低浓度尼古丁的应用和药物组合物及制备方法技术

本发明专利技术公开了低浓度尼古丁的应用和药物组合物及制备方法，具体是低浓度尼古丁在制备诱导硫氧还蛋白‑1表达的诱导剂中的应用，涉及医药领域。发明专利技术人首次发现尼古丁作为诱导硫氧还蛋白‑1表达的诱导剂的应用，进一步扩宽了尼古丁的应用范围，克服技术偏见，本发明专利技术的诱导剂和药物组合物疗效显著、安全性高，对于临床上预防或治疗老年性痴呆，抑郁症等疾病有重要意义。

Application of low concentration nicotine and pharmaceutical composition and preparation method thereof

The invention discloses the application of low concentration nicotine and a pharmaceutical composition and preparation method, in particular, the application of low concentration nicotine in the preparation of inducer for the preparation of induced thioxin 1 expression, which involves the pharmaceutical field. The inventor has first discovered that nicotine is used as an inducer to induce the expression of thioredoxin 1, which further widens the application range of nicotine and overcomes the technical prejudice. The inventive inducer and drug composition have significant curative effect and high safety, and are serious for the clinical prevention or treatment of Alzheimer's disease and depression. It's meaning.

【技术实现步骤摘要】
低浓度尼古丁的应用和药物组合物及制备方法
本专利技术提供一种尼古丁的应用，尤其是低浓度尼古丁的应用，还涉及该药物组合物及其制备方法，属于医药领域。
技术介绍
烟碱（Nicotine），即6，10，14，18-四甲基-5，9，13，17-十九烷四烯-2-酮的单顺式和全反式异构体的混合物，俗名尼古丁，尼古丁的名字，来自烟草这种植物的学名Nicotianatabacum，而烟草的学名是以一位驻葡萄牙的法国人JeanNicotdeVillemain而命名的。它是一种存在于茄科植物（茄属）中的生物碱，也是烟草的重要成分。它的吸收途径广泛：消化道、呼吸道和皮肤。尼古丁会使人上瘾或产生依赖性，重复使用尼古丁也增加心脏速度和升高血压并降低食欲。大剂量的尼古丁会引起呕吐以及恶心。单论急性毒性，烟碱毫无疑问是剧毒品。实际吸烟过程中，吸烟者不可能将整支烟的尼古丁提取后注入静脉，也不会把一支烟全部吞下。通过计算，可得知：每支香烟中尼古丁含量约为：0.75x2%（取烟叶尼古丁含量中间值）=15毫克。吸食每支卷烟后，进入体内尼古丁量为：15毫克x20%=3毫克。经血液浓度测量不吸烟者<37nM)，吸烟者62～308nM，中毒者>500nM。PC12细胞是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(ratpheochromocytomacells)，来源于大鼠肾上腺骨髓瘤。在神经生长因子作用下分化为具有交感神经节神经元表型的细胞，能够合成并储存多巴胺。因此，分化的PC12细胞常常被用作多巴胺能神经元的细胞模型。它具有神经内分泌细胞的一般特征，用于神经生理和药理的研究，可以用来作为研究老年性痴呆和抑郁症的细胞模型。如：PC12细胞可以用来研究老年性痴呆的发病机制和药物筛选。还可以用来研究抑郁症的分子机制和抑郁症治疗药物的筛。硫氧还蛋白-1（thioredoxin-1）是氧化还原调节蛋白，具有抗氧化和保护神经元的功能可以作为神经营养的共同因子。有关尼古丁的应用也有较多报道，可应用于消化道溃疡的治疗中以及可减轻帕金森病患者的症状等。然而，具体的低浓度尼古丁在PC12细胞中诱导硫氧还蛋白-1（thioredoxin-1）的研究未见报导。
技术实现思路
