胞培养)而产生。在另外的实施方案中并根据以上任一个，rFVIII和rVWF通过在相同的细胞培养中表达而产生。在另外的实施方案中并根据以上任一个，向受试者每隔一天不超过一次施用rVWF。在另外的实施方案中并根据以上任一个，向受试者一周不超过两次施用rVWF。在另外的方面并根据以上任一个，高分子量VWF多聚体组合物将至少20％的VWF十聚体或更高级的多聚体在施用后维持至少3小时。在另外的实施方案中并根据以上任一个，因子VIII半衰期延长约5小时。在另外的实施方案中并根据以上任一个，因子VIII半衰期延长至少12小时。在另外的实施方案中并根据以上任一个，因子VIII半衰期延长至少24小时。在另外的实施方案中并根据以上任一个，因子VIII半衰期延长至少36小时。在另外的实施方案中并根据以上任一个，因子VIII半衰期延长至少48小时。在另外的实施方案中并根据以上任一个，其中因子VIII半衰期延长至少72小时。在另外的实施方案中并根据以上任一个，施用给受试者的FVIII促凝血活性(IUFVIII:C)与rVWF瑞斯托菌素辅因子活性(IUrVWF:RCo)的比率在2:1与1:4之间。在另外的实施方案中并根据以上任一个，施用给受试者的FVIII促凝血活性(IUFVIII:C)与rVWF瑞斯托菌素辅因子活性(IUrVWF:RCo)的比率在3:2与1:3之间。在另外的实施方案中并根据以上任一个，施用给受试者的FVIII促凝血活性(IUFVIII:C)与rVWF瑞斯托菌素辅因子活性(IUrVW本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗对其有需要的受试者中的冯·威利布兰德病或甲型血友病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用重组冯·威利布兰德因子(rVWF)，使得因子VIII半衰期与施用血浆源冯·威利布兰德因子的受试者相比得以延长，其中所述rVWF为高分子量VWF多聚体组合物，其包含至少20％的VWF十聚体或更高级的多聚体，并且其中所述rVWF具有比血浆源冯·威利布兰德因子更高的比活性。

【技术特征摘要】
2011.06.10 US 61/495,884;2011.07.26 US 61/511,901;1.一种用于治疗对其有需要的受试者中的冯·威利布兰德病或甲型血友病的方法，所述方法包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·沙伊芙林格，P·图雷切克，B·埃文斯汀，Y·W·王，M·T·休特，
申请(专利权)人：百深有限责任公司，百深公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH