一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法及其雄蜂蛹小分子抗氧化肽的应用技术

本发明专利技术提供了一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法，属于功能性食品技术领域，将雄蜂蛹粉与水混合、匀浆，调节匀浆液的pH值后，与复合酶混合后酶解，复合酶包括内切蛋白酶和外切蛋白酶；将酶解液离心分离、过滤，得到滤液，将滤液进行第一步超滤分离肽段；再进行第二步超滤脱盐；经减压浓缩后冷冻干燥，得到雄蜂蛹小分子抗氧化肽。采用本发明专利技术的方法能够减少酶解液中苦味肽的形成，并且能够增加酶解液中的小分子肽的含量，得到的雄蜂蛹小分子抗氧化肽的分子量小于1ku，并且具有高活性的抗氧化性能。

Preparation method of a small molecule antioxidant peptide from male bee pupa and application of its small molecule antioxidant peptide

The invention provides a preparation method of a small molecule antioxidant peptide of the male bee pupae, which belongs to the functional food technology field. After mixing and homogenizing the pupae powder with water and adjusting the pH value of the homogenate, the enzyme is hydrolyzable after mixing with the compound enzyme. The compound enzyme includes the internal cutting protease and the exonuclease protease, and the enzyme hydrolysate is centrifuged and filtered. The filtrate is filtrate, and the first step is ultrafiltration to separate the peptide segment, and then second steps of ultrafiltration and desalting are carried out, and the small molecule antioxidant peptide of the pupae of the drone is obtained by vacuum condensation and freeze drying. The method can reduce the formation of bitter peptide in the hydrolysate and increase the content of small molecular peptide in the hydrolysate. The molecular weight of the small molecule antioxidant peptide of the pupae of the male bee is less than 1KU, and it has high active antioxidant activity.

