免疫活性组合物制造技术

本发明专利技术提供了一种微粒载体系统，该系统包括一种或多种蛋白质、肽、核酸、碳水化合物、脂或其它生物活性物质，其上附着或者未附着导向分子。此外，本发明专利技术也提供了免疫调节组合物，和在非感染和感染宿主中引发保护性免疫应答的方法，以及免疫耐受性的诱导。

【技术实现步骤摘要】
免疫活性组合物本申请为分案申请，原申请的申请日为2006年1月30日，申请号为200680010442.8(PCT/US2006/003349)，专利技术名称为“免疫活性组合物”。专利技术背景本专利技术提供了免疫活性组合物，其能诱导保护性免疫或者耐受性。在非感染或感染宿主中诱导保护性免疫的该组合物包括抗原表位，但排除了或者消除了参与免疫“逃逸”或诱导耐受性的表位。保护性免疫也可以通过包括病原体相关分子模式(一种或者多种病原体相关分子模式)的组合物，和/或有或者没有抗原表位的载体来诱导。诱导耐受性的另一种免疫活性组合物包括逃逸表位(一种或者多种)，或对病原体逃逸很重要的分子模式(一种或者多种)，有或者没有载体。此外，本专利技术提供了鉴别这样的免疫活性分子的方法。免疫生物学的进展已经鉴定了免疫调节剂开发的主要免疫学因素，包括对诱导控制病原体的先天性免疫应答和获得性免疫应答的需求。随着普遍的抗生素抗性的出现，免疫调节剂成为用于产生针对微生物——包括细胞内病原体的长效保护的最有效方法。免疫调节剂的当前问题焦点在于要求开发新颖的载体(vectors)、有效的运载体(carriers)和佐剂系统。由于病原体也能诱导Th2应答和耐受性，这一认识可用于，自身免疫性疾病、移植和其它医学应用的免疫调节剂的开发。许多病原体通过皮肤和粘膜进入身体。因此这些施用途径特别适合于，针对通过皮肤、呼吸道、胃肠道或性器官进入而感染的免疫调制。传统的疫苗通过肠胃外施用，这远离感染的实际部位，并且它们的粘膜反应是不太明显的。显然，现在除了Toll样受体(Toll-likereceptors(TLRs))，还有在先天性免疫应答中起着重要作用的其它受体和途径。识别细胞内微生物的微生物基序的核苷酸-寡聚化结构域(nucleotide-oligomerizationdomain(NOD))蛋白质就是这样的一个实例。Mindin，一种胞外基质蛋白质，也是针对几种细菌表面成分的炎症反应的介质。这些研究和其它研究表明，先天性免疫涉及独立于TLR信号传导的其它因素，并且表明NFKB或IL-1的产生不足以控制感染。在控制感染中涉及的先天性免疫的典型元素是：(1)促炎应答：NFKB介导的，活化许多发炎因子，过度刺激可以导致休克；(2)阳离子宿主防御肽：由细菌病原体相关分子模式(bacterialpathogenassociatedmolecularpatterns(PAMPs))所刺激的肽和信号分子的增量产生；(3)吞噬细胞激活：嗜中性粒细胞和巨噬细胞的细胞内杀死效应增加(氧化机制和非氧化机制均增强，细胞因子产生增加)；(4)趋化性：吞噬细胞的内皮粘附增加，细胞迁移至感染位点，血细胞渗出；(5)细胞外杀伤机制：补体活化，增加的铁离子螯合，抗微生物肽的分泌，降解性酶的产生；(6)感染封闭：通过纤维蛋白原活化的凝块形成；(7)创伤修复：成纤维细胞生长和粘附，血管生成；和(8)获得性免疫应答：B-细胞和T-细胞活化，通常通过树突状细胞进行。对先天性免疫的刺激可以通过使用干扰素，单磷酰基-磷脂A，咪喹莫特(imiquimod)，CpG核苷酸或者阳离子肽实现。然而，先天性免疫具有抵挡感染的有限能力，在此种情况下，获得性免疫应答将获得控制权。近来，已经认识到：树突状细胞对于连接先天性免疫和获得性免疫是必要的，并且，这一知识使得：免疫学家可以针对差的免疫原性抗原设计免疫调节策略。树突状细胞(Dendriticcells(DC))起源于骨髓谱系和淋巴谱系的前体细胞，但是，是主要的抗原呈递细胞(antigen-presentingcells(APC))。