一种细胞标本石蜡包埋的改良技术制造技术

本发明专利技术提供一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，其特点是：制作方法包括将细胞标本经沉淀、固定、离心处理后，提取细胞标本进行常规固定、脱水、透明、浸蜡处理，石蜡包埋、切片、染色及封片。本发明专利技术的优势是操作便捷、无污染，标本处理及染色过程可与常规病理标本同时进行，不但能做常规检查，还能做免疫组化及特殊染色，实用效果良好，非常适合在各大医院推广使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于临床病理诊断、科研领域中对细胞学检测方法，具体为一种细胞标本石蜡包埋的改良技术。
技术介绍
脱落细胞学检查是肿瘤诊断有效手段之一，普通涂片制作过程中吸取的少量胸腹水不能代表整个胸腹水的状况，且制作完毕之后剩余的胸腹水往往被遗弃，而细胞蜡块可以收集送检胸腹水中的绝大部分细胞，以便观察大部分细胞的形态，且细胞蜡块易于保存，大大提高了细胞病理学诊断的敏感性和特异性，弥补了常规细胞涂片制作有限而不够作多种染色的不足之处，可进行进一步研究和前瞻性研究。但细胞蜡块制作中前固定往往用10%中性福尔马林固定，固定时间长，细胞蜡块中细胞分散，不易成块，细胞丢失明显；且味道大，易对操作者身体造成严重损害。如何提供一种细胞标本石蜡包埋的方法，不仅可以提高阳性结果的准确率，而且缩短制作时间，减少对操作者身体的损害，并可应用免疫组化行鉴别诊断。这是本专利技术面临的技术问题。
技术实现思路
本专利技术为解决上述问题，提供一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，不仅操作便捷，无污染，标本处理及染色过程可与常规病理标本同时进行，还提高了阳性结果的准确率，并可应用免疫组化及特殊染色行鉴别诊断。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，其特征在于，将沉淀细胞和95%乙醇吹匀，使沉淀细胞固定更加充分，固定时间大大减少，缩短了细胞蜡块的制作时间，提高了工作效率；收集到的细胞数量增多，增加了肿瘤细胞的阳性检出率；沉淀细胞静置固定呈块状，制片时不易飞片且切片视野集中，HE染色清晰，免疫组化染色定位准确；且乙醇无污染，对操作者身体无害。以上述技术方案的一种改良：所述的细胞标本为胸腹水、纤支镜灌洗液、尿液、胸腹腔冲洗液标本、淋巴结、乳腺及甲状腺穿刺等标本的细胞蜡块，所述提取细胞标本的具体步骤如下：（1）沉淀细胞标本：送检的积液标本量越多越好，一般在10～500ml之间，将标本在阴凉处静置5min（2）离心细胞标本：轻轻倒去一半左右液体，若多于100ml应再次静置5min弃去一半，所余50ml左右的自然沉淀标本，分别置于5个容量为10ml离心管中，室温下3000转/min离心5～10min，吸干上清，用吸管吸取沉淀物上层细胞涂片（3）固定细胞标本：将5个离心管的余液吸取到同一个10ml离心管中，室温下3000转/min离心5min后再次吸干上清，试管余液轻轻沿管壁加入95%乙醇，用吸管将沉淀细胞与乙醇吹匀，3000转/min，离心5min，室温下静置30min（4）提取细胞标本：弃上清，用竹签轻轻将沉淀细胞取出，用包埋纸包好，放入脱水盒。1、所述的常规固定、脱水、透明、浸蜡处理步骤为：（1）35℃10%中性福尔马林固定1h（2）水洗20～30min（3）35℃80%乙醇2h（4）35℃95%乙醇2h（5）35℃95%乙醇2h（6）35℃无水乙醇2h（7）35℃无水乙醇2h（8）二甲苯45min（9）二甲苯45min（10）62℃石蜡30min（11）62℃石蜡60min（12）62℃石蜡90min。2、所述的石蜡包埋步骤：将包埋纸中的细胞块取出，放入盛有液体石蜡的包埋盒中，将成团的细胞打散后均匀的平铺在底部，待冷却后制成细胞蜡块，可得到细胞数量的最大面。3、所述的细胞蜡块切片步骤：将上述经石蜡包埋的细胞蜡块在切片机上切成3微米的薄片，温度为65℃条件下，烤片时间为10min。4、所述的染色包括HE染色和免疫组化染色：所述HE染色步骤如下：（1）取出烤干的切片，立即投入二甲苯Ⅰ(10min)→二甲苯Ⅱ(10min)→二甲苯Ⅲ(10min)，脱蜡时间长短取决于蜡是否彻底溶解。