一种用液相色谱法分离测定利伐沙班及其有关物质的方法技术

本发明专利技术属分析化学领域，公开了一种用液相色谱法分离测定利伐沙班及其有关物质的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以含有缓冲盐、离子对试剂及磷酸的水溶液和有机相混合作为流动相，通过梯度洗脱分离测定。本发明专利技术解决了利伐沙班及其有关物质的分离测定问题，从而确保了利伐沙班的质量，实现利伐沙班原料药及其有关物质的质量可控。

【技术实现步骤摘要】
一种用液相色谱法分离测定利伐沙班及其有关物质的方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种用液相色谱法分离测定利伐沙班及其有关物质的方法。
技术介绍
利伐沙班，英文名为Rivaroxban，是由拜耳和强生公司联合开发的一种高选择性直接抑制因子Xa的口服抗凝药，在临床上用于择期髋关节或膝关节置换手术成年患者，以预防静脉血栓形成。该药具有安全性高、可口服、无交叉耐药性、不良反应小等优点。利伐沙班化学名为：5-氯-氮-({(5S)-2-氧-3-[-4-(3-氧-4-吗啉基)苯基]-1,3-唑烷-5-基}甲基)-2-噻吩-羧酰胺(5-Chloro-thiophene-2-carboxylicacid{2-oxo-3-[4-(3-oxo-morpholin-4-yl)-phenyl]-oxazolidin-5-yl-methyl}-amide)，分子式为C19H18ClN3O5S。利伐沙班结构式为：利伐沙班的生产工艺过程中，有些重要的中间体可能会去除不完全，从而影响药物纯度和质量；而在药物的贮藏和运输过程中，药物也可能经光照、高温、高湿等特殊条件降解产生降解杂质；上述有关物质皆无治疗作用，还可能影响药物的稳定性和疗效，甚至危害人体健康。对于利伐沙班主要控制的有机杂质主要为合成用起始原料、副产物、中间体及降解产生的杂质。分别是苯氨基吗啉酮(起始原料1)、环氧代邻苯二甲酰亚胺(起始原料2)、1,1’-羰基二咪唑(起始原料3)、5-氯噻吩-2-羧酸(起始原料4)、羟基氨基邻苯二甲酰亚胺、2-((2R)-2-羟基-3-{[4-(3-氧吗啉-4-基)苯基]氨基}丙基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(中间体1)、氧代邻苯二甲酰亚胺(中间体2)、4-{4-[(5S)-5-(氨基甲基)-2-氧代-1,3-噁唑烷-3-基]苯基}吗啉-3-酮盐酸盐(中间体3)、乙酰草酰胺((S)-N-((2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基)乙酰胺)、二草酰胺-脲(1,3-双(((S)-2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基)脲)、脱氯化合物((S)-N-((2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基)噻吩-2-甲酰胺)、4,5-二氯化合物((S)-4,5-二氯-N-((2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基)噻吩-2-甲酰胺)、二胺((S)-5-氯-N-(4-(5-((5-氯噻吩-2-甲酰胺)甲基)-2-氧代恶唑烷-3-基)苯基)-N-(2-(2-(甲氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)噻吩-2-甲酰胺)、三胺(5-氯-N-(4-((S)-5-((5-氯噻吩-2-甲酰胺)甲基)-2-氧代恶唑烷-3-基)苯基)-N-(2-(2-氧代-2-(((S)-2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基氨基)乙氧基)乙基噻吩-2-甲酰胺)。