表皮生长因子受体(EGFR)基因测序检测方法技术

本发明专利技术涉及一种表皮生长因子受体基因检测分析方法，属于分子生物学技术社会应用领域。本发明专利技术设计的ＥＧＦＲ第１８、１９和２１外显子基因片段，可以逐个从碱基和氨基酸水平与观察分析中国人特有的该基因序列特征和突变特点，本发明专利技术人发现的第２１外显子Ｔ＞Ｇ突变和Ａ＞Ｔ及８５２位密码子始插入Ｇ突变是国内外均未见报道的新的杂合性突变，用于鉴定中国人靶向药物治疗，具有针对性。本发明专利技术提供了一种检测ＥＧＦＲ基因突变的检测方法，检测后再决定是否服药，可明显控制吉非替尼的不良副作用，减少不必要的经济负担，提示非小细胞肺癌分子靶向药物治疗的良好效果。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）基因测序检测方法，它包括下列步骤：（１）检测材料和对象各种途径获取的非小细胞癌的体细胞组织、肺癌的石蜡包埋组织的切片、肺癌晚期转移灶组织和血液中的癌细胞、肺癌胸水和穿刺细胞或痰细胞；（２） 使用试剂和仪器ＤＮＡ提取的试剂盒ＰＣＲ纯化试剂盒ＡＢＩ测序试剂盒仪器：ＤＮＡ定量仪电泳仪自动凝胶显像系统ＰＣＲ仪冷冻离心机基因测序仪基因分析软件（３）检测流程首先对检测 材料进行病理学技术制片，观察，出具病理诊断报告；备案，判断是否为非小细胞肺癌并病理分类，选定病灶区域后取材切片纳入基因测序检测；组织前处理及抽提ＤＮＡ，每批组设立肺癌周围组织对照；ＤＮＡ定量仪检测样本质量（２６０ｎｍ 吸光率大于０．０５，Ａ２６０／Ａ２８０比值１．６－１．８，３２０ｎｍ波长处吸光率接近零）；使用已设定的引物（ＥＧＦＲ外显子１８、１９和２１全长ＤＮＡ序列）进行ＰＣＲ扩增；凝胶自显影电泳观察分析ＰＣＲ效果；ＰＣＲ产物纯 化；ＰＣＲ产物进行测序反应；使用基因测序仪进行ＥＧＦＲ基因的测序和分析；如阴性结果时做双向测序检测；依据病理诊断，临床检查治疗情况和序列分析结果进行综合评估；完成ＥＧＦＲ病理基因测序报告；　（４）观察 指标依据美国国立医学图书馆（ｗｗｗ．ＮＣＢＩ．ＮＬＭ．ＮＩＨ．ＧＯＶ）提供的ＥＧＦＲＤＮＡ公开序列（ＮＭ－００５２２８）和ｍＲＮＡ的序列，确定ＥＧＦＲ第１８、１９和２１外显子全长片断；①ＥＧＦＲ第１８外显子片段长度为４３ ７ｂｐ，　主要观察核苷酸２１５５Ｇ＞Ａ突变，即氨基酸Ｇ７１９ｓ改变②ＥＧＦＲ第１９外显子片断长度为４１１ｂｐ，主要观察核苷酸２２３５－２２４９Ｄｅｌ，即氨基酸Ｅ７４６－Ａ７５０ｄｅｌ缺失现象核苷酸２２３６－２ ２５０Ｄｅｌ，即氨基酸Ｅ７４６－Ａ７５０ｄｅｌ缺失现象核苷酸２２５４－２２７７Ｄｅｌ，即氨基酸Ｓ７５２－Ｉ７５９ｄｅｌ缺失现象其它核苷酸片段缺失、插入、重复现象，如氨基酸Ｌ７４７－Ｔ７５１ｉｎｓＳ，Ｌ７４７－Ｐ７５３ｉｎｓＳ 和Ｌ７４７－Ａ７５０ｄｅｌ；③ＥＧＦＲ第２１外显子，片段长度为３９９ｂｐ，主要观察核苷酸２５７６Ｔ＞Ｇ，即氨基酸Ｌ８５８Ｒ现象...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赖仁胜，谢玲，申龙树，朱长乐，
申请(专利权)人：南京中医药大学附属医院江苏省中医院，赖仁胜，谢玲，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]