一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法技术

本发明专利技术提供了一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法，属于蛋白多肽制备技术领域，制备方法包括：预处理、冻融、酶解、分解、干燥，所述的预处理步骤为：取再生蚕丝40~60份洗净，采用剪碎机剪碎，后按照质量比为1:3~6加入浓度为1.3~4mol/L的Na2CO3溶液，混匀，静置，得预处理液。该方法操作简单，效率高，原料利用率高，制备成本低，制备过程中酶结构稳定、酶解效果好，所制备的蛋白多肽活性高，应用致敏率低。

A method for the preparation of regenerated silk protein polypeptide

The invention provides a preparation method of regenerated silk protein polypeptide, which belongs to the technical field of protein polypeptide preparation, and the preparation method includes: pretreatment, freezing thawing, enzymolysis, decomposition and drying. The pretreatment steps are: to remove the regenerated silk 40~60 parts, and to scissors with a shearer, and then add the concentration of 1 to the mass ratio of 1:3~6. The Na2CO3 solution of.3~4mol/L is mixed and placed, and the pretreatment solution is obtained. The method has the advantages of simple operation, high efficiency, high utilization rate of raw materials, low preparation cost, stable enzyme structure, good enzymatic hydrolysis, high activity of protein polypeptide and low application rate.

【技术实现步骤摘要】
一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法
本专利技术属于蛋白多肽制备
，具体涉及一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法。
技术介绍
蚕丝是熟蚕结茧时所分泌丝液凝固而成的连续长纤维，也称天然丝，是一种天然纤维。人类利用最早的动物纤维之一。在蚕丝纤维的制造过程中产生一些废料，如真丝废丝、汰头、茧衣、绢纺下脚料等，这些材料由于强力较低，无法用于织作蚕丝广泛应用于纤维制造业，因而被丢弃，造成了浪费。为了合理利用这些废蚕丝，研究人员对再生蚕丝蛋白的结构和性能进行了测试分析。结果发现，再生蚕丝蛋白，强度较天然蚕丝小，吸湿能力和抗紫外线性能高于天然蚕丝。从再生蚕丝中提取的蛋白多肽在化妆品等行业中的应用越来越多，市场需求量在逐步扩大，如何实现简便快速的提取一直是再生蚕丝提取蛋白多肽发展过程中的重要环节。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法，该方法操作简单，效率高，原料利用率高，制备成本低，制备过程中酶结构稳定、酶解效果好，所制备的蛋白多肽活性高，应用致敏率低。本专利技术为解决上述技术问题所采取的方案为：一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法，制备方法包括：预处理、冻融、酶解、分解、干燥，所述的预处理步骤为：取再生蚕丝40~60份洗净，采用剪碎机剪碎，后按照质量比为1:3~6加入浓度为1.3~4mol/L的Na2CO3溶液，混匀，静置，得预处理液。本制备方法操作简单，还原度高，原料利用率高，制备成本低，制备所得的蛋白多肽具有优异的保湿、防晒功能，且致敏率低，可用范围广。作为优选，冻融操作为：取预处理液，在-73℃~-55℃中冷冻45~60min，置于3~5℃下解冻，反复冻融至少一次，后采用匀浆器匀浆处理4~10min，得匀浆液。反复冻融可加速再生蚕丝的细胞破裂，提升后续对再生蚕丝内容物的提取，降低后续操作的条件控制。作为优选，酶解操作为：取匀浆液，加入2000~3000U/g胃蛋白酶水解15~23min，后加入胃蛋白酶重量0.5~2.5‰的乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯，继续反应10~16min，酶解过程中以双频率复合超声与微波辐射交替间隔辅助酶解，酶解完成后沸水浴灭活10~15min，静置取上清液，得酶解液。酶解操作中条件控制适宜，酶解效果好，其中的乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯中的（R）-乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯和（S）-乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯的重量比为1:0.5，加入的乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯在较强酸性环境下可发生二聚合、三聚合反应，聚合产物和与胃蛋白酶产生亲电作用，防止微波辐射过程影响胃蛋白酶的空间结构，稳定胃蛋白酶的结构性质，防止其活性降低，提升酶解效率和酶解效果。作为优选，双频率复合超声与微波辐射交替间隔辅助酶解的操作为：开启双频率超声波40~45秒，关闭超声波，开启微波辐射3~8秒，关闭微波辐射；开启双频率超声波33~42秒，关闭超声波，开启微波辐射7~13秒，关闭微波辐射，循环操作。以双频率超声与微波辐射交错间隔辅助酶解，不仅可以为酶解体系提供能量，维持酶解所需温度，而且双频率超声与微波辐射的交替间隔辅助还可以大大提高酶解效率，降低酶解时间，同时保证了酶解的彻底性与准确性，节约制备成本。