草鱼抗疲劳活性肽的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种草鱼抗疲劳活性肽的用途，用于保健品、食品、化妆品或药品中的用途。草鱼抗疲劳活性肽的制备方法，包括浸泡去腥、分步酶解、等电点沉淀、纳滤、凝胶层析和高效液相色谱纯化。制备得到的草鱼抗疲劳活性肽可促进红细胞复原，提高红细胞携氧能力，并且在肌肉组织中氧化脱氨，一方面生成相应的α‑酮酸进入三羧酸循环氧化供能，另一方面脱下来的氨基与丙酮酸或谷氨酸偶联，形成丙氨酸和谷氨酸酰胺，提供能量。有助于内环境的稳定，全面调节器官的功能，并使代谢过程顺利进行，有利于机体工作能力的提高。

Use grass carp anti fatigue active peptide

The present invention provides the use of a grass carp anti fatigue activity peptide, for use in health care products, food, cosmetics or drugs in. Preparation method of grass carp anti fatigue activity of peptides, including soaking fishy, enzymatic, isoelectric point precipitation, nanofiltration, gel chromatography and high performance liquid chromatography purification. The prepared grass carp anti fatigue active peptide can promote the restoration of red blood cells, improve the oxygen carrying capacity of red blood cells, and oxidative deamination in muscle tissue, on the one hand to generate the corresponding alpha into the three keto acid cycle oxidation for energy, on the other hand off amino glutamic acid and pyruvate or alanine formation coupling. Glutamic acid and amide, provide energy. It helps the stability of the internal environment, regulates the function of the organs, and makes the metabolic process proceed smoothly, which is beneficial to the improvement of the working ability of the body.

