包含克雷伯氏菌属蛋白的蛋白质和免疫组合物以及使用方法技术

本文提供可从克雷伯氏菌属分离的分离蛋白。还提供包括所述蛋白质中的一种或多种的组合物以及用于制备所述蛋白质的方法和用于使用所述蛋白质的方法。

Proteins and immune compositions containing Klebsiella protein and methods of use

This paper provides a separation protein that can be isolated from Klebsiella. A composition including one or more of the proteins as well as a method for preparing the protein and a method for using the protein are also provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含克雷伯氏菌属蛋白的蛋白质和免疫组合物以及使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2015年7月10日提交的美国临时申请序列号62/190,947的权益，所述申请以引用的方式并入本文。背景在美国细菌感染现在每年导致大约170万例医源性感染(每100例入院中有4.5例)，其中总体死亡率在20％至60％范围内或99,000例死亡与医源性感染直接相关联。估计在美国由此类感染造成的经济影响每年花费50亿至100亿美元之间。革兰氏阴性细菌感染和其后遗症通常是致命的。估计单独在美国每年超过700,000名患者变得易受细菌感染。在这些患者中，160,000名患者实际上发展败血病，导致每年50,000例死亡。这些中大多数为由革兰氏阴性杆菌诸如大肠杆菌(从具有革兰氏阴性脓毒症的患者中分离出的最常见致病菌)，在频率上接着是肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)和铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)造成的医源性感染。由革兰氏阴性细菌(包括肠杆菌科(Enterobacteriaceae))造成的感染在人医疗保健和畜牧业环境中均一直为显著问题。肠杆菌科中的细菌为天然生境为人和动物肠道的大型异质组。所述科包括许多属并且被细分成八个族，包括：埃希氏菌族(Escherichieae)、爱德华氏菌族(Edwardsielleae)、沙门氏菌族(Salmonelleae)、柠檬酸杆菌族(Citrobactereae)、克雷伯氏菌族(Klebsielleae)、变形菌族(Proteeae)、耶尔森氏菌族(Yersineae)和欧文氏菌族(Erwineae)。肠杆菌科的许多种常常为具有临床相关意义的机会致病菌，包括埃希氏菌属(Escherichiaspp.)、克雷伯氏菌属(Klebsiellaspp.)、肠杆菌属(Enterobacterspp.)、变形杆菌属(Proteusspp.)、普罗威登斯菌属(Providenciaspp.)、沙雷氏菌属(Serratiaspp.)、柠檬酸杆菌属(Citrobacterspp.)、摩根氏菌属(Morganellaspp.)、志贺氏菌属(Shigellaspp.)和沙门氏菌属(Salmonellaspp.)，处于造成感染的前二十种生物体之中。当发生临床上重要的疾病时，这些疾病常常由大肠杆菌引起，但其他细菌也可以感染并且造成使人衰弱的疾病。在大多数情况下，当细菌在正常宿主防御不足时到达它们正常肠环境之外的组织时，这些细菌变成具有致病性。这在现今在年轻人或老年人中尤其明显；常常在由免疫学功能不全或免疫抑制造成的首发感染的终末阶段中；使生物体到达血流造成脓毒症从而导致死亡或继发性后遗症。克雷伯氏菌属种为属于肠杆菌科的棒状革兰氏阴性兼性厌氧细菌。现今，已知7个种被证明在DNA同源性方面具有类似性：肺炎克雷伯氏菌、臭鼻克雷伯氏菌(Klebsiellaozaenae)、鼻硬结克雷伯氏菌(Klebsiellarhinoscleromatis)、产酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)、植生克雷伯氏菌(Klebsiellaplanticola)、土生克雷伯氏菌(Klebsiellaterrigena)和解鸟氨酸克雷伯氏菌(Klebsiellaomithinolytica)。克雷伯氏菌属在自然界中无所不在。它们常见于多种环境中，诸如土壤、植被、水以及人和动物肠道。