气温低可延长时间，气温高可适当缩短时间（2）无水乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2min（3）95%乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2min（4）80%酒精，约2min（5）水洗（6）苏木素浸染，约8～15min（7）1%盐酸乙醇分化2秒（8）水洗（9）自来水蓝化，约5min（10）伊红浸染数秒（11）80%乙醇中，约2min（12）95%乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2～5min（13）无水乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2～5min（14）二甲苯Ⅰ→Ⅱ中透明，约2min（15）封片：中性树胶，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。对于部分需要进一步诊断的细胞蜡块，进行免疫组化染色，所述免疫组化染色步骤如下：（1）石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤2h（2）脱蜡和水化：二甲苯Ⅰ(10min)→二甲苯Ⅱ(10min)→二甲苯Ⅲ(10min)→无水乙醇(5min×2次)→95%乙醇(5min×2)→80%乙醇(5min)（3）蒸馏水冲洗1次5min（4）PBS洗2次各5min（5）抗原修复：压力锅开始喷气时，盖上气阀约1.5~2min，冷却，取下气阀，冷却至室温（6）蒸馏水洗1次5min，PBS洗2次各5min（7）加3%H2O2孵育10min(室温)（8）PBS洗3次各5min（9）滴加一抗，37℃孵育2～3h，或4℃过夜（10）PBS冲洗3次各5min（11）滴加二抗，室温下孵育20min（12）PBS洗3次各5min（13）DAB显色5～20min，自来水充分冲洗（14）苏木素复染2～3min，自来水充分冲洗（15）1%盐酸乙醇分化2s，自来水充分冲洗（16）80%(2min)→95%(5min×2次)→100%(5min×2次)→二甲苯Ⅰ(2min)→二甲苯Ⅱ(2min)（17）封片：中性树胶，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。本专利技术与现有技术相比的优点是：用95%乙醇取代10%中性福尔马林作为前固定液，对于操作者而言，味道小，对身体无害；对于细胞标本而言，将95%乙醇和沉淀细胞吹匀，使沉淀细胞固定更加充分，固定时间大大减少，缩短了细胞蜡块的制作时间，标本处理及染色过程可与常规病理标本同时进行，提高了工作效率；收集到的细胞量增多，增加了肿瘤细胞的阳性检出率；沉淀物静置固定呈块状，制片时不易飞片且切片视野集中，HE染色清晰，免疫组化染色定位准确。本方法操作简单、成本低、制片效果良好，适用于各类体液标本的制作，有较好的临床实用价值，值得推广。具体实施方式：下面结合具体事例对本专利技术进行进一步的阐述：本专利技术是一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，其特点是：制作方法包括将细胞标本经沉淀、固定、离心处理后，提取细胞标本进行常规固定、脱水、透明、浸蜡处理，石蜡包埋、组织切片、染色。实施例1：本专利技术细胞标本为胸腹水、纤支镜灌洗液、尿液、胸腹腔冲洗液标本、淋巴结、乳腺及甲状腺穿刺等标本的细胞蜡块，所述提取细胞标本的具体步骤如下：（1）沉淀细胞标本：送检的积液标本量越多越好，一般在10～500ml之间，将标本在阴凉处静置5min（2）离心细胞标本：轻轻倒去一半左右液体，若多于100ml应再次静置5min弃去一半，所余50ml左右的自然沉淀标本，分别置于5个容量为10ml离心管中，室温下3000转/min离心5～10min，吸干上清，用吸管吸取沉淀物上层细胞涂片（3）固定细胞标本：将5个离心管的余液吸取到同一个10ml离心管中，室温下3000转/min离心5min后再次吸干上清，试管余液轻轻沿管壁加入95%乙醇，用吸管将沉淀细胞与乙醇吹匀，3000转/min，离心5min，室温下静置30min（4）提取细胞标本本文档来自技高网...

【技术保护点】
本专利技术提供一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，其特点是：制作方法包括将细胞标本经沉淀、固定、离心处理后，提取细胞标本进行常规固定、脱水、透明、浸蜡处理，石蜡包埋、切片、染色及封片。

【技术特征摘要】
1.本发明提供一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，其特点是：制作方法包括将细胞标本经沉淀、固定...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴菡，
申请(专利权)人：吴菡，
类型：发明
国别省市：江苏;32