一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法制造技术

本发明专利技术公开了一种改良分枝杆菌荧光染色液，所述染色液由氧化液、初染液、脱色液和复染液组成；所述氧化液采用H2O2溶液或H5IO6溶液，所述初染液采用香豆素溶液。本发明专利技术经氧化液氧化后染色，保存时间长，染出的片子颜色鲜艳，对比度高，且无毒无害。

A modified Mycobacterium fluorescent stain and staining method

The invention discloses an improved Mycobacterium fluorescent staining solution, the staining solution by oxidation liquid, initial dye, decolorization liquid and complex dye composition; the oxidation solution by H2O2 solution or H5IO6 solution, the initial dye solution using coumarin. The invention is dyed after oxidation, which has long preserved time, bright color, high contrast and innocuous innocuity.

【技术实现步骤摘要】
一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法
本专利技术涉及医药
，具体涉及一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法。
技术介绍
结核分枝杆菌是结核病患者存在的一种病菌，查找抗酸染色阳性结核分枝杆菌仍然是诊断结核病有效和准确的重要方法之一。十九世纪八十年代Ziehi与Neelsen共同专利技术了分枝杆菌抗酸染色法，在以后的一百多年来国内来诸多学者对该方法进行了诸多改良，其中以荧光萋-尼氏抗酸染色法敏感性好，具有对比度好、敏感性好、阳性率高的优势，无疑是临床最佳的染色方法。但这种染色法存在严重的缺陷：1、染色液中金胺O的高毒性及强致癌性，限制了其推广；2、染色液中荧光极易衰减且不能保存涂片，染片后必须立即观察，否则造成假阴性结果或各临床单位结论不一致；3、这种染色液需要避光保存，见光及反复打开都极易导致染色液失效，不利于染色液商品化提供和临床染色方法标准化，故一直未能很好的推广。
技术实现思路
本专利技术针对上述技术问题，目的在于提供一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，经氧化液氧化后染色，保存时间长，染出的片子颜色鲜艳，对比度高，且无毒无害。本专利技术通过下述技术方案实现：一种改良分枝杆菌荧光染色液，所述染色液由氧化液、初染液、脱色液和复染液组成；所述氧化液采用H2O2溶液或H5IO6溶液，所述初染液采用香豆素溶液。优选地，所述H2O2溶液为：质量百分含量为3％～10％的H2O2水溶液。优选地，所述H5IO6溶液为质量百分含量为5％～20％的H5IO6水溶液。优选地，所述初染液的组成为：7-氨基-4甲基香豆素、乙醇、蒸馏水和渗透剂，所述渗透剂采用高分子量嵌段共聚物溶液。优选地，所述高分子量嵌段共聚物溶液包括DISPERBYK-2200或DISPERBYK-180。优选地，所述初染液组成配比为：7-氨基-4甲基香豆素2.0g～5.0g，乙醇200～400mL，蒸馏水600～800mL，DISPERBYK-2200或DISPERBYK-18020～100mL。优选地，所述脱色液采用3％～5％的盐酸乙醇溶液。优选地，所述复染液组成为：橙黄G3.0～6.0g、乙醇200～400mL、蒸馏水600～800mL、KOH0.05～0.20g。基于上述改良分枝杆菌荧光染色液的染色方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，涂片经火焰固定，切片脱蜡至水；步骤2，滴加氧化液盖满玻片，氧化后倾去氧化液；步骤3，滴加初染液盖满玻片，染色；步骤4，水洗并沥干水分；步骤5，滴加脱色液，轻轻摇动玻片，脱色，然后水洗；水洗后可见残余红色，再滴加脱色液，摇动玻片直至涂片无红色脱出或略呈粉红色为止，水洗；步骤6，滴加复染液，复染，水洗；干后镜检。优选地，所述步骤2中氧化时间为5～20min，所述步骤3中染色时间为5～15min。本专利技术与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：1、本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，先使用氧化液将抗酸杆菌细胞壁中的分枝菌酸的羧基氧化成醛基，然后7-氨基-4甲基香豆素在渗透剂的作用下能与醛基发生席夫碱反应，产生抗酸性的荧光基团，从而使香豆素与抗酸杆菌结合更加牢固，在激发光源激发下，产生强烈的蓝色荧光，并且不会破坏抗酸菌的蜡质屏障，复染不能上色。经氧化液氧化后，染出的片子不但颜色鲜艳，对比度高(抗酸菌为蓝色、非抗酸菌为橙黄色)，保存时间长，现有荧光染色液避光保存4小时左右，便会失效，而本专利技术提供的染色液可在避光条件下保持1周左右仍可用于检测；2、本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，7-氨基-4甲基香豆素无高毒性及致癌性，能够保证生产及使用的安全性；另外7-氨基-4甲基香豆素具有良好的化学稳定性，不易见光漂白；3、本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，现有苯酚具有毒性和很强的刺激性及挥发性，易通过呼吸道和皮肤被人体吸收，造成健康危害；本专利技术采用带有颜料亲和基团的高分子量嵌段共聚物溶液替代苯酚作为渗透剂，该渗透剂无毒、无味，并且是一种良好的湿润分散剂，能够增加碱性品红的溶解性和稳定性(抗絮凝、抗结晶析出)；4、本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，同时本专利技术渗透剂还是一种良好的表面活性剂，能显著减低表面张力，无需加热即可帮助碱性品红穿透抗酸菌细胞壁的蜡质屏障；5、本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，复染液采用橙黄G水溶液，非抗酸菌着色良好(橙黄色)，由于抗酸菌的蜡质屏障抗酸菌不能复染着色，与抗酸菌(在荧光显微镜下为蓝色)形成鲜明对比；现有技术中采用高锰酸钾溶液进行复染。6、本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，采用的H2O2溶液作为氧化液，H2O2溶液为常用药品，成本较低，配制简单，在本专利技术中具有较高的应用附加值；此外H2O2(过氧化氢)的相对于H5IO6(正高碘酸)的稳定性更好，不仅不会破坏抗酸菌的蜡质屏障，且使用较少量就可以达到良好的效果，产品更易商品化。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本专利技术作进一步的详细说明，本专利技术的示意性实施方式及其说明仅用于解释本专利技术，并不作为对本专利技术的限定。实施例1本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，按以下配比配制染色液：①氧化液：3％H2O2溶液②初染液：7-氨基-4甲基香豆素2.0g乙醇200mL蒸馏水800mLDISPERBYK-220020mL③脱色液：3％盐酸乙醇(95％)溶液④复染液：橙黄G3.0g乙醇200mL蒸馏水800mLKOH0.05g。实施例2本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，按以下配比配制染色液：①氧化液：5％H2O2溶液②初染液：7-氨基-4甲基香豆素3.0g乙醇250mL蒸馏水700mLDISPERBYK-220050mL③脱色液：3％盐酸乙醇(95％)溶液④复染液：橙黄G4.0g乙醇300mL蒸馏水700mLKOH0.10g。实施例3本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，按以下配比配制染色液：①氧化液：5％H2O2溶液②初染液：7-氨基-4甲基香豆素5.0g乙醇300mL蒸馏水650mLDISPERBYK-18050mL③脱色液：5％盐酸乙醇(95％)溶液④复染液：橙黄G5.0g乙醇300mL蒸馏水700mLKOH0.12g。实施例4本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，按以下配比配制染色液：①氧化液：8％H2O2溶液②初染液：7-氨基-4甲基香豆素5.0g乙醇300mL蒸馏水650mLDISPERBYK-220050mL③脱色液：5％盐酸乙醇(95％)溶液④复染液：橙黄G5.0g橙黄乙醇300mL蒸馏水700mLKOH0.12g。实施例5本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，按以下配比配制染色液：①氧化液：10％H2O2溶液②初染液：7-氨基-4甲基香豆素5.0g乙醇400mL蒸馏水600mLDISPERBYK-2200100mL③脱色液：5％盐酸乙醇(95％)溶液④复染液：橙黄G6.0g橙黄乙醇400mL蒸馏水600mLKOH0.20g。实施例6本专利技术一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，按以下配比配制染色液：①氧化液：10％H5IO6溶液②初染液：7-氨基-4甲基香豆素5.0g乙醇300mL蒸馏水650mLDISPERBYK-220050mL③脱色液：5％盐酸乙醇(95％)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改良分枝杆菌荧光染色液，其特征在于，所述染色液由氧化液、初染液、脱色液和复染液组成；所述氧化液采用H2O2溶液或H5IO6溶液，所述初染液采用香豆素溶液。