(1)乙酰草酰胺：(S)-N-((2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基)乙酰胺(2)二-草酰胺-脲：1,3-双(((S)-2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基)脲(3)脱氯化合物：(S)-N-((2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基)噻吩-2-甲酰胺(4)4,5-二氯化合物：(S)-4,5-二氯-N-((2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基)噻吩-2-甲酰胺(5)二胺：(S)-5-氯-N-(4-(5-((5-氯噻吩-2-甲酰胺)甲基)-2-氧代恶唑烷-3-基)苯基)-N-(2-(2-(甲氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)噻吩-2-甲酰胺(6)三胺：5-氯-N-(4-((S)-5-((5-氯噻吩-2-甲酰胺)甲基)-2-氧代恶唑烷-3-基)苯基)-N-(2-(2-氧代-2-(((S)-2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基氨基)乙氧基)乙基噻吩-2-甲酰胺(7)氧代邻苯二甲酰亚胺：(S)-2-(2-氧代-3-(4-(3-氧吗啉基)苯基)恶唑-5-基)甲基)异吲哚-1,3-二酮(中间体2)(8)苯氨基吗啉酮：(9)环氧代邻苯二甲酰亚胺：(10)1,1’-羰基二咪唑：(11)5-氯噻吩-2-羧酸：(12)羟基氨基邻苯二甲酰亚胺：2-((2R)-2-羟基-3-{[4-(3-氧吗啉-4-基)苯基]氨基}丙基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(中间体1)：(13)4-{4-[(5S)-5-(氨基甲基)-2-氧代-1,3-噁唑烷-3-基]苯基}吗啉-3-酮盐酸盐(中间体3)：利伐沙班中的杂质去除不完全，将会引入原料药终产品，从而影响药物纯度和质量。因此，实现利伐沙班及其有关物质的分离和定量测定，在利伐沙班的生产及其质量控制方面具有重要的现实意义。
技术实现思路
基于现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供了一种用液相色谱法分离测定利伐沙班及其有关物质的方法，以实现利伐沙班与杂质以及杂质与杂质之间的有效分离。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种用液相色谱法分离测定利伐沙班及其有关物质的方法，包括以下步骤：(1)样品的制备：分别称取利伐沙班对照品、乙酰草酰胺对照品、二-草酰胺-脲对照品、三胺对照品、脱氯化合物对照品、氧代邻苯二甲酰亚胺对照品、4,5-二氯化合物对照品、二胺对照品、苯胺基吗啉酮对照品、环氧代邻苯二甲酰亚胺对照品、1,1’-羰基二咪唑对照品、5-氯噻吩-2-羧酸对照品、羟基氨基邻苯二甲酰亚胺对照品、4-{4-[(5S)-5-(氨基甲基)-2-氧代-1,3-噁唑烷-3-基]苯基}吗啉-3-酮盐酸盐对照品，将各对照品分别溶于混合溶剂中，得到对照品溶液，将对照品溶液混匀，得到样品，每1L样品中含每种对照品4～6μg；所述混合溶剂由乙腈和无机溶剂按照体积比3:1～2混匀而成，所述无机溶剂为水、磷酸溶液或含有磷酸盐及磷酸的水溶液；(2)测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以流动相A及流动相B混合进行梯度洗脱，流动相流速为0.8～1.2mL/min，用紫外检测器进行检测，检测波长为205～280nm，色谱柱柱温箱温度为30～50℃；其中，流动相A由甲醇和含有缓冲盐、离子对试剂及磷酸的水溶液混合而成，且流动相A中甲醇的体积分数为5～10％，含有缓冲盐、离子对试剂及磷酸的水溶液中缓冲盐的浓度为10～100mmol/L、离子对试剂的浓度为5～50mmol/L、H3PO4的浓度为2～6mmol/L；流动相B为乙腈和水的混合液，且流动相B中乙腈的体积分数为90～95％。优选地，步骤(1)中作为无机溶剂的磷酸溶液的浓度为0.008～0.015mol/L。优选地，步骤(2)中所述梯度洗脱按照以下设置：优选地，步骤(1)中所述含有磷酸盐及磷酸的水溶液中，磷酸盐的浓度为10～100mmol/L、H3PO4的浓度为2～6mmol/L。