TMD1蛋白用于治疗骨质流失疾病制造技术

本发明专利技术是关于一种组合物用于制备治疗骨质流失疾病、病况或失调的药物的方法，其中所述组合物包含一医药上有效剂量的血栓调节蛋白类凝集素结构域TMD1。

TMD1 protein is used to treat bone loss diseases

The present invention relates to a composition method for the preparation of a medicament for treating bone loss diseases, illness or disorder, wherein the composition comprises a pharmaceutically effective dose of thrombomodulin lectin like domain of TMD1.

【技术实现步骤摘要】
TMD1蛋白用于治疗骨质流失疾病
本专利技术是关于一种通过抑制核因子-κB配体的受体活化剂（receptoractivatorofnuclearfactor-κBligand，RANKL）诱发的蚀骨细胞分化，以治疗骨质流失疾病的方法。
技术介绍
骨骼是在一种称作改造的过程中不断被重塑的一种活器官。在这个过程中，称为蚀骨细胞的细胞再吸收骨组织，而称为成骨细胞的细胞沉积新的骨组织。成骨细胞可以被封锁在其所分泌的骨基质内，促其分化成骨细胞。这些细胞被认为在感测骨负载中扮演重要的角色。在高负载条件下，成骨细胞增加骨质量，而在低负载条件下，蚀骨细胞去除骨组织，优化其结构。因此，蚀骨细胞与骨质流失或骨密度的降低有密切的关系。人们可能因为生理因素或其它外在因素而骨质流失或骨密度降低，导致骨质疏松症。骨质疏松症的症状包括骨折、背痛、活动能力受限（甚至无法移动）。目前骨质疏松症的治疗方法包括改善营养、运动、药物治疗等。关于药物治疗，临床使用的药物包括：雌激素或雌激素的同功异构物、治疗糖皮质激素诱发的骨质疏松症的药物、二磷酸盐或降钙素等。然而上述这些药物全都有副作用，例如，二磷酸盐会造成恶心、消化不良、腹泻或便秘，而降钙素会引起面部潮红、频尿、恶心或皮肤瘙痒。最重要的是，上述这些药物不能抑制蚀骨细胞的产生，因此不能有效地治疗骨质疏松症。核因子-κB配体受体活化剂（receptoractivatorofnuclearfactor-κBligand，RANKL）是诱发衍生自骨髓的巨噬细胞（BMM）的蚀骨细胞分化的关键因素。
技术实现思路
本专利技术的目的是治疗与骨质流失相关的疾病、病况或失调。在本专利技术中，通过抑制核因子-κB配体受体活化剂（RANKL）诱发的蚀骨细胞分化的受体活化剂，达到治疗骨质疏松症的效果。在本专利技术中使用的血栓调节蛋白（TM）是天然存在的酶。血栓调节蛋白类凝集素结构域（TM的第一结构域，TMD1）可以配制成用于抑制RANKL的活化的蛋白质药物，从而通过抑制蚀骨细胞分化达成骨质疏松症的治疗。本专利技术在RAW264.7细胞中使用RANKL诱发蚀骨细胞分化的模型，第一次显示TMD1的补充能以剂量依赖的方式显著的缓解蚀骨细胞分化和骨质再吸收。总而言之，如图7所阐述的模型所示，本专利技术证明由单核细胞/巨噬细胞表达的TM，是蚀骨细胞生成的负调节剂，rTMD1的治疗能抑制OVX诱发的骨质流失。这些观察结果，为骨质流失的病症提供了新的治疗策略。因此，TMD1可能是骨质流失疾病的新治疗方法。因此，本专利技术提供了一种在有需要的个体中治疗骨质流失疾病、病况或失调的方法，包含投予所述个体一医药上有效剂量的组合物，其包含血栓调节蛋白类凝集素结构域（TMD1）。在一实施例中，所述方法抑制个体体内的蚀骨细胞分化。在另一实施例中，所述方法抑制个体体内核因子-κB配体受体活化剂(RANKL)的活化。在一实施例中，所述骨质流失疾病、病况或失调包括、但不限于骨质疏松症或风湿性关节炎。在一实施例中，所述个体是一个哺乳类动物。在另一实施例中，所述个体是人类。本专利技术另提供了一种组合物用于制备治疗骨质流失疾病、病况或失调的药物的方法，其中所述组合物包含一医药上有效剂量的血栓调节蛋白类凝集素结构域TMD1。在一实施例中，所述组合物抑制蚀骨细胞分化。在另一实施例中，所述组合物抑制核因子-κB配体受体活化剂RANKL的活化。在一实施例中，所述骨质流失疾病、病况或失调包含骨质疏松症或风湿性关节炎。在一实施例中，所述药物是用于哺乳动物。在另一实施例中，所述药物是用于人类。附图说明图1显示在RAW264.7-分化的蚀骨细胞中下调的TM表达。