在人和动物中，克雷伯氏菌属可以定殖于皮肤或兽皮、咽部或胃肠道，并且常常被认为是结肠和肠道的许多部分中的正常菌群。肺炎克雷伯氏菌和产酸克雷伯氏菌是动物和人群体中最为临床相关性的两个种。克雷伯氏菌属的致病性可归因于多种毒力因子包括产生热稳定肠毒素、荚膜多糖(CPS)、脂多糖、粘附素(1型和3型性毛、KPF-28菌毛、CF29K和聚集性粘附素)和铁获取系统(Podschun等，Clin.Microbiol.Rev.11(4)：589-603.1998；Yu等，Emerg.Inf.Dis.13：986-993，2007)。动物中的克雷伯氏菌属是以下的重要原因：马的子宫炎和不孕症、牛物种的乳腺炎、黄牛的起源于肺部病变的血原性骨髓炎、马的脓胸的脓液积累、猫和狗的支气管肺炎以及在由药物疗法、营养不良、应激、内分泌病和其他感染包括犬细小病毒和猫免疫缺陷病毒感染引起的免疫抑制之后常出现的继发性感染的后遗症。现今，农业对于人福利而言是关键的，因为其产生食物，这是全球生存的一种主要必需品。许多因素对动物群体的稳定性和健康造成不利影响，到目前为止，最重要的因素之一为可能造成成年动物和/或年幼动物的广泛死亡的感染性疾病。生产动物的细菌感染可能严重影响动物健康的所有方面，导致所有行业的巨大的经济损失。现今，动物传染性和新发感染性疾病对人健康造成威胁。所有人致病菌中有至少百分之六十一可在动物与人之间传播。动物传染病占新发感染性疾病的百分之七十五。生产动物的感染性疾病和动物传染性疾病的增加主要是由于农业集约化，尤其是在黄牛(牛肉和乳品)、猪和家禽行业中。在人类中，克雷伯氏菌属的相互作用的范围从机会致病菌(主要在住院患者和社区获得性感染中)到频繁在肠道发生和较不频繁在鼻咽发生的无症状携带。作为医院感染，克雷伯氏菌属主要与尿道和呼吸道感染以及可能引起致命性败血病的伤口和软组织感染相关联。临床综合征的范围包括菌血症、肺炎、尿道感染(UTI)、血栓性静脉炎、上呼吸道感染、胆囊炎、伤口感染、骨髓炎、内源性眼内炎、眼内炎、心内膜炎和脑膜炎。据估计，克雷伯氏菌属占地方性医院感染的8％并且占流行病爆发的3-7％(Stamm等，Comparisonofendemicandepidemicnosocomialinfections，第9-13页.R.E.Dixon(编)，Nosocomialinfections.YorkeMedicalBooks，Atlanta，GA.1981)。克雷伯氏菌属造成多达14％的原发性菌血症病例，仅次于造成革兰氏阴性脓毒症的大肠杆菌。已从具有囊性纤维化的21％的患者的支气管肺泡灌洗样本中分离出克雷伯氏菌属(Lyczak等Clinicalmicrobiologyreviews15.2(2002)：194-222)。鼻硬结克雷伯氏菌和臭鼻克雷伯氏菌为较不常见的并且很少诱导临床感染。鼻硬结克雷伯氏菌可诱导涉及鼻咽的慢性炎性过程，而臭鼻克雷伯氏菌诱导特征在于鼻粘膜坏死和粘液脓性鼻涕的慢性萎缩性鼻咽。产酸克雷伯氏菌牵涉到早产儿的新生儿菌血症和新生儿重症监护病房。产生碳青霉烯酶的肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)的出现成为全球性健康问题，在动物和人健康行业中有重要的临床意义。已显示肺炎克雷伯氏菌碳青霉烯酶(KPC)赋予对多种抗微生物剂的耐药性，包括几乎所有β-内酰胺、氟喹诺酮和氨基糖苷。碳青霉烯类为具有广谱抗菌活性的一类β-内酰胺抗生素，用于治疗由产生超广谱β-内酰胺酶的革兰氏阴性细菌诸如大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌引起的感染。碳青霉烯酶为肺炎克雷伯氏菌产生的酶，其能够使碳青霉烯类并且有时使其他类的β-内酰胺灭活。碳青霉烯酶存在于属于肠杆菌科、假单胞菌属和不动杆菌属中。此类耐药性机制限制了可用于治疗肺炎克雷伯氏菌的药剂数。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其包含：分子量为82kDa、78kDa、72kDa或68kDa的至少两种分离蛋白，其中分子量通过在十二烷基硫酸钠‑聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳来确定，其中所述蛋白质当在包含铁螯合剂的培养基中孵育时可从肺炎克雷伯氏菌分离并且当在不具有铁螯合剂的培养基中生长时不可分离，且其中所述组合物保护动物不受肺炎克雷伯氏菌感染；以及药学上可接受的载剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.10 US 62/190,9471.