一种毛叶香茶菜的指纹图谱及其建立方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种毛叶香茶菜的指纹图谱及其建立方法和应用，该方法包括供试品的制备和高效液相色谱检测条件，其中高效液相色谱检测条件：色谱柱为Kromasil 100‑5C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇‑0.1％冰醋酸水溶液；采用梯度洗脱方式：0min→10min→26min→60min，甲醇20％→35％→37％→70％；进样量为3～10μL；检测波长为239nm，流速为1mL/min，柱温为20℃～35℃。本发明专利技术建立的毛叶香茶菜药材指纹图谱，确定了12个共有峰，通过其丰富的色谱峰信息以及共有峰相似度的评价，有利于对该药材质量的整体评价以及确保其内在质量的均一和稳定。可有效的监控毛叶香茶菜药材的质量及鉴别其真伪。

【技术实现步骤摘要】
一种毛叶香茶菜的指纹图谱及其建立方法和应用
本专利技术涉及中药材的指纹图谱
，尤其涉及一种毛叶香茶菜的指纹图谱及其建立方法和应用。
技术介绍
毛叶香茶菜[Rabdosiajaponica(Burm.f.)Hara]为唇形科(Latiabae)香茶菜属植物，主要产地为江苏、河南、山西南部、陕西南部、甘肃南部及四川北部等地区，民间称四稜杆、山苏子、猛一撒(河南)。研究表明，毛叶香茶菜中主要含有二萜类、酚酸类以及黄酮类成分，主要有抗肿瘤、抑菌消炎、保肝利胆、抗氧化、抗黑色素、免疫调节、保护心血管等药理作用。目前国内外关于毛叶香茶菜质量控制方面的研究报道较少，鉴于毛叶香茶菜药效广泛且成分复杂，单指标或多指标的检测不能体现其整体质量。中药指纹图谱是近年来迅速发展的一种中药质量控制方法，在中药整体评价方面已得到广泛应用，该技术能够根据多批次样本整体综合信息，建立共有模式，并根据不同算法建立模板，测定相似度，从总体上描述样本特性。相对于用单个或少数成分为指标来控制中药质量的方法，中药指纹图谱通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量的方法，较为全面的反映中药的内在质量，保证中药及其制剂的稳定和可靠。目前，现有技术中还没有报道毛叶香茶菜的指纹图谱及其建立方法，因此，开发出一种能够对毛叶香茶菜质量进行全面评价的指纹图谱具有重要的应用意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的问题是提供一种毛叶香茶菜指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，利用该图谱可监控毛叶香茶菜的质量及鉴别真伪。一种毛叶香茶菜的指纹图谱，包含12个指纹峰，相对保留时间和相对标准偏差如下(参照了32批样品的测定结果，相对保留时间和相对标准偏差以11号峰为参照峰进行计算)：1号峰：(相对保留时间范围：0.122～0.124)，RSD为0.99％；2号峰：(相对保留时间范围：0.292～0.294)，RSD为0.67％；3号峰：(相对保留时间范围：0.301～0.305)，RSD为0.72％；4号峰：(相对保留时间范围：0.362～0.365)，RSD为0.28％；5号峰：(相对保留时间范围：0.450～0.462)，RSD为0.56％；6号峰：(相对保留时间范围：0.546～0.548)，RSD为0.16％；7号峰：(相对保留时间范围：0.624～0.658)，RSD为0.96％；8号峰：(相对保留时间范围：0.673～0.705)，RSD为0.95％；9号峰：(相对保留时间范围：0.828～0.847)，RSD为0.58％；10号峰：(相对保留时间范围：0.906～0.918)，RSD为0.45％；11号峰：相对保留时间范围：1.000；12号峰：(相对保留时间范围：1.201～1.206)，RSD为0.09％。其中，11号峰为参照峰，其他保留时间范围为与11号峰的相对值。作为优选，所述的指纹图谱如图2所示。本专利技术还提供了一种所述的毛叶香茶菜的指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：(1)供试品的制备：取毛叶香茶菜地上部分粉末1g，精密称定，精密加入含0.2％甲酸的70％甲醇水溶液25mL，称定重量，超声处理30min，放冷，称重，以含0.2％甲酸的70％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；(2)高效液相色谱检测：吸取上述步骤(1)所得供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测，得到所述的指纹图谱；其中，色谱检测条件如下：色谱柱为Kromasil100-5C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-0.1％冰醋酸水溶液；采用梯度洗脱方式：0min→10min→26min→60min，甲醇20％→35％→37％→70％；进样量为3～10μL；检测波长为239nm，流速为1.0mL/min，柱温为20℃～35℃。本专利技术还提供了一种所述的指纹图谱在毛叶香茶菜质量控制中的应用，包括如下步骤：(1)待测液的制备：取待评价的毛叶香茶菜地上部分粉末1g，精密称定，精密加入含0.2％甲酸的70％甲醇水溶液25mL，称定重量，超声处理30min，放冷，称重，以含0.2％甲酸的70％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得待测液；(2)高效液相色谱检测：吸取上述步骤(1)所得待测液，注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测，得到待测物的高效液相色谱图；(3)将得到的高效液相色谱图与权利要求1或2所述的指纹图谱进行比较，采用相似度软件进行处理，采用多点校正以及Mark峰匹配法，确定待测样品图谱与所述的指纹图谱的相似度，若相似度在0.8以上，则判定待测样品质量合格。