【技术实现步骤摘要】
一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法及其雄蜂蛹小分子抗氧化肽的应用
本专利技术涉及功能性食品
，尤其涉及一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法及其雄蜂蛹小分子抗氧化肽的应用。
技术介绍
雄蜂蛹是指蜂王在雄蜂房产的未受精卵，经工蜂孵化、发育、羽化的蛹体，其一般是指雄性蜜蜂发育到22～23日龄时的个体，此时的蛹已成熟，但尚未羽化，含有极其丰富的营养物质，是蜂王浆生产过程中的废弃物。我国蜂群每年可产生4000t以上的干雄蜂蛹。但长期以来，国内生产的蜂蛹制品主要为蜂蛹蛋白粉，只进行简单的加工，或将直接作为原料出口，产品的技术含量和附加值低，绝大多数蜂蛹的资源仍未得到有效的开发利用。相关研究表明，蛋白质在人体消化系统中蛋白酶作用下的水解终产物大多为2～4个氨基酸残基组成的小肽，分子量为1ku以下。因小肽结构简单，分子量小，不饱和，所以能够通过细胞膜的渗透以原形直接进入细胞内，而不需要再次消化，也不需要耗费能量。因此小分子肽的吸收、转化和利用，都是高效、完全、彻底的。中国专利技术专利CN104886335A公开了一种复合酶解雄蜂蛹的方案，该专利技术采用超临界技术将雄蜂蛹中脂肪脱除，再利用复合酶(中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、几丁质酶、酪蛋白酶抑制剂)酶解，酶解后用活性炭粗滤，再用0.2～0.8μm膜精滤，根据小分子肽水溶与否进行分离，得到两类不同的小分子肽。但是该方法制备到的肽仍为分子量很大的肽(分子量为几万甚至几十万)，并不是小分子肽。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法，采用本专利技术的方法能够得到分子量小于1ku的小分子肽。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：1)将雄蜂蛹粉与水混合、匀浆，调节匀浆液的pH值为6～7后，与复合酶混合，在50～60℃下酶解1～3h，得到酶解液，所述复合酶包括内切蛋白酶和外切蛋白酶；2)将所述步骤1)得到的酶解液进行离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm，所述过滤使用滤布进行，所述滤布的孔径为1～5μm；3)将所述步骤2)得到的滤液进行第一步超滤分离肽段，得到肽段分子量＜1ku的超滤液，所述第一步超滤依次使用的超滤膜的截留分子量为10ku、5ku、3ku和1ku；4)将所述步骤3)得到的肽段分子量＜1ku的超滤液进行第二步超滤脱盐，得到截留液，所述第二步超滤使用的超滤膜的截留分子量为0.15～0.3ku；5)将所述步骤4)得到的截留液减压浓缩后冷冻干燥，得到雄蜂蛹小分子抗氧化肽。优选的，所述步骤1)复合酶的总酶活与雄蜂蛹粉的质量比为(1000～2000)U:1g，所述内切蛋白酶和外切蛋白酶的酶活比为(1～3):(1～3)。优选的，所述步骤1)内切蛋白酶包括碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶中的一种或几种。优选的，所述外切蛋白酶包括风味蛋白酶、羧肽酶和氨肽酶中的一种或几种。优选的，所述步骤1)雄蜂蛹粉的粒度为10～100μm。优选的，所述步骤1)雄蜂蛹粉的质量与水的体积比为1g:(10～15)mL。优选的，所述步骤2)离心分离的时间为10～15min。优选的，所述步骤3)第一步超滤的条件包括：所述第一步超滤过程中滤液流速为0.5～10L/H，所述第一步超滤的膜元件压力为0～0.8MPa，在第一步超滤结束前加入纯水进行洗涤，直至流出的透过液为无色；所述第二步超滤的条件包括：所述第二步超滤的流速为0.5～10L/H，第二步超滤的膜元件压力为0～1.2MPa，在第二步超滤结束前加入纯水进行洗涤，直至流出的透过液为无色。本专利技术还提供了上述制备方法制备得到的雄蜂蛹小分子抗氧化肽，所述雄蜂蛹小分子抗氧化肽的分子量为0.15～1ku。本专利技术还提供了上述方案所述的制备方法制备得到的雄蜂蛹小分子抗氧化肽或上述方案所述的雄蜂蛹小分子抗氧化肽在制备抗氧化药物和/或食品中的应用。本专利技术提供了一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：1)将雄蜂蛹粉与水混合、匀浆，调节匀浆液的pH值后，与复合酶混合，在50～60℃下酶解1～3h，得到酶解液，所述复合酶包括内切蛋白酶和外切蛋白酶；2)将所述步骤1)得到的酶解液进行离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm，所述过滤使用滤布进行，所述滤布的孔径为1～5μm；3)将所述步骤2)得到的滤液进行第一步超滤分离肽段，得到肽段分子量＜1ku的超滤液，所述第一步超滤依次使用的超滤膜的截留分子量为10ku、5ku、3ku和1ku；4)将所述步骤3)得到的肽段分子量＜1ku的超滤液进行第二步超滤脱盐，得到截留液，所述第二步超滤使用的超滤膜的截留分子量为0.15～0.3ku；5)将所述步骤4)得到的截留液减压浓缩、冷冻干燥后，得到雄蜂蛹小分子抗氧化肽。本专利技术将雄蜂蛹粉经复合酶解后得到酶解液，酶解液包含各分子量肽、脂肪、盐类、残渣等；将得到的酶解液经过第一步超滤后，得到的超滤液中的肽段分子量＜1ku，而且还含有盐；超滤液经过第二步超滤后除去盐，经减压浓缩和冷冻干燥后，得到分子量为0.15～1ku的肽。本专利技术实施例的结果显示：采用本专利技术制备雄蜂蛹小分子抗氧化肽的方法能够减少酶解液中苦味肽的形成，并且能够增加酶解液中的小分子肽的含量，得到的雄蜂蛹小分子抗氧化肽的分子量小于1ku，并且具有高活性的抗氧化性能。附图说明图1为酶解液中不同分子量肽的含量；图2为不同分子量肽氧自由基吸收能力(ORAC)；图3为不同分子量肽DPPH的清除能力。具体实施方式本专利技术提供了一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：1)将雄蜂蛹粉与水混合、匀浆，调节匀浆液的pH值为6～7后，与复合酶混合，在50～60℃下酶解1～3h，得到酶解液，所述复合酶包括内切蛋白酶和外切蛋白酶；2)将所述步骤1)得到的酶解液进行离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm，所述过滤使用的滤布的孔径为1～5μm；3)将所述步骤2)得到的滤液进行第一步超滤分离肽段，得到肽段分子量＜1ku的超滤液，所述第一步超滤依次使用的超滤膜的截留分子量为10ku、5ku、3ku和1ku；4)将所述步骤3)得到的肽段分子量＜1ku的超滤液进行第二步超滤脱盐，得到截留液，所述第二步超滤使用的超滤膜的截留分子量为0.15～0.3ku；5)将所述步骤4)得到的截留液减压浓缩后冷冻干燥，得到雄蜂蛹小分子抗氧化肽。本专利技术提供的雄蜂蛹小分子抗氧化肽的分子量为0.15～1ku。本专利技术将雄蜂蛹粉与水混合、匀浆，调节匀浆液的pH值后，与复合酶混合，在50～60℃下酶解1～3h，得到酶解液，所述复合酶包括内切蛋白酶和外切蛋白酶。本专利技术优选将雄蜂蛹冻干，冻干后进行磨粉，得到雄蜂蛹粉。在本专利技术中，所述雄蜂蛹优选为蜂王在雄蜂房产的未受精卵，经工蜂孵化、发育、羽化的蛹体，雄性蜜蜂发育到22～23日龄时的个体，此时的蛹已成熟，但尚未羽化。在本专利技术中，所述雄蜂蛹粉的粒度优选为10～100μm目，更优选为15～25μm，最优选为20μm。本专利技术对所述雄蜂蛹的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规选用的市售雄蜂蛹即可。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：1)将雄蜂蛹粉与水混合、匀浆，调节匀浆液的pH值为6～7后，与复合酶混合，在50～60℃下酶解1～3h，得到酶解液，所述复合酶包括内切蛋白酶和外切蛋白酶；2)将所述步骤1)得到的酶解液进行离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm，所述过滤使用滤布进行，所述滤布的孔径为1～5μm；3)将所述步骤2)得到的滤液进行第一步超滤分离肽段，得到肽段分子量＜1ku的超滤液，所述第一步超滤依次使用的超滤膜的截留分子量为10ku、5ku、3ku和1ku；4)将所述步骤3)得到的肽段分子量＜1ku的超滤液进行第二步超滤脱盐，得到截留液，所述第二步超滤使用的超滤膜的截留分子量为0.15～0.3ku；5)将所述步骤4)得到的截留液减压浓缩后冷冻干燥，得到雄蜂蛹小分子抗氧化肽。

