稳定的活的减毒重组登革疫苗制造技术

本发明专利技术涉及活的减毒重组四价登革疫苗和生产稳定的组合物的方法的领域。本发明专利技术具体地涉及稳定的组合物和使用此类稳定的组合物的方法，所述稳定的组合物包含活的减毒重组登革病毒、稳定剂、膨胀剂和任选地缓冲剂，其中所述活的减毒登革活病毒由Δ30和/或Δ31缺失或突变的登革毒株产生。更具体地，本发明专利技术涉及用于冷冻干燥的活的减毒免疫原性组合物和/或疫苗组合物的稳定剂，所述减毒免疫原性组合物和/或疫苗组合物除其他以外可以包含登革病毒。本发明专利技术还涉及可以包含这些稳定剂的登革病毒的稳定的、冷冻干燥的活的减毒免疫原性组合物和/或疫苗组合物。本发明专利技术的其他方面在以下公开内容中描述或者由以下公开内容是明显的且在本发明专利技术的范围内。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】稳定的活的减毒重组登革疫苗专利
本专利技术涉及活的减毒重组四价登革疫苗和生产稳定的组合物的方法的领域。本专利技术具体地涉及稳定的组合物和使用此类稳定的组合物的方法，所述稳定的组合物包含活的减毒重组登革病毒、稳定剂、膨胀剂(bulkingagent)和任选地缓冲剂，其中所述活的减毒登革病毒由△30和/或Δ31缺失或突变的登革毒株产生。更具体地，本专利技术涉及用于冷冻干燥的活的减毒免疫原性组合物和/或疫苗组合物的稳定剂，所述减毒免疫原性组合物和/或疫苗组合物除其他以外可以包含登革病毒。本专利技术还涉及可以包含这些稳定剂的登革病毒的稳定的、冷冻干燥的活的减毒免疫原性组合物和/或疫苗组合物。本专利技术的其他方面在以下公开内容中描述或者由以下公开内容是明显的，且在本专利技术的范围内。专利技术背景登革病毒(DENV)是黄病毒科(Flaviviridae)的黄病毒属(Flavivirus)的成员，该属还包括黄热病病毒(YFV)、西尼罗河病毒(WNV)、日本脑炎病毒(JEV)和蜱传脑炎病毒。黄病毒属基因组是包含单个开放阅读框的单链、正义、11千碱基的RNA分子。RNA被翻译为被加工为至少10个基因产物的多蛋白：3个结构蛋白-核衣壳或核心(C)，前膜(Premembrane)(prM)&包膜(E)&7个非结构(NS)蛋白-NS1、2A、2B、3、4A、4B、&5。基于中和测定，存在四种抗原性不同的血清型(DENV1-4)。所有的血清型均能胜任引起无症状的表现以及更严重和致命的DHF和DSS。DENV主要通过伊蚊属(Aedes)蚊(埃及伊蚊(Aedesaegypti)和白纹伊蚊(Aedesalbopictus))传播至人类。特别是在亚太地区和美洲，登革疾病的发病率是高的。所有四种DENV血清型现在在这些地区传播(circulating)。随着国际旅行和气候变化的增加，在传统热带和亚热带地区之外的人们也处于登革感染的风险。登革疾病正成为最重要的新兴媒介传播(vector-borne)病毒疾病之一。在过去的20年中，登革已经迅速传播，并且在多于100个国家流行。估计每年全球发生5000万例登革感染病例，其中约500,000例严重登革病例和20,000例死亡病例。大约有五分之二的世界人口处于登革感染的风险中。因此，预防和治疗登革热是许多国家政府面临的一个重要问题。在失去生命，特别是儿童失去生命方面，以及还在世界新兴经济体遏制疾病的经济低迷方面两者中，登革已经成为巨大的负担。以任何血清型的原发性感染均会诱导针对该特定血清型的终身免疫，但由于被称为抗体依赖性增强(ADE)的现象，不同血清型的随后感染可能增加疾病的严重程度。因此，将是安全且成本有效的适合所有四种血清型的有效疫苗候选物的开发特别是对于最易于感染的儿童和年轻成人来说具有重要意义。理想的登革疫苗应该满足几个商业上可行的因素。第一，疫苗必须针对四种DENV血清型中的每一种是保护性的，以降低ADE的风险。第二，免疫接种应该是安全的，并且不引起由交叉反应性抗体或交叉反应性T细胞引起的不可接受的副作用。第三，费用应该是最需要疫苗的个体能负担得起的。对于登革疫苗的开发还存在几个障碍。一个是复杂的发病机制尚未被完全地理解。另一个障碍是缺乏合适的动物模型。尽管存在可用于许多密切相关病毒的疫苗，当前不存在可用于登革的得到许可的疫苗。世界卫生组织(theWorldHealthOrganization)已经长期优先开发登革疫苗和治疗剂。但迄今，由于用于遏制登革的任何种类的疫苗或治疗的开发失败，迄今所追求的安排均是媒介控制和单独的预防步骤，这难以维持并且昂贵。媒介控制程序不足以控制登革病毒的传播。在现实替代品的不存在下，登革疫苗的开发已经成为公共卫生的当务之急(imperative)。相似于其他病毒疫苗，候选登革疫苗的成功或失败可能良好地取决于中和抗体。单一DENV型感染导致对用相同病毒类型的攻击的终身抗体应答和坚实保护，但仍然易受其他登革血清型的影响。活的减毒疫苗的开发努力被认为是有效的方法之一。野生型登革病毒可以通过在组织培养中的连续传代来减毒以用于在人类中维持其产生免疫应答的能力。在另一个实施方案中，嵌合疫苗候选物通过用登革蛋白修饰得到许可的黄热病毒疫苗来产生。活的减毒疫苗的另一个重要特征是它能够诱导持续的免疫应答，非常接近地模拟自然感染情况下的应答。已经开发并且在人类或非人类灵长类动物中评价了几种活的减毒登革疫苗候选物。第一种活的减毒登革疫苗候选物是通过野生型登革病毒在小鼠脑中连续传代并且选择针对人类减毒的突变体而开发的宿主范围突变体(Kimura,R.&Hotta,S.1944JapaneseJBacteriology1:96-99；Sabin,A.B.&Schlesinger,R.W.1945Science101:640；Wisseman,C.L.Jr.等1963A'nJTropMed12:620-623)。尽管这些候选疫苗病毒在人类中是免疫原性的，它们在细胞培养中的不良生长阻碍了进一步的开发。