在升高的温度下减少蒸发的方法技术

一种方法，包括使组织或细胞样品与试剂接触，所述试剂包括具有通式X1‑R‑X2的蒸发减少剂，其中R是1个或更多个碳原子的烷基、烯基、炔基或芳族部分，可以被氧、氮或硫取代，并且X1和X2被独立选择为易受氢键影响的部分，以及加工组织或细胞样品。用于处理组织或细胞样品的试剂，其中试剂包括蒸发减少剂。

A method of reducing evaporation at elevated temperatures

A method, including the cell or tissue sample and reagent contact, the reagent includes having the formula X1 R X2 evaporation reducing agent, wherein R is 1 or more carbon atoms in the alkyl, alkenyl and alkynyl or aromatic moieties, oxygen, nitrogen or sulfur can be replaced, and X1 and X2 is independently selected as vulnerable to the influence of hydrogen bonding, and the processing of tissue or cell samples. A reagent used to deal with tissue or cell samples, in which the reagents include evaporation reducing agents.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在升高的温度下减少蒸发的方法相关申请的交叉引用该申请本是非临时申请，要求在2015年4月15日提交的共同未决的美国专利申请No.14/701,043的较早提交日期的优先权，并且通过引用并入本文。
分析试剂。背景基于原位杂交的免疫组织化学测定和测定技术广泛用于医学诊断，例如诊断异常细胞，例如在癌性肿瘤中发现的那些，或诊断另一种疾病。许多测定涉及向样品中加入热量，例如在载玻片上的试剂中的样品。在升高的温度下的测定步骤可导致测定试剂的大量蒸发。当使用小体积时，样品变性，杂交，洗涤和老化步骤以及所得测定可通过蒸发而被损害。专利技术详述公开了一种含水溶液中包括蒸发减少剂的试剂和使用所述试剂的方法，其可操作以减少组织或细胞样品处理中的试剂的蒸发。其中可以使用所述试剂的代表性处理包括，但是不限于，脱石蜡，细胞调节/抗原提取(antigenretrieval)/细胞老化，过氧化物/磷酸酶阻断，探针变性，探针杂交，洗涤，接头杂交，抗体孵育，探针检测，色原沉淀和复染剂，其涉及升高的温度的步骤(例如在原位杂交程序中的升高的温度步骤)。溶液可以代表性地用于核酸(单或双链探针)杂交测定的变性、洗涤或杂交步骤，或者用于孵育，抗原提取或洗涤步骤，其在免疫组织化学或免疫细胞化学染色中使用抗体。合适的试剂可以包括其它组分，如有助于在杂交溶液试剂中溶解扩散的洗涤剂/表面活性剂。在一个实施方案中，可用于组织或细胞处理的试剂中的蒸发减少剂的适当量是在工业可接受的试剂处理条件下将蒸发引起的试剂损失限制在20％或更少的量，所述试剂处理条件例如使杂交溶液经受25℃至50℃之间的升高温度，持续10分钟至24小时(例如，杂交或孵育过程)或经受60℃至100℃之间的升高温度，持续两至九十分钟(例如，变性或抗原提取过程)。在一个实施方案中，蒸发减少剂的合适量范围在试剂组合物(例如溶液)的11％到60％(以体积计)。