树突状细胞(DCs)存在于每一种组织中，并且在感染期间，是与入侵病原体接触的关键免疫细胞。它们是先天性免疫应答和获得性免疫应答的桥梁。内皮细胞和上皮细胞、单核细胞、巨噬细胞和其它细胞，包括未成熟的树突状细胞(DCs)，表达病原体模式识别受体(TLR受体，凝集素结构域受体和其它受体)，这些受体结合保守的病原体相关分子结构(pathogenassociatedmolecularstructures)(缩写为PAMPs)，所述结构是由病原体，如来自革兰氏阴性细菌的脂多糖，来自革兰氏阳性细菌的脂磷壁酸(lipoteichoicacid)，肽葡聚糖，肽葡聚糖相关脂蛋白，细菌DNA，和来自革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌的鞭毛蛋白，以及病毒RNA共享的结构。不同细胞表达允许对病原体产生定制(tailored)反应的不同受体。未成熟的抗原捕获DC，一旦活化，就会分化为成熟的抗原呈递DC，该抗原呈递DC能在MHCII类和I类中背景中呈递抗原，以及上调表面共刺激分子如CD80和CD86的表达。成熟和活化DC迁移到次级淋巴器官(淋巴结、脾和丕氏斑(Peyer氏斑，Peyer’spatches)中，在这里它们转移到T细胞区域。DC与T细胞的相互作用以及T细胞的刺激依赖于细胞因子、趋化因子和粘附分子，如细胞间细胞粘附分子(intercellularcelladhesionmolecules(I-CAMs))，白细胞功能相关分子(leukocytefunctionassociatedmolecule1(LFA-1))和树突状细胞特异性ICAM结合非整合素因子(dendriticcellspecificICAMgrabbingnonintegrin(DC-SIGN))。依赖于局部细胞因子环境和抗原，在不同程度上触发了辅助性T细胞(Th1)和体液抗体介导的Th2或Treg定向的免疫应答。抗原的剂量已经表明指导Th1/Th2分化，高剂量优先刺激Th-1反应，低剂量刺激Th-2反应。已经表明：展示抗原蛋白和DNA疫苗的运载体专利技术物由不成熟的树突状细胞吸收，并且导致免疫应答。因此，DC代表为免疫系统的调制而开发的一个主要的、但不是唯一的靶标。粘膜DCs，通过胞饮作用和受体介导的胞吞作用，摄取外源入侵者，特别地提供了一个重要的一线防卫。DC在粘膜免疫中起着重要的作用，因为身体粘膜就像身体内外之间的屏障一样发挥作用。可以在呼吸道和内脏的内层发现DC。朗格汉斯细胞(Langerhans细胞)是在皮肤和粘膜中发现的一个DC群。DCs和M细胞将抗原转运到下面的淋巴滤泡，这是内脏的免疫诱导位点。类似的鼻和支气管相关淋巴组织已经在呼吸道中描述。该系统在胃肠道中很重要，但在呼吸道中，下面的DC网络可能是更重要的。在口服施用的情况下，免疫调节剂必须未降解地通过胃和上部肠道(theupperintestines)。通过鼻、眼睛或者生殖器途径施用，这样的降解不可能发生。随后，免疫调节剂必须通过肠道上皮而被摄取，因此可以被吸收，随后通过抗原呈递细胞呈递到免疫感受态细胞。免疫感受态细胞位于上皮中、固有层中或者基底膜之下。因此，免疫调节剂成分必须配制有运载体，通过该运载体接受这些免疫调节剂成分。当结合到微粒运载体上时，通常可以接受的是，分子可以通过Peyer氏斑中的M-细胞转运通过屏障层。生物活性分子的成熟前分解或者释放，已经妨碍了颗粒基疫苗和药物给药技术的发展。这就是，为什么在公开文献中，仍然要求高剂量的抗原/药物，以便获得与注射对等物可相当的反应的最有可能的解释。除了抗原和药物的利用不足而外本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫活性组合物，所述组合物用于诱导保护性免疫，所述组合物包括：(a)至少一种病原体相关分子模式；(b)至少一种免疫活性抗原或抗原表位；和(c)至少一种对将组合物投递到生物有效的载体，从而诱导保护性免疫，其中所述载体是不带电琼脂糖微粒并且其中所述至少一种病原体相关分子模式和所述至少一种免疫活性抗原或抗原表位共价连接到相同的微粒上。