优选地，步骤(2)中所述梯度洗脱按照以下设置：优选地，步骤(3)中所述缓冲盐为磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐及高氯酸盐中的一种。进一步，步骤(3)中所述缓冲盐为磷酸二氢钾。优选地，步骤(3)中所述离子对试剂为己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠及十二烷基硫酸钠的一种。优选地，步骤(3)中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用液相色谱法分离测定利伐沙班及其有关物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品的制备：分别称取利伐沙班对照品、乙酰草酰胺对照品、二‑草酰胺‑脲对照品、三胺对照品、脱氯化合物对照品、氧代邻苯二甲酰亚胺对照品、4,5‑二氯化合物对照品、二胺对照品、苯胺基吗啉酮对照品、环氧代邻苯二甲酰亚胺对照品、1,1’‑羰基二咪唑对照品、5‑氯噻吩‑2‑羧酸对照品、羟基氨基邻苯二甲酰亚胺对照品、4‑{4‑[(5S)‑5‑(氨基甲基)‑2‑氧代‑1,3‑噁唑烷‑3‑基]苯基}吗啉‑3‑酮盐酸盐对照品，将各对照品分别溶于混合溶剂中，得到对照品溶液，将对照品溶液混匀，得到样品，每1L样品中含每种对照品4～6μg；所述混合溶剂由乙腈和无机溶剂按照体积比3:1～2混匀而成，所述无机溶剂为水、磷酸溶液或含有磷酸盐及磷酸的水溶液；(2)测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以流动相A及流动相B混合进行梯度洗脱，流动相流速为0.8～1.2mL/min，用紫外检测器进行检测，检测波长为205～280nm，色谱柱柱温箱温度为30～50℃；其中，流动相A由甲醇和含有缓冲盐、离子对试剂及磷酸的水溶液混合而成，且流动相A中甲醇的体积分数为5～10％，含有缓冲盐、离子对试剂及磷酸的水溶液中缓冲盐的浓度为10～100mmol/L、离子对试剂的浓度为5～50mmol/L、H3PO4的浓度为2～6mmol/L；流动相B为乙腈和水的混合液，且流动相B中乙腈的体积分数为90～95％。...

【技术特征摘要】
1.一种用液相色谱法分离测定利伐沙班及其有关物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品的制备：分别称取利伐沙班对照品、乙酰草酰胺对照品、二-草酰胺-脲对照品、三胺对照品、脱氯化合物对照品、氧代邻苯二甲酰亚胺对照品、4,5-二氯化合物对照品、二胺对照品、苯胺基吗啉酮对照品、环氧代邻苯二甲酰亚胺对照品、1,1’-羰基二咪唑对照品、5-氯噻吩-2-羧酸对照品、羟基氨基邻苯二甲酰亚胺对照品、4-{4-[(5S)-5-(氨基甲基)-2-氧代-1,3-噁唑烷-3-基]苯基}吗啉-3-酮盐酸盐对照品，将各对照品分别溶于混合溶剂中，得到对照品溶液，将对照品溶液混匀，得到样品，每1L样品中含每种对照品4～6μg；所述混合溶剂由乙腈和无机溶剂按照体积比3:1～2混匀而成，所述无机溶剂为水、磷酸溶液或含有磷酸盐及磷酸的水溶液；(2)测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以流动相A及流动相B混合进行梯度洗脱，流动相流速为0.8～1.2mL/min，用紫外检测器进行检测，检测波长为205～280nm，色谱柱柱温箱温度为30～50℃；其中，流动相A由甲醇和含有缓冲盐、离子对试剂及磷酸的水溶液混合而成，且流动相A中甲醇的体积分数为5～10％，含有缓冲盐、离子对试剂及磷酸的水溶液中缓冲盐的浓度为10～100mmol/L、离子对试剂的浓度为5～50mmol/L、H3PO4的浓度为2～6mmol/L；流动相B为乙腈和水的混合液，且流动相B中乙腈的体积分数为90～95％。2.根据权利要求1所述用液相...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏巧，张庆霞，张华丽，
申请(专利权)人：乐普药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41