在一个实施方案中，试剂(组合物)包括有效减少蒸发量的蒸发减少剂，其包括通式I：X1-R-X2,其中R是一个或多个碳原子的烷基、烯基、炔基或芳族部分(例如，在一个实施方案中一至六个碳原子，在另一个实施方案中一个至四个碳原子，其中应该理解的是，如果R是一个碳的部分，那么R是烷基)，其被氧原子，硫原子和/或原子或氮原子取代(例如，-OH，-SH或-NH2取代了定义为烷基、烯基、炔基或芳族的一种或多种烃的氢原子)或可被氧原子，硫原子和/或氮原子中断(例如，-C-O-C-，-C-SH-C-，-C-NH-C-)。烷基部分是含有用于连接X1和X2的可用的连接点的烷烃。烯基部分是含有用于连接X1和X2的可用的连接点的烯烃。炔基部分是含有用于连接X1和X2的可用的连接点的炔。代表性的烷基包括直链或支链烷基(例如，甲基，乙基，丙基，异丙基)，其可以被进一步取代或可以不被进一步取代。代表性的烯基包括直链或支链烯基(例如，乙烯基，丙烯基，异丙烯基)。代表性的炔基包括直链或支链的炔基，其可以被进一步取代或不可以被进一步取代(例如乙炔基，丙炔基，异丙炔基)。芳族部分是通过形成环的键的相互作用稳定的原子的不饱和环。芳族部分的实例是苄基。中断的芳族部分的实例是吡啶(用氮原子中断的)；呋喃(用氧原子中断的)；和噻吩(用硫原子中断的)。通式I中X1和X2独立地选择为一个部分，其中的一个或两个易受氢键合影响和/或包含电负性原子。X1和X2的代表部分包括能够形成氢键合的官能团、诸如但不限于羟基部分(-OH)；羰基部分(-CO)；胺部分(-NH2)；醛部分(-CHO)；卤素部分(-Y，其中Y是Cl-，F-，Br-或I-)；醚部分(-OR1，其中R1是烷基(例如，一到六个碳原子的烷基)，其可以被易于受氢键合影响或能够形成氢键合和/或包含电负性原子的部分取代)；羧基部分(-COOR2，其中R2是氢原子或烷基(例如一至六个碳原子的烷基)，其可以被易于受氢键合影响或能够形成氢键合和/或包含电负性原子的部分取代)；和酰胺部分(-CONR3R4，其中R3和R4独立地选自氢或烷基(例如，一到六个碳原子的烷基)，其可以被易于受氢键合影响或能够形成氢键合和/或包含电负性原子的部分取代)。针对X1和X2的所述烷基与醚、羧基和酰胺部分的易于受氢键合影响或能够形成氢键合的取代部分的代表(R1，R2，R3和R4)包括羟基，羰基，胺，醛，卤素，醚，羧基和酰胺部分。具有通式I的合适的蒸发减少剂的实例包括乙二醇，甘氨酸，丝氨酸，羟乙磺酸(异乙二磺酸)(isoethionicacid)，乙醇胺，聚乙二醇和1,3-丙二醇。在一个实施方案中，R未被取代或中断。其中R未被取代或中断的蒸发减少剂的代表是乙二醇(HO(CH2)2OH)，其中R是乙基，并且X1和X2的每个是羟基部分。其中X2是进一步被易于受氢键合影响或能够形成氢键合的部分取代的伯酰胺的蒸发减少剂例子是H2N-(CH2)3-NH(CH2)2COOH，其中R是-(CH2)3-；X1为-NH2且X2为-NH(CH2)2COOH。在一个实施方案中，合适的试剂包括具有通式I的一种或多种蒸发减少剂(例如，试剂包括两种或三种具有通式I的结构式的蒸发减少剂的组合)。蒸发减少剂可以是在一个分子游离形式(分子)或其可接受的盐(化合物)或离子液体。盐的例子是分子的氢卤酸盐，如盐酸盐。在一个实施方案中，蒸发减少剂作为溶质减少在其与一种或多种其它试剂混合时溶液的蒸气压。这样的溶质可能是分子，离子盐，离子液体，非离子剂，其可显示出与水的完全的或部分的溶解度或混溶性、并且能够减少其被混合入或以其他方式引入的含水溶液的分压。此外，蒸发减少剂可以或不可以与水形成共沸混合物。如果蒸发减少剂与水形成共沸混合物，在一个实施方案中，溶质与水形成下降性共沸物混合物(负效共沸物)。一般来说，当溶剂和溶质在此上下文中被混合时，溶剂的所得化学势被降低，使得溶剂分子的分压降低，相对于仅溶剂的溶液，具有降低的转换为气相的倾向。