新型蛋白质及检测方法技术

包含选自SEQ ID No.1或SEQ ID No.5或其片段中的任意一种的氨基酸序列的来自温带臭虫(Cimex lectularius)的分离蛋白质或包含选自SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.6和SEQ ID No.7或其片段中的任意一种或多种的氨基酸序列的来自温带臭虫的分离多肽，用于产生抗体来检测温带臭虫特异性抗原的存在，其中所述抗体能够检测从卵、若虫、蜕皮至成熟的雌性和雄性成虫的温带臭虫发育的所有阶段中的抗原浓度低于2μg/ml的温带臭虫抗原。

New proteins and detection methods

Contains the amino acid sequence of an arbitrary or No.1 ID from SEQ SEQ ID No.5 or its fragments in from cimexlectularius (Cimex lectularius) isolated polypeptides from the separation of proteins or cimexlectularius contain any No.2 ID from SEQ SEQ, ID No.3, SEQ No.6 and ID SEQ ID No.7 or its fragments in one or more of the amino acid sequence, used for the production of antibodies to detect cimexlectularius specific antigen, wherein the antibody antigen concentration detection can develop from egg, nymph, Cimex molt to mature male and female adults of all stages in the below Cimex lectularius 2 g/ml.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型蛋白质及检测方法引言本专利技术涉及新型温带臭虫蛋白质以及在环境中(诸如家庭环境或商业环境)检测臭虫存在的方法。臭虫是红棕色、无翅、专性噬血，需要血餐来羽化。它们在外形上呈扁平、椭圆和细长的，长度近似5-7mm且具有3对足。臭虫是靠人类和其他温血宿主的血液生存的昆虫。臭虫会被热量、有气味的臭虫排泄物和温血哺乳类动物、鸟类以及它们自己排出的二氧化碳所吸引。睡眠区域、床垫、弹簧床垫、床头柜、床头是臭虫隐藏的理想环境。臭虫最可能在白天隐藏在黑暗封闭的位置并且偏爱织物、木头和粗砂质磨砂纸类表面的裂缝和裂隙。它们通常被发现隐藏在床和家具的裂隙和裂缝中。臭虫以血液为食，在夜间活动并叮咬裸露皮肤的任何区域。由于臭虫的叮咬可出现若干不利于健康的影响，包括皮疹、过敏反应和/或精神损害。近些年，在欧洲、澳洲和北美洲的臭虫感染的发病率急剧增加。这部分由于全球旅行和移民的增加。其他解释包括对害虫防治管理的杀虫剂抗性/改变的增加以及二手家具的使用。臭虫虫口的增长带来了臭虫叮咬和相关病症的增加。臭虫的扩散导致感染通过两种传播形式发生：1-主动传播，其需要臭虫通过它们自己的方式(诸如爬行)穿过通风管、墙壁上的洞并且还有管道从房间至房间迁移。主动传播可能由于杀虫剂的散布、两性间的冲突或宿主刺激，以及2-被动传播或人类运输，其中臭虫在衣服上或行李箱和家具中被携带到新地点，鸟类和蝙蝠也适于臭虫的被动传播。臭虫在到达成年前经过5龄期阶段。在此过程期间的每个阶段，需要血餐来引发用于发展到下一个阶段的蜕皮。雌臭虫在其一生中可产200-500个卵。专与人类互动的臭虫有两个主要物种1.温带臭虫(普通臭虫)2.热带臭虫(发现于热带区域)该两个物种温带臭虫和热带臭虫似乎在混合种群中茁壮成长，且在澳大利亚和英国甚至发现热带臭虫的流行的增加，表明虽然各物种仍然具有明确的生态龛，但界限变得模糊不清。现今，在分子水平上关于臭虫信息有限，因为直到最近只进行了转录组学。转录组学是研究在特定时间存在于各种细胞或组织类型的转录RNA。这些表达的RNA然后被制成用于分子分析的cDNA文库。这些研究导致了来自三种不同臭虫品系(里士满-杀虫剂抗性、哈伦-杀虫剂敏感以及来自俄亥俄公寓的暴露于杀虫剂的品系的大量完整的和部分完整的mRNA序列读取(reads)。实际需要提供快速且容易检测臭虫存在的方式。