【技术特征摘要】
1.一种改良分枝杆菌荧光染色液，其特征在于，所述染色液由氧化液、初染液、脱色液和复染液组成；所述氧化液采用H2O2溶液或H5IO6溶液，所述初染液采用香豆素溶液。2.根据权利要求1所述的一种改良分枝杆菌荧光染色液，其特征在于，所述H2O2溶液为：质量百分含量为3％～10％的H2O2水溶液。3.根据权利要求1所述的一种改良分枝杆菌荧光染色液，其特征在于，所述H5IO6溶液为质量百分含量为5％～20％的H5IO6水溶液。4.根据权利要求1所述的一种改良分枝杆菌荧光染色液，其特征在于，所述初染液的组成为：7-氨基-4甲基香豆素、乙醇、蒸馏水和渗透剂，所述渗透剂采用高分子量嵌段共聚物溶液。5.根据权利要求4所述的一种改良分枝杆菌荧光染色液，其特征在于，所述高分子量嵌段共聚物溶液包括DISPERBYK-2200或DISPERBYK-180。6.根据权利要求5所述的一种改良分枝杆菌荧光染色液，其特征在于，所述初染液组成配比为：7-氨基-4甲基香豆素2.0g～5.0g，乙醇200～400mL，蒸馏水600～80...

【专利技术属性】
技术研发人员：张力，
申请(专利权)人：成都瑞琦科技实业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51