典型地，含水溶液(其中溶质是非挥发性的蒸发减少剂)中水的分压将减少，这将导致混合物的沸点升高，以及在表面蒸发的减少。当在分子中的氢原子被连接到电负性原子(如氧，氮或氟原子)时可以发生氢键合，并且分子接近带有正电的原子。这种静电吸引的性质具有5-30kJ/mol数量级的强度，其比范德华引力更强，但比共价或离子键合弱。在一个实施方案中，蒸发减少剂作为溶质通过以下与水混合来降低水的蒸气压：创建溶液，其中的水的分压降低，使得测定(例如，免疫组织测定法)可以比如果分压不降低的情况更有效地进行。在一个实施方案中，溶质被选择为使得没有留下残余物或留下最少残余物，所述残余物可以干扰本领域技术人员公知的测定。在一个实施方案中，可操作用于处理的细胞或组织样品的试剂通过组合基础试剂(碱试剂)和蒸发减少剂来制备。附加成分也可在合适的组合物中被组合。所述试剂可以被添加到含水缓冲溶液以减少升高的温度期间的蒸发。在一个实施方案中，被组合的蒸发减少剂的量将由于蒸发导致的该组合的任何损失限制至20％或更少，在另一个实施方案中，被组合的蒸发减少剂的量将由于蒸发导致的该组合的任何损失限制至10％或更少。代表性地，蒸发减少剂或蒸发减少剂的组合在组合物中存在的量为11％至60％(以体积计)的量，或减少剂的1％至60％的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种方法，包括：使组织或细胞样品接触至少一种具有以下通式的蒸发减少剂：X1‑R‑X2,其中R是可被氧、硫或氮原子取代或中断的烷基部分，烯基部分，炔基部分或芳族部分，且X1和X2独立地被选择为包含电负性原子或易受氢键合影响的部分，并且其中当所述至少一种试剂是非含有二醇的试剂或多于一种试剂的组合时所述至少一种试剂以1％或更多的量存在，或当所述至少一种试剂是含有二醇的试剂时所述至少一种试剂以以体积计的11％或更多的量存在；和处理组织或细胞样品。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种方法，包括：使组织或细胞样品接触至少一种具有以下通式的蒸发减少剂：X1-R-X2,其中R是可被氧、硫或氮原子取代或中断的烷基部分，烯基部分，炔基部分或芳族部分，且X1和X2独立地被选择为包含电负性原子或易受氢键合影响的部分，并且其中当所述至少一种试剂是非含有二醇的试剂或多于一种试剂的组合时所述至少一种试剂以1％或更多的量存在，或当所述至少一种试剂是含有二醇的试剂时所述至少一种试剂以以体积计的11％或更多的量存在；和处理组织或细胞样品。2.权利要求1的方法，其中所述蒸发减少剂以高达以体积计的60体积％的量存在。3.权利要求1的方法，其中所述处理包括升高的温度。4.权利要求1的方法，其中所述处理包括杂交。5.权利要求1的方法，其中所述处理包括去杂交。6.权利要求1的方法，其中所述处理包括洗涤步骤。7.权利要求1的方法，其中所述处理包括抗原结合。8.权利要求1的方法，其中所述处理包括抗原提取，细胞调节或细胞老化。9.权利要求1的方法，其中X1和X2独立地被选择，使得X1和X2的至少一个含有选自由以下组成的组的一种或多种：羟基部分，羰基部分，胺部分，醛部分，卤素部分，醚部分，羧基部分和酰胺的基团。10.权利要求9的方法，其中X1和X2独立地被选择为包括选自由以下组成的组的至少一种部分：-OH，-CHO，-OR1，-NH2，-COOR2和-CONH2，其中R1是烷基并且R2为氢原子或烷基。11.权利要求1的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·T·亚曼妮施，C·霍姆，A·D·沙哈，
申请(专利权)人：包埋剂技术美国股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US