本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：(1)本专利技术确立了毛叶香茶菜菜指纹图谱的建立方法，通过该方法可获得毛叶香茶菜的标准指纹图谱，比较指纹图谱中共有峰的有无，能有效地监控毛叶香茶菜的质量，完善了毛叶香茶菜的质量评价体系，为毛叶香茶菜质量的全面、有效控制提供了理论和实践基础。(2)本专利技术所建立的指纹图谱对毛叶香茶菜的关键组分能够实现较好的分离和标识，避免其他组分的干扰，具有较高的灵敏度。附图说明图1为实施例1得到的20批毛叶香茶菜药材的HPLC图谱；图2为实施例1中得到的毛叶香茶菜药材的对照指纹图谱；图3为实施例5不同溶剂体系得到的HPLC图谱；图4为实施例7不同洗脱程序得到的HPLC图谱；图5为应用例1中不同香菜菜的HPLC图谱比较结果。具体实施方式下面结合附图和具体实施例，对本专利技术做进一步的详述。仪器与试剂1.仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪(DGU-20A5在线脱气机，LC-20AT泵，SIL-20AC自动进样器，SPD-M20A检测器，CTD-20AC柱温箱)、色谱工作站LCSolution；XPE-205电子天平(METTLERTOLEDO)；超声波清洗器USC-802(上海波龙)；MilliQAdvantageA10超纯水仪(Millipore公司)。中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会2012版)。2.试剂：甲醇(MERCK公司，色谱纯)；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。对照品：冬凌草甲素(中国食品药品检定研究院，批号：111721-201403，含量：99.5％)。实施例1指纹图谱的建立：(1)供试品溶液的制备取毛叶香茶菜地上部分粉末1g，精密称定，精密加入含0.2％甲酸的70％甲醇水溶液25mL，称定重量，超声处理30min，放冷，称重，以含0.2％甲酸的70％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。(2)按以下色谱条件，进行进样分析，记录色谱图。色谱条件Kromasil100-5C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；甲醇(A)-0.1％冰醋酸水溶液(B)梯度洗脱，洗脱程序见表1，运行时间60min；体积流量1.0mL/min；检测波长239nm；柱温30℃；进样量5μL。表1流动相梯度洗脱程序(3)按供试品溶液的制备方法分别制备32批次毛叶香茶菜药材的供试品溶液，按以上色谱条件分别进样测定，得到各批样品的指纹图谱，以色谱峰11(冬凌草甲素)为参照，其他11个色谱峰的相对保留时间RSD值在0.07～1.08％，表明12个共有峰具有较好的保留重现性。选取色谱峰信息本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种毛叶香茶菜的指纹图谱，其特征在于，包含12个指纹峰，相对保留时间和相对标准偏差如下：1号峰：(相对保留时间范围：0.122～0.124)，RSD为0.99％；2号峰：(相对保留时间范围：0.292～0.294)，RSD为0.67％；3号峰：(相对保留时间范围：0.301～0.305)，RSD为0.72％；4号峰：(相对保留时间范围：0.362～0.365)，RSD为0.28％；5号峰：(相对保留时间范围：0.450～0.462)，RSD为0.56％；6号峰：(相对保留时间范围：0.546～0.548)，RSD为0.16％；7号峰：(相对保留时间范围：0.624～0.658)，RSD为0.96％；8号峰：(相对保留时间范围：0.673～0.705)，RSD为0.95％；9号峰：(相对保留时间范围：0.828～0.847)，RSD为0.58％；10号峰：(相对保留时间范围：0.906～0.918)，RSD为0.45％；11号峰：相对保留时间1.000；12号峰：(相对保留时间范围：1.201～1.206)，RSD为0.09％。

【技术特征摘要】
1.一种毛叶香茶菜的指纹图谱，其特征在于，包含12个指纹峰，相对保留时间和相对标准偏差如下：1号峰：(相对保留时间范围：0.122～0.124)，RSD为0.99％；2号峰：(相对保留时间范围：0.292～0.294)，RSD为0.67％；3号峰：(相对保留时间范围：0.301～0.305)，RSD为0.72％；4号峰：(相对保留时间范围：0.362～0.365)，RSD为0.28％；5号峰：(相对保留时间范围：0.450～0.462)，RSD为0.56％；6号峰：(相对保留时间范围：0.546～0.548)，RSD为0.16％；7号峰：(相对保留时间范围：0.624～0.658)，RSD为0.96％；8号峰：(相对保留时间范围：0.673～0.705)，RSD为0.95％；9号峰：(相对保留时间范围：0.828～0.847)，RSD为0.58％；10号峰：(相对保留时间范围：0.906～0.918)，RSD为0.45％；11号峰：相对保留时间1.000；12号峰：(相对保留时间范围：1.201～1.206)，RSD为0.09％。2.一种如权利要求1所述的毛叶香茶菜的指纹图谱，其特征在于，所述的指纹图谱如图2所示。3.一种如权利要求1或2所述的毛叶香茶菜的指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品的制备：取毛叶香茶菜地上部分粉末1g，精密称定，精密加入含0.2％甲酸的70％甲醇水溶液25mL，称定重量，超声处...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈炜，陈碧莲，韩俊琦，毛思浩，
申请(专利权)人：杭州胡庆余堂药业有限公司，浙江省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：浙江,33