另外的活的减毒DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4疫苗候选物已经通过在组织培养中的连续传代开发(Angsubhakorn,S.等1994SoutheastAsianJTropMedPublicHealth25:554-9；Bancroft,W.H.等1981InfectImmuno31:698-703；Bhamarapravati,N.等1987BullWorldHealthOrgan65:189-95；Eckels,K.H.等1984AmJTropMedHyg33:684-9；15Hoke,C.H.Jr.等1990AmJTropMedHyg43:219-26；Kanesa-thasan,N.等2001Vaccine19:3179-88)或通过化学诱变开发(McKee,K.T.Jr.等1987AmJTropMedHyg36:435-42)。已经证明，使用这些方法在四种登革病毒血清型中的每一种的减毒与免疫原性之间达到令人满意的平衡并且配制针对四种登革病毒中的每一种均安全且令人满意的免疫原性的四价疫苗是非常困难的(Kanesa-thasan,N.等2001Vaccine19:3179-88；Bhamarapravati,N.&Sutee,Y.2000Vaccine18增刊2:44-7)。免疫接种的目标是通过诱导针对四种血清型中的每一种的长效(long-lived)中和抗体应答来防止登革病毒疾病。需要针对所有四种血清型的同时保护，因为疾病严重程度的增加可能发生在具有预先存在的异质型登革病毒抗体的人员中。此类免疫接种可以用活的减毒病毒疫苗经济地实现。申请人已经成功开发了此类疫苗，如在WO1993006214、WO2002095075、WO2003092592和WO2008022196中报道的。在美国亚特兰大的国立卫生研究院(theNationalInstitutesofHealth)(NIH)，野生型登革病毒毒株的减毒是由病毒基因组3'末端非翻译区新颖的30个核苷酸的缺失引起的。该缺失导致具有病毒血症减少的安全和完全减毒的病毒毒株，如在猴和人类的几个研本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含活的减毒重组登革病毒，其中，所述组合物的稳定性通过人类血清白蛋白和/或明胶或水解明胶和/或胶原或水解胶原的存在来增强。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.30 IN 3122/DEL/20151.一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含活的减毒重组登革病毒，其中，所述组合物的稳定性通过人类血清白蛋白和/或明胶或水解明胶和/或胶原或水解胶原的存在来增强。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，所述疫苗组合物关于活的减毒重组登革病毒是四价的。3.根据权利要求1或2所述的疫苗组合物，其中所述登革病毒携带Δ30突变和/或Δ31突变。4.根据权利要求1或3所述的疫苗组合物，其中所述登革毒株选自登革病毒1型、登革病毒1型、登革病毒3型、登革病毒4型。5.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中一个或更多个登革毒株是嵌合体，所述嵌合体包含登革1型骨架或登革2型骨架或登革3型骨架或登革4型骨架。6.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述登革毒株具有为在Vero细胞或人类肝细胞系HuH-7中的温度敏感性的表型。7.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，所述疫苗组合物还包含膨胀剂和/或缓冲剂。8.根据权利要求7所述的疫苗组合物，其中所述膨胀剂选自包括以下的组：乳糖、蔗糖、甘露糖醇、海藻糖等。9.根据权利要求7所述的疫苗组合物，其中所述缓冲剂选自包括以下的组：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、谷氨酸单钠等。10.根据权利要求1、7-9所述的疫苗组合物，所述疫苗组合物还包含补充培养基。11.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述组合物的最终pH是约6-7。12.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述组合物是冻干的。13.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述登革毒株在VERO细胞中繁殖。14.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗组合物，其中所述登革病毒以3.0log10PFU/0.5ml的剂量存在。15.一种通过重构根据权利要求12所述的冻干的疫苗获得的稳定的疫苗。16.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中人类血清白蛋白和/或明胶或水解明胶以1mg/0.5ml至30mg/0.5ml的量存在，和/或胶原或水解胶原以1mg/0.5ml至30mg/0.5ml的量存在。17.根据权利要求16所述的疫苗组合物，其中人类血清白蛋白以10mg/0.5ml-15mg/0.5ml的量存在。18.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：拉杰什·贾殷，苏克吉特·辛格，拉维特·让比，
申请(专利权)人：万能药生物有限公司，
类型：发明
国别省市：印度,IN