为了填补上述技术空白，本专利技术第一目的在于提供低浓度尼古丁在制备诱导硫氧还蛋白-1的诱导剂的应用；第二目的在于提供一种药物组合物；第三目的在于提供该药物组合物的制备方法，具体方案如下：本专利技术涉及的低浓度尼古丁在制备诱导硫氧还蛋白-1表达的诱导剂的应用。进一步地，尼古丁浓度小于100nM。本专利技术涉及的一种药物组合物，包括浓度小于100nM的尼古丁和药物上可接受的辅料，其中，辅料的质量百分比低于0.1%。进一步地，所述辅料包括常规的填充剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、吸收促进剂、填充剂、表面活性剂或稳定剂。进一步地，还包括香味剂、色素和甜味剂。进一步地，所述药物组合物为胶囊、丸剂、粉剂、片剂、粒剂、口服液或注射液。本专利技术涉及的一种药物组合物的制备方法，其特征在于：按下列进行：（1）、储存液的制备以乙醇为辅料，将0.8-1.2nM的尼古丁溶于8-12微升乙醇中，然后加入平衡盐缓冲液，制备成100mM的储存液；（2）、药物组合物的制备取3-5微升的储存液在细胞培养条件下溶于3-5毫升生理细胞培养液，即得到药物组合物。进一步地，所述生理细胞培养液为RPMI1640+10%马血清和5%牛血清。进一步地，磷酸盐缓冲液按如下制备：将NaCl8.0g，KH2PO40.2g，Na2HPO42.9g和KCl0.2g在室温下溶于纯水1000mL，调pH至7.4。与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：专利技术人首次发现尼古丁作为诱导硫氧还蛋白-1表达的诱导剂的应用，进一步扩宽了尼古丁的应用范围，克服技术偏见。本专利技术的药物组合物可有效诱导硫氧还蛋白-1表达，疗效显著、安全性高，通过细胞毒性实验，添加该药物组合物与没有该药物组合物对比未见细胞数减少，对于临床上预防或治疗老年性痴呆、抑郁症等疾病有重要意义。附图说明图1为尼古丁诱导PC12细胞内硫氧还蛋白-1表达。具体实施方式下面描述本专利技术的具体实施方式，所用方法如无特别说明均为常规方法。实施例11尼古丁诱导硫氧还蛋白-1表达1、实验材料和药品PC12细胞购买于中科院昆明动物所。药品：尼古丁（分子量162.23）；尼古丁液体（Sigma，N3876，美国）。2、细胞实验（1）PC12细胞培养：在培养液中含10%马血清，5%胎牛血清和双抗（青霉素20U和链霉素20mg）的RPMI1640完全培养基4ml，反复吹打细胞，使细胞均匀悬浮后移至培养皿；轻微摇匀，使细胞均匀分布于培养皿后，置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。（2）加入低浓度尼古丁：使用100nM的尼古丁（吸烟者的浓度62～308nM范围内）刺激PC12细胞，24h后提取细胞蛋白，蛋白定量后，经蛋白免疫印迹法（WesternBlot）检测硫氧还蛋白-1表达，结果如图1所示。实验结果均为三次以上重复得出（P<0.05）。由图1可以看出，经100nM的尼古丁刺激后PC12细胞硫氧还蛋白-1表达显著增加,低浓度尼古丁可显著性诱导硫氧还蛋白-1表达。2诱导剂的制备本实施例中，药物组合物具体为诱导剂，包括摩尔质量为100nM的尼古丁和1nM的乙醇。该诱导剂的制备方法如下：（1）、储存液的制备以乙醇为辅料，将1nM的尼古丁溶于10微升乙醇中，然后加入平衡盐缓冲液，制备成100mM的储存液；磷酸盐缓冲液按如下制备：将NaCl8.0g，KH2PO40.2g，Na2HPO42.9g和KCl0.2g在室温下溶于纯水1000mL，调pH至7.4；（2）、诱导剂的制备取4微升的储存液在细胞培养条件下溶于4毫升生理细胞培养液，生理细胞培养液为RPMI1640+10%马血清和5%牛血清，即得到诱导剂。通过常规的细胞毒性实验，添加该诱导剂与没有该诱导剂对比未见细胞数减少，且细胞活性实验大于100%。实施例2本实施例的诱导剂的制备方法如下：（1）、储存液的制备以乙醇为辅料，将0.8nM的尼古丁溶于8微升乙醇中，然后加入平衡盐缓冲液，制备成100mM的储存液；（2）、诱导剂的制备取3微升的储存液在细胞培养条件下溶于3毫升生理细胞培养液，生理细胞培养液为RPMI1640+10%马血清和5%牛血清，即得到诱导剂。其余与实施例1相同。实施例3本实施例的诱导剂的制备方法如下：（1）、储存液的制备以乙醇为辅料，将1.2nM的尼古丁溶于12微升乙醇中，然后加入平衡盐缓冲液，制备成100mM的储存液；（2）、诱导剂的制备取5微升的储存液在细胞培养条件下溶于5毫升生理细胞培养液，生理细胞培养液为RPMI1640+10%马血清和5%牛血清，即得到诱导剂。其余与实施例1相同。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
低浓度尼古丁在制备诱导硫氧还蛋白‑1表达的诱导剂的应用。

【技术特征摘要】
1.低浓度尼古丁在制备诱导硫氧还蛋白-1表达的诱导剂的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：尼古丁浓度小于100nM。3.一种药物组合物，其特征在于：包括浓度小于100nM的尼古丁和药物上可接受的辅料，其中，辅料的质量百分比低于0.1%。4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于：所述辅料包括常规的填充剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、吸收促进剂、填充剂、表面活性剂或稳定剂。5.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于：还包括香味剂、色素和甜味剂。6.根据权利要求3-5之一所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物为胶囊、丸剂、粉剂、片剂、粒剂、口服液或注射液。7.一种药...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱洲海，夭建华，陆舍铭，白洁，蔡燕雪，张娴文，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南,53