一种组合物，其包含：分子量为82kDa、78kDa、72kDa或68kDa的至少两种分离蛋白，其中分子量通过在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳来确定，其中所述蛋白质当在包含铁螯合剂的培养基中孵育时可从肺炎克雷伯氏菌分离并且当在不具有铁螯合剂的培养基中生长时不可分离，且其中所述组合物保护动物不受肺炎克雷伯氏菌感染；以及药学上可接受的载剂。2.如权利要求1所述的组合物，其还包含分子量为35kDa和33kDa的一种或两种蛋白质，其中分子量通过在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳来确定。3.如权利要求1所述的组合物，其中所述动物选自小鼠、牛诸如奶牛、和人。4.如权利要求1所述的组合物，其中所述蛋白质中的至少一种包含结构上类似于SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43或SEQIDNO:44或与其具有100％同一性的氨基酸序列。5.如权利要求1所述的组合物，其还包含有包含结构上类似于SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:49、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO:53、SEQIDNO:58、SEQIDNO:61或SEQIDNO:64或与其具有100％同一性的氨基酸序列的蛋白质。6.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包含87kDa蛋白质，所述蛋白质当在包含铁螯合剂的培养基中孵育时可从肺炎克雷伯氏菌分离。7.一种组合物，其包含：至少两种分离蛋白，所述蛋白质结构上类似于选自SEQIDNO:41、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43和SEQIDNO:44的蛋白质或与其具有100％同一性；以及药学上可接受的载剂。8.如权利要求7所述的组合物，其还包含有包含结构上类似于SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:49、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO:53、SEQIDNO:58、SEQIDNO:61或SEQIDNO:64或与其具有100％同一性的氨基酸序列的蛋白质。9.一种组合物，其包含：至少两种蛋白质，所述蛋白质结构上类似于选自SEQIDNO:41、SEQIDNO:58、SEQIDNO:61和SEQIDNO:64的蛋白质或与其具有100％同一性；以及药学上可接受的载剂。10.如权利要求9所述的组合物，其还包含有包含结构上类似于SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:49、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO:53、SEQIDNO:58、SEQIDNO:61或SEQIDNO:64或与其具有100％同一性的氨基酸序列的蛋白质。11.如权利要求1至10中任一项所述的组合物，其还包含佐剂。12.一种方法，其包括：向受试者施用一定量如权利要求1至11中任一项所述的组合物，所述量足以诱导所述受试者产生特异性地结合所述组合物的至少一种蛋白质的抗体。13.一种用于治疗受试者的感染的方法，所述方法包括：向患有由革兰氏阴性微生物引起的感染或处于患有所述感染的风险的受试者施用有效量如权利要求1至11中任一项所述的组合物。14.一种用于治疗受试者的症状的方法，所述方法包括：向患有由革兰氏阴性微生物引起的感染或处于患有所述感染的风险的受试者施用有效量如权利要求1至11中任一项所述的组合物。15.一种用于减少受试者中的定殖的方法，所述方法包括：向由革兰氏阴性微生物定殖的受试者施用有效量如权利要求1至11中任一项所述的组合物。16.如权利要求12至15中任一项所述的方法，其中所述革兰氏阴性微生物选自克雷伯氏菌属、大肠杆菌、肠杆菌属、沙雷氏菌属、变形杆菌属、柠檬酸杆菌属或其组合。17.一种用于治疗受试者的病状的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用有效量如权利要求1至11中任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·T·布克哈特，D·艾默里，D·斯特劳布，
申请(专利权)人：埃皮托皮克斯有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US