技术实现思路
根据本专利技术，提供了包含选自SEQIDNo.1或SEQIDNo.5或其片段中的任意一种的氨基酸序列的来自温带臭虫(Cimexlectularius)的分离蛋白质或包含选自SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.6和SEQIDNo.7或其片段中的任意一种或多种的氨基酸序列的来自温带臭虫的分离多肽，所述分离蛋白质和所述分离多肽用于产生抗体来检测温带臭虫特异性抗原的存在，其中所述抗体能够检测从卵、若虫、蜕皮至成熟的雌性和雄性成虫的温带臭虫发育的所有阶段中的抗原浓度低于20μg/ml的温带臭虫抗原。本专利技术的一种实施方式提供了，该重组截短多肽包含选自SEQIDNo.4或SEQIDNo.8或其片段中的任意一种的氨基酸序列的来自温带臭虫蛋白质的重组截短多肽，所述重组截短多肽用于产生抗体来检测温带臭虫特异性抗原的存在，其中抗体对从卵到成熟成虫的温带臭虫发育的所有阶段中的且在抗原浓度低于20μg/ml的温带臭虫抗原是特异性的。在本专利技术的一种实施方式中，所产生的抗体是单克隆抗体。在本专利技术的一种实施方式中，抗体能够检测浓度低于10μg/ml温带臭虫抗原。在本专利技术的另一种实施方式中，所产生的抗体能够检测温带臭虫和热带臭虫(Cimexhemipterus)二者特异性的抗原。在本专利技术的一种实施方式中，来自温带臭虫的分离蛋白质是不溶性蛋白质。在本专利技术的一种实施方式中，来自温带臭虫的分离蛋白质或分离多肽用于过敏原检测。根据本专利技术，提供了用于检测样品中温带臭虫或热带臭虫的方法，包括以下步骤；将样品与单克隆抗体接触来形成单克隆抗体-多肽复合物；以及将所述单克隆抗体-多肽复合物与另一种与复合物结合的被报告试剂标记的单克隆抗体接触，从而检测样品中温带臭虫或热带臭虫的存在。优选地样品包括在从卵、若虫、蜕皮或成虫的雌臭虫或雄臭虫发育的任何阶段的温带臭虫或热带臭虫。最优选地单克隆抗体对于从卵、若虫、蜕皮至成熟雌性和雄性成虫的温带臭虫发育的所有阶段中的温带臭虫抗原是特异性的。根据本专利技术，还提供了用于检测样品中温带臭虫或热带臭虫的方法，包括；侧流膜；用于接收测试样品的位于侧流膜第一下部末端的第一区域，其中第一区域包含对于温带臭虫或热带臭虫特异性的单克隆抗体，该抗体被报告试剂标记；包含固定化对照多肽的位于侧流膜第二上部末端的第二区域；以及位于第一区域和第二区域之间的第三区域，其中第三区域包含对于温带臭虫或热带臭虫特异性的固定化单克隆抗体。优选的单克隆抗体以低于10mg/ml的浓度存在。更优选地单克隆抗体以低于5mg/ml的浓度存在。在本专利技术的一种实施方式中，可检测的标记试剂选自胶乳抗体偶联物或金抗体偶联物中的任意一种或多种。在本专利技术的另一种实施方式中，单克隆抗体被HRP或生物素中的任意一种或多种标记。根据本专利技术，提供了用于检测样品中温带臭虫或热带臭虫的存在的诊断试剂盒，包括：至少一个固体表面，其上固定着对于选自SEQIDNo.1、2、3、4、5、6、7或8或其片段中的任意一种或多种的氨基酸序列特异性的单克隆抗体；将样品与单克隆抗体在允许所述抗体与样品中的温带臭虫或热带臭虫抗原结合的条件下接触；以及将与样品结合的抗体的量与对照值比较，并由此确定样品中温带臭虫或热带臭虫的存在或不存在。根据本专利技术提供了包括本专利技术的诊断试剂盒的用于确定温带臭虫或热带臭虫的存在或不存在的快速检测方法。本专利技术的一种实施方式提供了包含选自SEQIDNo.1或SEQIDNo.5或其片段中的任意一种的氨基酸序列的来自温带臭虫的分离蛋白质，或包含选自SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.6和SEQIDNo.7或其片段中的任意一种或多种的氨基酸序列的来自温带臭虫的分离多肽。本专利技术的一种实施方式提供了包含选自SEQIDNo.4或SEQIDNo.8或其片段中的任意一种的氨基酸序列的来自温带臭虫蛋白质的重组截短多肽。