检测人线粒体基因差异性表达的基因芯片制造技术

本发明专利技术公开了一种检测人线粒体基因差异性表达的基因芯片，在氨基硅烷修饰的玻璃基片上点制有检测包括人线粒体基因编码的１３种ｍＲＮＡ，２种ｒＲＮＡ和９种ｔＲＮＡ基因及核ＤＮＡ（ｎＤＮＡ）编码的５种凋亡相关基因转录丰度的探针，本发明专利技术基因芯片可以同时检测整个人体线粒体ｍｔＤＮＡ和ｎＤＮＡ在两种不同状态下的差异表达情况，并分析其内在联系；将基因芯片技术小型化、专业化，高效、便捷的完成对人体线粒体ｍｔＤＮＡ和ｎＤＮＡ表达的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于检测人线粒体基因表达的实验工具，具体的说，涉及一种检测两种状态下人线粒体基因(mtDNA)和(nDNA)差异表达的实验工具。
技术介绍
目前，表达谱芯片是目前应用最广泛的基因芯片，是将少则几十个、多则 成千上万个特异的探针固定于一块载体上，可用以检测整个基因组范围内的众 多基因转录丰度的差异。表达谱芯片可以分析2组或2组以上不同来源的mRNA 转录丰度的差异，通过计算信号的比值和统计分析来获取差异表达基因的信息。 但目前人们着重发展基因芯片的高通量，其昂贵的实验费用使人们在科学研究 中对其望而却步。同时人们对线粒体基因表达的研究仅局限于个别基因，缺乏 对mtDNA在不同状态下差异表达的整体认识和对其进行内在联系的分析。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种检测人体线粒体基因差异性的整体表达情况，及 分析多个基因表达之间的内部联系的基因芯片。一种检测人线粒体基因差异性表达的基因芯片，在氨基硅烷修饰的玻璃基 片上点制有检测包括人线粒体基因编码的13种mRNA， 2种rRNA和9种tRNA基 因及核DNA(nDNA)编码的5种凋亡相关基因转录丰度的探针，其关键在于所述的13种mRNA是，氧化呼吸链酶复合体I的NADH-CoQ还原酶亚单位1 (ND1) 、 NADH-CoQ还原酶亚单位2 (ND2) 、 NADH-CoQ还原酶亚单位3 (ND3)、 NADH-CoQ还原酶亚单位4(ND4)、 NADH-CoQ还原酶亚单位4L (ND4L) 、 NADH-CoQ 还原酶亚单位5(ND5)、 NADH-CoQ还原酶亚单位6(ND6)，复合体III的细胞色素 b(Cytb)，复合物IV的细胞色素氧化酶亚单位I (Cox I )、细胞色素氧化酶亚单 位II(CoxII)、细胞色素氧化酶亚单位ni(CoxIII)，以及复合物V的ATP酶亚单 位6 (ATPase6)和ATP酶亚单位8 (ATPase8或ND6L);所述2种rRNA是，12S核糖体RNA (12SrRNA) 、 16S核糖体RNA (16SrRNA);所述9种tRNA是，mtDNA轻链编码的丙氨酸转运RNA(tRNA-Ala)、天氡酰 胺转运RNA(tRNA-Asn)、半胱氨酸转运RNA(tRNA-Cys)、谷氨酸转运 RNA(tRNA-Glu)、丝氨酸转运RNA(tRNA-Ser),重链编码的精氨酸转运 RNA(tRNA-Arg)、天冬氨酸转运RNA (tRNA-Asp)、甘氨酸转运RNA(tRNA-'Gly)、 组氨酸转运RNA(tRNA-His);所述核DNA(nDNA)编码的5种凋亡相关基因是，Bad、 Bax、 Bel-2、 Bcl2-Ll、P53。上述氨基硅垸修饰的玻璃基片上还点制有看家基因ActingP、 GAPDH作为 阳性内参照，人为书写长度为69mer寡核苷酸序列的探针为阴性内参照，并选 择Hex(hexa-chloro- 6- carboxy fluorescein)为检测样点固定的阳性对照。分别检测所述人线粒体基因编码的13种mRNA转录丰度的寡核苷酸探针的 序列为ACATCACCG;<formula>formula see original document page 9</formula>ND6L :TACCACCTAC;分别检测所述2种rRNA转录丰度的的寡核苷酸探针的序列为:12Sr腿:ACTACGAGCCACA;16Sr跳AAAGTCCTACGTG;分别检测所述9种tRNA转录丰度的的寡核苷酸探针的序列为tRNA-Al: MAGGGCTTAGCTTAATTAMGTGCTGATTTGCGTTCAGTTGATGCAGAGTGGGGTTTTGCAGTCCTTA;tRNA-Asm TAGATTGA'AGCCAGTTGATTAGGGTGCTTAGCTGTTAACTAAGTGTTTGTGGGTT TMGTCCCATTGGT;tRNA-Cys: AGCTCCGAGGTGATTTTCATATTGAATTGCAAATTCGAAGAAGCAGCTTCAMCC TGCCGGGGCTT;tRNA-Glu: GTTCTTGTAGTTGAMTACAACGATGGTTTTTCATATCATTGGTCGTGGTTGTAG TCCGTGCGAGAATA;tRNA-Ser: TTGAAAAAGTCATGGAGGCCATGGGGTTGGCTTGAAACCAGCTTTGGGGGGTTCG ATTCCTTCCTTTTTTGT;.t薩-Ar g: TGGTATATAGTTTAAACAAAACGAATGATTTCGACTCATTAAATTATGATAATCA TATTTACCAA;.tRNA-Asp: AAGGTATTAGAAAAACCATTTCATAACTTTGTCAAAGTTAAATTATAGGCTAMTCCTATATATCTTA;tRNA-Gly: ACTCTTTTAGTATAAATAGTACCGTTAACTTCCAATTMCTAGTTTTGACAACAT TCMMAAGAGTA;價A-His: GTMATATAGTTTAACCAAAACATCAGATTGTGAATCTGACAACAGAGGCTTACG ACCCCTTCTTTACC;分别检测所述核DNA(nDNA)编码的5种凋亡相关基因Bad、 Bax、 Bcl-2、 Bcl2-Ll、 P53转录丰度的的寡核苷酸探针的序列为CTTACCGAG;CCCTTTTCT;GGATGCAAAGA;Bcl2-Ll: GTGAGCAGGTGTTTTGGACAATGGACTGGTTGAGCCCATCCCTATTATAAAAATGT CTCAGAGCMCCG;CTTCCCCTCC;上述每种基因探针均在氨基硅烷修饰的玻片上重复点制三次。 有益效果本专利技术基因芯片可以同时检测整个人体线粒体mtDNA和nDNA在 两种不同状态下的差异表达情况，并分析其内在联系；将基因芯片技术小型化、 专业化，高效、便捷的完成对人体线粒体mtDNA和nDNA表达的检测。附图说明图l是芯片点样后扫描图； 图2是芯片杂交后扫描图。具体实施例方式实施例1首先选择mtDNA编码的13种mRNA， 2种rRNA， 9种tRNA及核基因(nDNA) 编码的5种凋亡相关基因。具体包括，NADH-CoQ还原酶亚单位1 (ND1) 、 NADH-CoQ 还原酶亚单位2(ND2) 、 NADH-CoQ还原酶亚单位3(ND3) 、 NADH-CoQ还原酶亚单 位4 (ND4) 、 NADH-CoQ还原酶亚单位4L (ND4L) 、 NADH-CoQ还原酶亚单位5 (ND5)、 NADH-CoQ还原酶亚单位6 (ND6)，复合体III的细胞色素b (Cytb)，复合物IV的细 胞色素氧化酶亚单位I (CoxI)、细胞色素氧化酶亚单位II (CoxII)、细胞色素 氧化酶亚单位III (Coxin)，以及复合物V的ATP酶亚单位6 (ATPase6)和ATP酶亚 单位8(ATPase8或ND6L)，丙氨酸转运RNA(tRNA-Ala)、天氡酰胺转运 RNA(tRNA-Asn)、半胱氨酸转运RNA(tRNA-Cys)、谷氨酸转运RN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测人线粒体基因差异性表达的基因芯片，在氨基硅烷修饰的玻璃基片上点制有检测包括人线粒体基因编码的１３种ｍＲＮＡ，２种ｒＲＮＡ和９种ｔＲＮＡ基因及核ＤＮＡ（ｎＤＮＡ）编码的５种凋亡相关基因转录丰度的探针，其特征在于：　所述的１３种ｍ ＲＮＡ是，氧化呼吸链酶复合体Ⅰ的ＮＡＤＨ－ＣｏＱ还原酶亚单位１（ＮＤ１）、ＮＡＤＨ－ＣｏＱ还原酶亚单位２（ＮＤ２）、ＮＡＤＨ－ＣｏＱ还原酶亚单位３（ＮＤ３）、ＮＡＤＨ－ＣｏＱ还原酶亚单位４（ＮＤ４）、ＮＡＤＨ－ＣｏＱ还原酶亚单位４Ｌ（ＮＤ４Ｌ）、ＮＡＤＨ－ＣｏＱ还原酶亚单位５（ＮＤ５）、ＮＡＤＨ－ＣｏＱ还原酶亚单位６（ＮＤ６），复合体Ⅲ的细胞色素ｂ（Ｃｙｔｂ），复合物Ⅳ的细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ（Ｃｏｘ　Ⅰ）、细胞色素氧化酶亚单位Ⅱ（Ｃｏｘ　Ⅱ）、细胞色素氧化酶亚单位Ⅲ（Ｃ ｏｘ　Ⅲ），以及复合物Ⅴ的ＡＴＰ酶亚单位６（ＡＴＰａｓｅ６）和ＡＴＰ酶亚单位８（ＡＴＰａｓｅ８或ＮＤ６Ｌ）；　所述２种ｒＲＮＡ是，１２Ｓ核糖体ＲＮＡ（１２ＳｒＲＮＡ）、１６Ｓ核糖体ＲＮＡ（１６ＳｒＲＮＡ）；　所述９种ｔＲＮＡ是 ，ｍｔＤＮＡ轻链编码的丙氨酸转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ａｌａ）、天氡酰胺转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ａｓｎ）、半胱氨酸转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ｃｙｓ）、谷氨酸转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ｇｌｕ）、丝氨酸转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ｓｅｒ），重链编码的精氨酸转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ａｒｇ）、天冬氨酸转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ａｓｐ）、甘氨酸转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ｇｌｙ）、组氨酸转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ｈｉｓ）；　所述核ＤＮＡ（ｎＤＮＡ）编码的５种凋亡相关基因包括Ｂａｄ、Ｂａｘ、Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ２－Ｌ１ 、Ｐ５３。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡义德，孙恒文，孙玉兰，钱海洪，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]