【技术特征摘要】
1.一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：1)将雄蜂蛹粉与水混合、匀浆，调节匀浆液的pH值为6～7后，与复合酶混合，在50～60℃下酶解1～3h，得到酶解液，所述复合酶包括内切蛋白酶和外切蛋白酶；2)将所述步骤1)得到的酶解液进行离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm，所述过滤使用滤布进行，所述滤布的孔径为1～5μm；3)将所述步骤2)得到的滤液进行第一步超滤分离肽段，得到肽段分子量＜1ku的超滤液，所述第一步超滤依次使用的超滤膜的截留分子量为10ku、5ku、3ku和1ku；4)将所述步骤3)得到的肽段分子量＜1ku的超滤液进行第二步超滤脱盐，得到截留液，所述第二步超滤使用的超滤膜的截留分子量为0.15～0.3ku；5)将所述步骤4)得到的截留液减压浓缩后冷冻干燥，得到雄蜂蛹小分子抗氧化肽。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)复合酶的总酶活与雄蜂蛹粉的质量比为(1000～2000)U:1g，所述内切蛋白酶和外切蛋白酶的酶活比为(1～3):(1～3)。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)内切蛋白酶包括碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶中的一种或几种。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘睿，盛金旺，鲁群，张久亮，蔡昭龙，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42