作为优选，双频率复合超声与微波辐射交替间隔辅助酶解的操作条件为：双频率复合超声的频率和密度分别为：25~30kHz、0.25~0.33W/cm2和55~80kHz、0.55~0.72W/cm2，微波辐射的功率为110~140W。双频率复合超声波的双空化效应可以产生叠加作用与协同作用，所产生的空化效应较之单频甚至双频交替要强的多，其所产生的空化崩溃次数也较多，更加高效的打散团聚的蛋白质分子与酶分子，使酶与底物的接触几率与接触面积大大增大，从而提高酶解效率；微波频率的共振使蛋白质大分子能像偶极子分子一样在微波的作用下产生振荡，这种振荡使蛋白质分子在微波触发下产生相干、有序的振动，从而加快蛋白的酶解。作为优选，分解操作为：取酶解液，调节溶液pH为7.1~7.6，采用固定化酶技术，分解得到分子量为2000~3500Da，得蛋白多肽。作为优选，干燥操作为：取分解所得的蛋白多肽，在进风温度为95~115℃、出风温度为60~75℃下进行喷雾干燥，得再生蚕丝蛋白多肽。喷雾干燥对蛋白多肽活性影响小，干燥速度快。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为:1）本制备方法操作简单，还原度高，原料利用率高，制备成本低，制备所得的蛋白多肽具有优异的保湿、防晒功能，且致敏率低，可用范围广；2）以双频率超声与微波辐射交错间隔辅助酶解，不仅可以为酶解体系提供能量，维持酶解所需温度，而且双频率超声与微波辐射的交替间隔辅助还可以大大提高酶解效率，降低酶解时间，同时保证了酶解的彻底性与准确性；3）加入的乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯在较强酸性环境下可发生二聚合、三聚合反应，聚合产物和与胃蛋白酶产生亲电作用，防止微波辐射过程影响胃蛋白酶的空间结构，稳定胃蛋白酶的结构性质，防止其活性降低，提升酶解效率和酶解效果。具体实施方式以下结合实施例作进一步详细描述：实施例1：一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法，制备方法包括：1）预处理：取再生蚕丝60份洗净，采用剪碎机剪碎，后按照质量比为1:6加入浓度为4mol/L的Na2CO3溶液，混匀，静置，得预处理液。本制备方法操作简单，还原度高，原料利用率高，制备成本低，制备所得的蛋白多肽具有优异的保湿、防晒功能，且致敏率低，可用范围广；2）冻融：取预处理液，在73℃中冷冻60min，置于5℃下解冻，反复冻融至少一次，后采用匀浆器匀浆处理10min，得匀浆液。反复冻融可加速再生蚕丝的细胞破裂，提升后续对再生蚕丝内容物的提取，降低后续操作的条件控制；3）酶解：取匀浆液，加入3000U/g胃蛋白酶水解23min，后加入胃蛋白酶重量2.5‰的乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯，继续反应16min，酶解过程中以双频率复合超声与微波辐射交替间隔辅助酶解，酶解完成后沸水浴灭活15min，静置取上清液，得酶解液。酶解操作中条件控制适宜，酶解效果好，其中的乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯中的（R）-乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯和（S）-乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯的重量比为1:0.5，加入的乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯在较强酸性环境下可发生二聚合、三聚合反应，聚合产物和与胃蛋白酶产生亲电作用，防止微波辐射过程影响胃蛋白酶的空间结构，稳定胃蛋白酶的结构性质，防止其活性降低，提升酶解效率和酶解效果；双频率复合超声与微波辐射交替间隔辅助酶解的操作为：开启双频率超声波45秒，关闭超声波，开启微波辐射8秒，关闭微波辐射；开启双频率超声波42秒，关闭超声波，开启微波辐射13秒，关闭微波辐射，循环操作。以双频率超声与微波辐射交错间隔辅助酶解，不仅可以为酶解体系提供能量，维持酶解所需温度，而且双频率超声与微波辐射的交替间隔辅助还可以大大提高酶解效率，降低酶解时间，同时保证了酶解的彻底性与准确性，节约制备成本；双频率复合超声与微波辐射交替间隔辅助酶解的操作条件为：双频率复合超声的频率和密度分别为：30kHz、0.33W/cm2和80kHz、0.72W/cm2，微波辐射的功率为140W。双频本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括：预处理、冻融、酶解、分解、干燥，所述的预处理步骤为：取再生蚕丝40~60份洗净，采用剪碎机剪碎，后按照质量比为1:3~6加入浓度为1.3~4mol/L的Na2CO3溶液，混匀，静置，得预处理液。

【技术特征摘要】
1.一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括：预处理、冻融、酶解、分解、干燥，所述的预处理步骤为：取再生蚕丝40~60份洗净，采用剪碎机剪碎，后按照质量比为1:3~6加入浓度为1.3~4mol/L的Na2CO3溶液，混匀，静置，得预处理液。2.根据权利要求1所述的一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法，其特征在于：所述的冻融操作为：取预处理液，在-73℃~-55℃中冷冻45~60min，置于3~5℃下解冻，反复冻融至少一次，后采用匀浆器匀浆处理4~10min，得匀浆液。3.根据权利要求1所述的一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法，其特征在于：所述的酶解操作为：取匀浆液，加入2000~3000U/g胃蛋白酶水解15~23min，后加入胃蛋白酶重量0.5~2.5‰的乙酸2-羟基-1,2,2-三苯基乙酯，继续反应10~16min，酶解过程中以双频率复合超声与微波辐射交替间隔辅助酶解，酶解完成后沸水浴灭活10~15min，静置取上清液，得酶解液。4.根据权利要求3所述的一种再生蚕丝蛋白多肽制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢雨欣，
申请(专利权)人：浦江县美泽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33