The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to a pretreatment method for lymphoma tissue paraffin sections for detection of fluorescence in situ hybridization, which includes the following steps: baking lymphoma paraffin section, and xylene, ethanol elution after immersion in deionized water; citrate buffer with a pressure cooker heating, and then 2 * SSC solution; soaking in pepsin liquid 20min, 2 x SSC solution after rinse and dehydration of ethanol; adding probe in situ hybridization instrument on modified hybrid, dropping DAPI, fluorescence microscopy results. Application of lymphoma paraffin pretreatment method of the invention, the orange red and green fluorescence signal is strong, and very clear, significantly improve the quality of FISH detection, and can shorten the time of subsequent pepsin digestion steps, shorten the detection time.
【技术实现步骤摘要】
淋巴瘤组织石蜡包埋切片荧光原位杂交检测的预处理方法
本专利技术属于生物
,特别涉及一种淋巴瘤组织石蜡包埋切片荧光原位杂交检测的预处理方法。
技术介绍
石蜡切片是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法,石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。而荧光原位杂交技术(fluorescenceinsituhybridization,FISH)是Pinkel等1986年建立的一个分子生物学和细胞遗传学相结合的新技术,FISH检测的原理是根据DNA碱基对的互补性,将标记了荧光的单链DNA探针与样本的DNA杂交后,通过荧光显微镜观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体及基因的情况,从而检测出细胞、组织样本中的染色体或基因异常。FISH技术具有操作简便、检测快速、易于观察、重复性好、敏感性和特异性高等特点,目前,该技术已广泛应用于遗传性疾病、产前诊断、肿瘤学,特别是淋巴瘤分型和诊断等领域。近年来,将石蜡切片技术与荧光原位杂交技术结合应用于生物技术中得到了很大发展,尤其是在检测淋巴瘤基因异常上,大大提高了淋巴瘤诊断的精确性。以石蜡包埋组织切片进行FISH检测时,石蜡切片的预处理是FISH检测技术的重要环节,为此,本专利技术人探索了一种淋巴瘤组织石蜡包埋切片荧光原位杂交检测的预处理方法。
技术实现思路
本专利技术中石蜡包埋切片预处理方法的淋巴瘤组织切片的桔红色和绿色荧光信号较强,且非常清晰,显著提高FISH检测的质量,并能缩短后续操作步骤中胃蛋白酶消 ...
【技术保护点】
一种淋巴瘤组织石蜡包埋切片荧光原位杂交检测的预处理方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:将淋巴瘤组织蜡块切片,切片厚度为1‑5μm,65℃烘烤3‑20h;然后依次经二甲苯、无水乙醇、85%的乙醇溶液、70%的乙醇溶液、去离子水浸泡洗脱,得到预处理切片,备用;S2:将S1中预处理切片放入高压锅中,倒入柠檬酸盐缓冲液完全浸没预处理切片,加热,高压锅气阀门喷气后持续5min,然后将高压锅外壁冲水冷却,取出切片置于pH为7.0的2×SSC溶液中浸泡3‑8min,得到高压处理切片;S3:将S2中高压处理切片浸泡在胃蛋白酶工作液中15‑25min,再用2×SSC溶液漂洗;然后将切片依次浸泡在浓度分别为70%、85%、100%的乙醇溶液中脱水,浸泡时间均为1‑5min;干燥备用,得到酶处理切片;S4:将探针混合物滴加于S3中的酶处理切片上,启动变性杂交程序,得到杂交处理切片;S5:避光S4中杂交处理切片,放入65℃的0.3%NP40/0.4×SSC溶液中1‑3min并振荡1‑3s,然后放入室温的0.1%NP40/2×SSC溶液中1min并振荡1‑3s,再将切片浸泡于70%乙醇中1‑5min,自然干燥 ...
【技术特征摘要】
1.一种淋巴瘤组织石蜡包埋切片荧光原位杂交检测的预处理方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:将淋巴瘤组织蜡块切片,切片厚度为1-5μm,65℃烘烤3-20h;然后依次经二甲苯、无水乙醇、85%的乙醇溶液、70%的乙醇溶液、去离子水浸泡洗脱,得到预处理切片,备用;S2:将S1中预处理切片放入高压锅中,倒入柠檬酸盐缓冲液完全浸没预处理切片,加热,高压锅气阀门喷气后持续5min,然后将高压锅外壁冲水冷却,取出切片置于pH为7.0的2×SSC溶液中浸泡3-8min,得到高压处理切片;S3:将S2中高压处理切片浸泡在胃蛋白酶工作液中15-25min,再用2×SSC溶液漂洗;然后将切片依次浸泡在浓度分别为70%、85%、100%的乙醇溶液中脱水,浸泡时间均为1-5min;干燥备用,得到酶处理切片;S4:将探针混合物滴加于S3中的酶处理切片上,启动变性杂交程序,得到杂交处理切片;S5:避光S4中杂交处理切片,放入65℃的0.3%NP40/0.4×SSC溶液中1-3min并振荡1-3s,然后放入室温的0.1%NP40/2×SSC溶液中1min并振荡1-3s,再将切片浸泡于70%乙醇中1-5min,自然干燥后滴加10-20μlDAPI荧光染料,避光放置...
【专利技术属性】
技术研发人员:张岚,姜国忠,陈奎生,李文才,高冬玲,
申请(专利权)人:郑州大学第一附属医院,
类型:发明
国别省市:河南,41
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