一种快速检测乙型肝炎病毒耐药基因变异的方法技术

技术编号:1755771 阅读:234 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术属生物技术领域,涉及一种检测乙型肝炎病毒拉米夫定耐药相关基因变异的方法。本发明专利技术利用实时荧光定量PCR  MGB  Taqman探针技术,依据乙肝病毒拉米夫定耐药突变区YMDD核酸序列,设计引物及探针检测HBV  YMDD区域的基因变异。采用PCR反应混合液A,B、Taq酶、HBV  DNA抽提试剂、阴性质控品、ddH↓[2]O优化改进后制备诊断试剂盒。能快速准确检测出特定位点基因突变情况,并能对混合突变的病毒基因比例进行相对定量,可用于临床乙型肝炎药物治疗耐药突变的快速检测。本发明专利技术方法和试剂盒不受医疗机构仪器设备的条件限制,易于普及。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种快速检测乙型肝炎病毒耐药基因变异的方法,其特征是利用实时荧光定量PCRMGBTaqman探针技术,依据乙型肝炎病毒拉米夫定耐药突变区YMDD核酸序列,设计引物及探针检测HBVYMDD区域的基因变异,包括下述步骤,a、 根据乙型肝炎病毒拉米夫定耐药性相关突变位点的靶基因序列设计、合成引物和荧光探针,所述的靶基因片段长度为50-200个碱基;b、上述引物和荧光探针与聚合酶链式反应成份组成荧光聚合酶链式反应体系,其中镁离子浓度为5mM,Taq酶的用量为 0.25单位/反应;c、采用Chelex100抽提乙型肝炎病毒DNA,加入上述反应体系循环扩增;d、读取荧光值,判定基因变异情况,估算混合突变病毒毒株比例。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员:袁正宏王华耿海峰华兵邵醇
申请(专利权)人:上海复旦悦达生物技术有限公司复旦大学
类型:发明
国别省市:31[中国|上海]

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