【技术特征摘要】
2005.01.28 US 60/648,1651.一种免疫活性组合物，所述组合物用于诱导保护性免疫，所述组合物包括：(a)至少一种病原体相关分子模式；(b)至少一种免疫活性抗原或抗原表位；和(c)至少一种对将组合物投递到生物有效的载体，从而诱导保护性免疫，其中所述载体是不带电琼脂糖微粒并且其中所述至少一种病原体相关分子模式和所述至少一种免疫活性抗原或抗原表位共价连接到相同的微粒上。2.如权利要求1所述的组合物，其中至少一种免疫活性抗原表位缺乏逃逸表位。3.如权利要求1所述的组合物，其中免疫活性抗原表位是肽、蛋白质、重组肽或者多肽、重组蛋白质、脂、碳水化合物或其它生物活性分子，或它们中任意的组合。4.如权利要求1所述的组合物，其中免疫活性抗原表位是肽或蛋白质，并且其中所述肽或者蛋白质具有免疫调节的转录后修饰。5.如权利要求4所述的组合物，其中所述免疫调节的转录后修饰涉及碳水化合物和/或脂部分。6.如权利要求5所述的组合物，其中所述免疫调节的转录后修饰含有末端甘露糖化。7.如权利要求6所述的组合物，其中所述免疫调节性末端甘露糖化物质，是通过选自氧化步骤、酶处理和糖特异性亲和结合的方法从所述组合物被贫化。8.如权利要求4所述的组合物，其中所述转录后修饰涉及脂部分，其中所述脂部分通过去脂作用被去除。9.如权利要求1所述的组合物，其中免疫活性抗原表位是肽或蛋白质，其中免疫活性肽或者蛋白质没有免疫调节的转录后修饰。10.如权利要求9所述的组合物，其中免疫活性抗原表位是肽或蛋白质，其中免疫活性肽或者蛋白质不具有能N-糖基化和/或硫辛酰基化的氨基酸序列。11.如权利要求1所述的组合物，其中免疫活性抗原表位是肽或蛋白质，其中免疫活性蛋白质或肽具有能结合细胞表面糖胺聚糖(GAGs)的氨基酸序列。12.如权利要求11所述的组合物，其中氨基酸序列本质上是多碱价的。13.如权利要求12所述的组合物，其中氨基酸序列的通式是XBBXBX、XBBBXXBX、BBXXBBBXXBB、BBBXXB、BXBXB、BBB、BXBXXXBXB或BXBXXXXXBXB，其中B是碱性氨基酸，X是任何其它氨基酸。14.如权利要求11所述的组合物，其中GAG结合氨基酸序列被用于产生针对所述肽或蛋白质的抗体，这些抗体能干预病原体结合到细胞表面。15.如权利要求11所述的组合物，其中所述GAG选自肝素及它的类似物。16.如权利要求1所述的组合物，其中免疫活性抗原表位是肽或蛋白质，所述肽或蛋白质单独地或者与抗体一起，具有补体激活活性。17.如权利要求1所述的组合物，其中免疫活性抗原表位是众多的肽，它们能结合成为单一多肽。18.如权利要求1所述的组合物，其中病原体相关分子模式选自：(a)TLR1受体激动剂；(b)TLR2受体激动剂；(c)TLR3受体激动剂；(d)TLR4受体激动剂；(e)TLR5受体激动剂；(f)TLR6受体激动剂；(g)TLR7受体激动剂；(h)TLR8受体激动剂；(i)TLR9受体激动剂；(j)NOD-1激动剂；(k)NOD-2激动剂；(l)DC-SIGN激动剂；(m)L-SIGN激动剂；(n)甘露糖受体激动剂。19.如权利要求18所述的组合物，其中病原体相关分子模式是NOD-1受体激动剂或者NOD-2受体激动剂，并且所述NOD-1受体激动剂或者NOD-2受体激动剂选自细菌肽葡聚糖及细菌肽葡聚糖的衍生物。20.如权利要求1所述的组合物，其中所述不带电琼脂糖微粒有窄的大小分布范围。21.如权利要求1所述的组合物，其中所述不带电琼脂糖微粒是多孔的。22.如权利要求1所述的组合物，其中所述不带电琼脂糖微粒的直...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·绍特马里，L·斯蒂普科维茨，P·格兰迪克斯，
申请(专利权)人：盖伦生物公司，
类型：发明
国别省市：美国,US