(A)以M-CSF（20ng/ml）与RANKL（30ng/ml）处理4天的RAW264.7细胞和分化的类蚀骨细胞中，使用IF染色侦测到的TM蛋白表达（原始放大倍数×200)。(B)经M-CSF和RANKL处理的RAW264.7细胞中，TM和CATK表达的免疫印迹分析。所示的代表性数据得自三个独立实验。(C)将(B)以定量表示。**P<0.01。图2显示在PBMC分化的蚀骨细胞中下调的TM表达。(A)经M-CSF（20ng/ml）和RANKL（30ng/ml）处理1周的PBMC和分化的类蚀骨细胞（osteoclast-likecell）中，使用IF染色侦测到的TM蛋白表达。（原始放大倍数×200）(B)经M-CSF和RANKL处理的PBMC中，TM和CATK表达的免疫印迹分析。所示的代表性数据得自三个独立实验。(C)(B)的定量表征。**P<0.01，***P<0.001。图3显示TM的骨髓特异性缺失提高蚀骨细胞的生成。(A)分化自原代培养的巨噬细胞的蚀骨细胞的TRAP染色分析，该巨噬细胞是得自经M-CSF和各种浓度的RANKL处理以进行分化的TMflox/flox和LysMcre/TMflox/flox小鼠（原始放大倍数×200）。（B）每孔中TRAP阳性多核蚀骨细胞（MNC）的定量。***P<0.001。实验重复三次。图4显示巨噬细胞上的TM类凝集素结构域延缓RANKL诱发的蚀骨细胞形成。(A)分化自原代培养的巨噬细胞的蚀骨细胞的TRAP染色分析，该巨噬细胞是得自经M-CSF和各种浓度的RANKL处理以进行分化的TMWT/LeD和TMLeD/LeD小鼠（原始放大倍数×200）。（B）使用4-NPP作为基质的TRAP活性定量。*P<0.05，**P<0.01。实验重复三次。图5显示TM的不足提高细胞外HMGB1的产生和卵巢切除诱发的骨质流失。在(A)来自TMflox/flox和LysMcre/TMflox/flox小鼠和(B)来自TMWT/LeD和TMLeD/LeD小鼠的原代培养巨噬细胞中，以免疫印迹分析评量细胞外HMGB1的产生。使用谷胱甘肽S-转移酶（GST）作为内部对照。CM：条件培养基。所示的代表性数据来自三个独立实验。(C)在卵巢切除术4周后，以μCT扫描侦测胫骨的骨质流失。虚线表示横截面。(D)小梁骨体积分数（BV/TV）的定量结果。BV、小梁骨体积；TV、总骨体积。**P<0.01。n=5。(E)TM的不足对于促进骨质流失的潜在机制。图6显示重组TM类凝集素结构域（rTMD1）抑制RANKL诱发的骨质再吸收并降低卵巢切除术诱发的骨质流失。(A)经RANKL和rTMD1处理的RAW264.7细胞中，骨质再吸收的试验结果。实验重复三次。（B）在来自TMLeD/LeD小鼠的骨髓巨噬细胞/单核细胞中，因应rTMD1的处理细胞外HMGB1的产生。CM：条件培养基。Lys：细胞溶解产物。(C)以各种不同剂量的腹膜内rTMD1注射处理的卵巢切除的野生型小鼠中，骨体积分数（BV/TV）的定量结果。BV、小梁骨体积；TV、总骨体积。n=5。(D)巢切除术4周内、经过或未经过rTMD1治疗的野生型小鼠，藉μCT扫描侦测到的胫骨骨质流失。(E)(D)的定量结果。n=5。(F)rTMD1减缓卵巢切除术诱发的骨质流失的建议机制。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。图7显示蚀骨细胞生成中的TM的示意性模型。在蚀骨细胞生成的过程中，RANKL降低TM表达并促进单核细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物用于制备治疗骨质流失疾病、病况或失调的药物的方法，其中所述组合物包含一医药上有效剂量的血栓调节蛋白类凝集素结构域TMD1。

【技术特征摘要】
2016.01.29 US 62/288,4301.一种组合物用于制备治疗骨质流失疾病、病况或失调的药物的方法，其中所述组合物包含一医药上有效剂量的血栓调节蛋白类凝集素结构域TMD1。2.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物抑制蚀骨细胞分化...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑琮霖，叶竹来，何美泠，施桂月，吴华林，
申请(专利权)人：高雄医学大学，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71