一种新的多肽——人2-羟酸脱氢酶16和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人２－羟酸脱氢酶１６，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人２－羟酸脱氢酶１６的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--人2-羟酸脱氢酶16，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。真核类细菌及植物中有一系列NAD-依赖的对其底物的D-同分异构体显示特异性的2-羟酸脱氢酶，它们催化一些重要的代谢步骤，在功能及结构上相关，被归为一个家族，现已发现的种类如下所列1)D-乳酸脱氢酶，一种催化D-乳酸还原为丙酮酸的细菌酶类。2)D-甘油酸脱氢酶(NADH-依赖的羟基丙酮酸还原酶)，一种催化羟基丙酮酸还原为甘油酸特异的植物叶子过氧化物酶体的酶。该反应是光呼吸的乙醇酸途径中的一部分。3)细菌Hyphomicrobium methylovorum及Methylobacterium extorquens的D-甘油酸脱氢酶。4)3-磷酸甘油酸脱氢酶，一种催化D-3-甘油酸氧化成3-磷酸羟基丙酮酸的细菌酶类。该反应是丝氨酸生物合成的‘磷酸化’途径中的第一个关键步骤。5)Erythronate-4磷酸脱氢酶(基因pdxB)，一种参与吡哆醇(维生素B6)生物合成的细菌酶类。6)D-2-羟基异己醛(D-hicDH)，一种催化2-酮羧酸及D-2-羟基羧酸间可逆兼立体特异的互相转换的细菌酶类。7)甲酸脱氢酶(FDH)，来自细菌甲单胞杆菌sp-101以及不同的真菌。8)万古霉素抗性蛋白，来自肠道球菌faecium；该蛋白是一种参与形成不被D-丙氨酸终止的肽聚糖从而阻止万古霉素结合的D-特异性α-酮酸脱氢酶。9)大肠杆菌假拟蛋白ycdW。10)大肠杆菌假拟蛋白yiaE。11)流感嗜血杆菌假拟蛋白HI1556。12)酵母假拟蛋白YER081w。13)酵母假拟蛋白YIL074w。该家族成员有许多共同点都作用于羟酸D-同分异构体；NAD结合域较为相似，催化域作用特异性底物，因而各有不同；具有相同的NAD结合域结构，该结构为βαβ-折叠，序列为-----x-G---G-x(13,14)--x(2)--，十分保守，富含甘氨酸；结合的辅酶自脱辅基形式转换为完整形式，该家族成员都会发生构像改变，但具体情况各不相同；它们的催化效果一致，封闭底物裂缝及防止酶活性中心被溶解(从脱辅基到完整的构像转换)，集中活性位点以及定位与烟酰胺的催化C-4位置有关的功能氨基酸残基，催化域的转动致使通过多肽链的羧基端部分自大量溶剂中有效筛选NAD+，而封闭活性位点的第二个入口致使烟酰胺部分的C-4原子附近的重要催化残基被有效取代，所有NAD+依赖的脱氢酶催化的一个重要因素即增强辅酶烟酰胺部分的C4N亲电子性，这可通过与带负电配基相互作用且由于氨甲酰基团对吡啶平面扭曲而干扰其基态的NAD+氨甲酰基团足够的极化而得到，在NAD+依赖的脱氢酶中这样辅酶的氨甲酰基团位于平面之外十分普遍。综上所述该家族成员都具有相同的酶活性，且结构上具相关性。我们选择了最为保守区域中的三个区域以开发模板。其中第一个模扳即上面所说的与NAD结合域相关，位于中心部位的富含甘氨酸的区域。另外两个模板位于催化域，含有一些保守的带电残基，其中有的可能在催化机制中起作用，其序列分别为--x(2)-----x---x-P-x(4)--x(2)--x-与--x--x--(2)-N-x--R--x---，大肠杆菌D-乳酸脱氢酶(基因为dld)中不含有后一种序列，该酶是一种膜结合FDA黄素酶。前一种序列由组氨酸/羧化/精氨酸构成一个保守的催化域，紧靠该家族成员脱辅基酶的活性位点，并位于完整形式的烟酰胺环的附近。后一种序列中的天冬氨酸-组氨酸形成一个保守的催化对。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本专利技术的多肽的表达谱与人2-羟酸脱氢酶9的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人2-羟酸脱氢酶16。由于如上所述人2-羟酸脱氢酶16蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人2-羟酸脱氢酶16蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人2-羟酸脱氢酶16蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--人2-羟酸脱氢酶16以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人2-羟酸脱氢酶16的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人2-羟酸脱氢酶16的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人2-羟酸脱氢酶16的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--人2-羟酸脱氢酶16的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--人2-羟酸脱氢酶16的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人2-羟酸脱氢酶16异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中7-456位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1434位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人2-羟酸脱氢酶16蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人2-羟酸脱氢酶16蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人2-羟酸脱氢酶16表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人２－羟酸脱氢酶１６，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]