一种耐热腈水合酶、工程菌及其在催化腈化合物水合反应生成酰胺中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种耐热腈水合酶、工程菌及其在催化腈化合物水合反应生成酰胺中的应用，该耐热腈水合酶包括：碱基序列如SEQ ID NO.4所示的编码α亚基的基因、碱基序列如SEQ ID NO.5所示的编码β亚基的基因以及碱基序列如SEQ ID NO.6所示的编码活性元件的基因。本发明专利技术从锰氧化橙单胞菌SI859A(Aurantimonas manganoxydans)SI859A克隆得到腈水合酶基因，该基因在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中成功进行了异源表达，获得具有高表达量和高活性的腈水合酶，比活达到了404.5U/mg蛋白，该腈水合酶对芳香族腈化合物和脂肪族腈化合物均有较高的催化活力，是一种底物谱广、热稳定性高、极具工业应用潜力的腈水合酶。

Application of a heat-resistant nitrile hydratase, engineering bacteria and the formation of amide in the hydration reaction of catalytic nitrile compounds

The invention discloses a heat resistant nitrile hydratase, engineering bacteria and catalytic hydration reaction of amide nitrile compounds in the application of the heat resistant nitrile hydratase activity includes: encoding elements encoding beta subunit gene, the nucleotide sequence encoding the alpha subunit of the nucleotide sequence is shown as SEQ ID NO.4 as shown in SEQ ID NO.5 gene and the nucleotide sequence is shown as SEQ ID NO.6 gene. The present invention from manganese oxide orange Aeromonas SI859A (Aurantimonas manganoxydans) SI859A cloned nitrile hydratase gene, this gene in Escherichia coli E.coli BL21 (DE3) in the success of the heterologous expression, with a high expression level and high activity of nitrile hydratase, 404.5U/mg protein than live, the catalytic activity of nitrile hydratase of aromatic nitrile compounds and aliphatic nitrile compounds were high, is a nitrile hydratase substrate for wide spectrum, high thermal stability and its industrial application potential.

【技术实现步骤摘要】
一种耐热腈水合酶、工程菌及其在催化腈化合物水合反应生成酰胺中的应用
本专利技术涉及基因工程领域，尤其涉及一种耐热腈水合酶、工程菌及其在催化腈化合物水合反应生成酰胺中的应用。
技术介绍
腈是一类重要的前体化合物，经水合反应合成酰胺及其衍生物，在化学合成中处于及其重要的地位。传统氰基的水合反应需要强酸、强碱和高温等苛刻的反应条件，势必产生大量废液，对环境造成了严重的污染。与传统化学水解法比较，生物转化法具有条件温和、反应高效、环境友好，且能实现化学、区域和对映体选择性等优点。腈水合酶(Nitrilehydratase,EC4.2.1.84)催化腈类化合物(-CN)生成相应的酰胺(CONH2)，被应用于化学品的工业催化生产中，对传统化学合成工艺的绿色化学改造有着重要的意义。在自然界中，生产腈水合酶的微生物分布非常广泛，如红球菌、假单胞菌、诺卡氏菌、假诺卡氏菌、产碱杆菌、棒状杆菌等。其中，一些微生物已经用于丙烯酰胺、烟酰胺等化合物的工业化生产中，如专利号为US007405064B2的专利文献公开了一种野生睾丸酮丛毛单胞菌5-MGAM-4D；专利号ZL88106735的专利文献公开了一种野生玫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种耐热腈水合酶，其特征在于，包括：碱基序列如SEQ ID NO.4所示的编码α亚基的基因、碱基序列如SEQ ID NO.5所示的编码β亚基的基因以及碱基序列如SEQ ID NO.6所示的编码活性元件的基因。

【技术特征摘要】
1.一种耐热腈水合酶，其特征在于，包括：碱基序列如SEQIDNO.4所示的编码α亚基的基因、碱基序列如SEQIDNO.5所示的编码β亚基的基因以及碱基序列如SEQIDNO.6所示的编码活性元件的基因。2.如权利要求1所述的耐热腈水合酶，其特征在于，所述腈水合酶基因的碱基序列如SEQIDNO.7所示。3.一种编码如权利要求1或2所述腈水合酶的基因的表达盒、重组载体和转化子。4.一种工程菌，包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因，其特征在于，所述目的基因为如权利要求1或2所述的耐热腈水合酶基因。5.如权利要求4所述的工程菌在催化腈化合物水合反应生成酰胺中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨立荣，周海胜，吴坚平，徐刚，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33