附图说明参考附图，从本专利技术的以下的描述中将会更清晰的理解本专利技术，其中：图1是示出了从小鼠杂交瘤细胞系(由GenScriptUSAInc生成)产生的针对臭虫卵壳蛋白表位1(ESP)(SEQIDNo.2)和表位3(SEQIDNo.3)的六种小鼠IgG单克隆抗体的表；图2是示出了从小鼠杂交瘤细胞系(由GenScriptUSAInc生成)产生的针对臭虫蛋白1表位1(BBP1)(SEQIDNo.6)和表位2(SEQIDNo.7)的四种小鼠IgG单克隆抗体的表；图3是通过Hi-TrapG蛋白柱(GHHealthcare)纯化的ESP的单克隆抗体的亲和纯化曲线，(a)示出了单克隆抗体mAbESP-1[4B9E7]并且(b)示出了mAbESP-3[4D1B8和10B9F9]。用pH6.5的0.1M甘氨酸以1ml/分钟的流速洗脱该单克隆抗体。箭头指示洗脱的起点。峰值部分使用centricon装置合并和浓缩；图4是通过Hi-Tr本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含选自SEQ ID No.1或SEQ ID No.5或其片段中的任意一种的氨基酸序列的来自温带臭虫(Cimex lectularius)的分离蛋白质或包含选自SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.6和SEQ ID No.7或其片段中的任意一种或多种的氨基酸序列的来自温带臭虫的分离多肽，用于产生抗体来检测温带臭虫特异性抗原的存在，其中，所述抗体能够检测从卵、若虫、蜕皮至成熟的雌性和雄性成虫的温带臭虫发育的所有阶段中的抗原浓度低于20μg/ml的温带臭虫抗原。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.31 EP 15183177.31.包含选自SEQIDNo.1或SEQIDNo.5或其片段中的任意一种的氨基酸序列的来自温带臭虫(Cimexlectularius)的分离蛋白质或包含选自SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.6和SEQIDNo.7或其片段中的任意一种或多种的氨基酸序列的来自温带臭虫的分离多肽，用于产生抗体来检测温带臭虫特异性抗原的存在，其中，所述抗体能够检测从卵、若虫、蜕皮至成熟的雌性和雄性成虫的温带臭虫发育的所有阶段中的抗原浓度低于20μg/ml的温带臭虫抗原。2.包含选自SEQIDNo.4或SEQIDNo.8或其片段中的任意一种的氨基酸序列的来自如权利要求1所述的温带臭虫蛋白质的重组截短多肽，用于产生抗体来检测温带臭虫特异性抗原的存在，其中，所述抗体对于从卵、若虫、蜕皮至成熟的雌性和雄性成虫的温带臭虫发育的所有阶段中的且抗原浓度低于20μg/ml的温带臭虫抗原是特异性的。3.如权利要求1或2所述的来自温带臭虫的分离蛋白质或分离多肽，其中，所产生的抗体是单克隆抗体。4.如权利要求1至3中任一项所述的分离蛋白质或分离多肽，其中，所述抗体能够检测浓度低于10μg/ml的温带臭虫抗原。5.如任一前述权利要求中所述的来自温带臭虫的分离蛋白质或分离多肽，其中，所产生的抗体能够检测温带臭虫和热带臭虫(Cimexhemipterus)二者特异性的抗原。6.如任一前述权利要求中所述的来自温带臭虫的分离蛋白质，其中，所述蛋白质是不溶性蛋白质。7.如任一前述权利要求中所述的来自温带臭虫的分离蛋白质和分离多肽，用于过敏原检测。8.用于检测样品中温带臭虫或热带臭虫的方法，包括以下步骤；将所述样品与如权利要求3中所述的特异性的单克隆抗体接触来形成单克隆抗体-多肽复合物；以及将所述单克隆抗体-多肽复合物与另一种与所述复合物结合的被报告试剂标记的单克隆抗体接触，从而检测所述样品中温带臭虫或热带臭虫的存在。9.如权利要求8中所述的方法，其中，所述样品包括在从卵、若虫、蜕皮或成虫的雄臭虫或雌臭虫发育的任一阶段的温带臭虫或热带臭虫...

【专利技术属性】
技术研发人员：娜塔莎·戈登，卢克·奥肖内西，布鲁斯·米切尔，
申请(专利权)人：爱尔梅德健康集团有限公司，
类型：发明
国别省市：爱尔兰,IE