【技术实现步骤摘要】
草鱼抗疲劳活性肽的用途
本专利技术属于生物
，具体是一种草鱼抗疲劳活性肽的用途。
技术介绍
现代营养学研究发现，肽具有比游离氨基酸吸收快、吸收率好、生物效价高等特点，是具有多种生理功能的活性物质。其中，抗疲劳肽具有明显提高人体工作能力，增强肌肉含量和力量，维持或提高机体的运动能力，并且快速消除疲劳，迅速恢复和增强体力等功效，有助于在运动环境下维持人体健康。因此，抗疲劳肽成为从事体力、脑力、体育运动等人群的一种重要的功能性食品基料。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于保健品、食品、化妆品或药品中的用途的草鱼抗疲劳活性肽。上述草鱼抗疲劳活性肽有助于内环境的稳定，全面调节器官的功能，并使代谢过程顺利进行，有利于机体工作能力的提高，其制备方法简单、成本低廉，生产周期短。本专利技术针对
技术介绍
中提到的问题，采取的技术方案为：草鱼抗疲劳活性肽的用途，用于保健品、食品、化妆品或药品中的用途。草鱼抗疲劳活性肽的制备方法，包括以下步骤：1）浸泡去腥：将草鱼鱼肉用清水洗净，浸泡于去腥液中1~4h，沥干；2）分步酶解：在草鱼鱼肉中加入蒸馏水匀浆，草鱼鱼肉与蒸馏水的质量体积比为1g：5~15ml。将匀浆液置于25~40℃的恒温环境中，加入胰蛋白酶酶解，酶解结束后灭酶，加入枯草芽孢杆菌中性蛋白酶和活性短肽酶解，酶解结束后灭酶，过滤取滤液；3）等电点沉淀：调节滤液pH为5.5~6.5，静置后离心取沉淀；4）纳滤：在沉淀中加蒸馏水溶解后置于蒸馏水中浓缩纳滤24~36h；5）凝胶层析：用蒸馏水将SephadexG-15凝胶溶胀后装柱，检查柱均匀性后上样，用自动取样器收集洗脱液，在280nm下测紫外吸光度，做曲线；重复上样，根据吸光度曲线收集分离的溶液；上样溶液为纳滤浓缩液用蒸馏水稀释10~20倍得到；6）高效液相色谱纯化：高效液相色谱分离纯化条件为：色谱柱：1.7μmBEHC18色谱柱；流动相：0~5min，水；5~16min，60~70%水，30~40%乙腈；16~30min，40~60%水，40~60%乙腈；30~40min，乙腈；流速：0.7~1.3ml/min，柱温25~35℃，检测波长为254nm和280nm，收集主要色谱峰，冻干得到草鱼抗疲劳活性肽。上述草鱼抗疲劳活性肽可促进红细胞复原，提高红细胞携氧能力，并且在肌肉组织中氧化脱氨，一方面生成相应的α-酮酸进入三羧酸循环氧化供能，另一方面脱下来的氨基与丙酮酸或谷氨酸偶联，形成丙氨酸和谷氨酸酰胺，提供能量。有助于内环境的稳定，全面调节器官的功能，并使代谢过程顺利进行，有利于机体工作能力的提高。去腥液成分及其重量份为：5~10份柠檬酸、10~18份紫苏提取物、0.1~0.3份氯化钠、0.5~0.8份碳酸氢钠、20~30份乙醇和0.2~0.4份维生素E。草鱼身上的腥味物质特征成分是三甲胺，上述去腥液既能与三甲胺反应形成季铵盐，又能溶解三甲胺，去腥效果十分明显。胰蛋白酶的加入量为匀浆液质量的0.2~0.7%，酶解pH为7.5~9.0，酶解温度为25~40℃，酶解时间为2~4h。枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的加入量为匀浆液质量的0.1~0.5%，活性短肽的加入量为枯草芽孢杆菌中性蛋白酶质量的1~5%，酶解pH为7.0~7.8，酶解温度为35~50℃，酶解时间为10~30min。采用胰蛋白酶和枯草芽孢杆菌中性蛋白酶分步酶解，将匀浆液中大草鱼鱼肉蛋白酶解成分子量较小的活性物质。胰蛋白酶和枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的酶解条件不同，采用分步酶解的方式使得两种蛋白酶的酶解效率均处于较高状态。活性肽的生物活性取决于肽链的氨基酸序列和长度及其空间结构，这意味着不同蛋白酶水解得到的活性肽的生物功能不同。单一的蛋白酶对蛋白质的酶切位点少，得到的多肽量少，多种蛋白酶同时酶解蛋白质得到的多肽量大，但容易破坏多肽活性，使之失去生物活性，上述分步酶解操作可最大程度酶解得到草鱼抗疲劳活性肽。活性短肽的氨基酸序列为：HSHCVCSGTTHYVLHCVNCSR。上述活性短肽对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶有激活作用，即在活性短肽存在条件下，枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的酶解效率明显提高，降低了枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的加入量并缩短了酶解时间。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：1.本专利技术制备的草鱼抗疲劳活性肽可促进红细胞复原，提高红细胞携氧能力，并且在肌肉组织中氧化脱氨，一方面生成相应的α-酮酸进入三羧酸循环氧化供能，另一方面脱下来的氨基与丙酮酸或谷氨酸偶联，形成丙氨酸和谷氨酸酰胺，提供能量。有助于内环境的稳定，全面调节器官的功能，并使代谢过程顺利进行，有利于机体工作能力的提高，用于保健品、食品、化妆品或药品中的用途；2.采用胰蛋白酶和枯草芽孢杆菌中性蛋白酶分步酶解，并且枯草芽孢杆菌中性蛋白酶酶解时加入氨基酸序列为HSHCVCSGTTHYVLHCVNCSR的活性短肽。上述活性短肽对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶有激活作用，即在活性短肽存在条件下，枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的酶解效率明显提高，降低了枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的加入量并缩短了酶解时间。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术方案作进一步说明：实施例1：草鱼抗疲劳活性肽的用途，用于保健品、食品、化妆品或药品中的用途。草鱼抗疲劳活性肽的制备方法，包括以下步骤：1）浸泡去腥：将草鱼鱼肉用清水洗净，浸泡于去腥液中1~4h，沥干；2）分步酶解：在草鱼鱼肉中加入蒸馏水匀浆，草鱼鱼肉与蒸馏水的质量体积比为1g：5~15ml。将匀浆液置于25~40℃的恒温环境中，加入胰蛋白酶酶解，酶解结束后灭酶，加入枯草芽孢杆菌中性蛋白酶和活性短肽酶解，酶解结束后灭酶，过滤取滤液；3）等电点沉淀：调节滤液pH为5.5~6.5，静置后离心取沉淀；4）纳滤：在沉淀中加蒸馏水溶解后置于蒸馏水中浓缩纳滤24~36h；5）凝胶层析：用蒸馏水将SephadexG-15凝胶溶胀后装柱，检查柱均匀性后上样，用自动取样器收集洗脱液，在280nm下测紫外吸光度，做曲线；重复上样，根据吸光度曲线收集分离的溶液；上样溶液为纳滤浓缩液用蒸馏水稀释10~20倍得到；6）高效液相色谱纯化：高效液相色谱分离纯化条件为：色谱柱：1.7μmBEHC18色谱柱；流动相：0~5min，水；5~16min，60~70%水，30~40%乙腈；16~30min，40~60%水，40~60%乙腈；30~40min，乙腈；流速：0.7~1.3ml/min，柱温25~35℃，检测波长为254nm和280nm，收集主要色谱峰，冻干得到草鱼抗疲劳活性肽。上述草鱼抗疲劳活性肽可促进红细胞复原，提高红细胞携氧能力，并且在肌肉组织中氧化脱氨，一方面生成相应的α-酮酸进入三羧酸循环氧化供能，另一方面脱下来的氨基与丙酮酸或谷氨酸偶联，形成丙氨酸和谷氨酸酰胺，提供能量。有助于内环境的稳定，全面调节器官的功能，并使代谢过程顺利进行，有利于机体工作能力的提高。去腥液成分及其重量份为：5~10份柠檬酸、10~18份紫苏提取物、0.1~0.3份氯化钠、0.5~0.8份碳酸氢钠、20~30份乙醇和0.2~0.4份维生素E。草鱼身上的腥味物质特征成分是三甲胺，上述去腥液既能与三甲胺反应形成季铵盐，又能溶解三甲胺，去腥效果十分明显。胰蛋白酶的加入量为匀浆液质量的0.2~0.7%，酶解pH为7.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于用于保健品、食品、化妆品或药品中的用途。

【技术特征摘要】
1.草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于用于保健品、食品、化妆品或药品中的用途。2.根据权利要求1所述的草鱼抗疲劳活性肽的用途，其特征在于：所述的活性肽的制备方法包括以下步骤：1）浸泡去腥：将草鱼鱼肉用清水洗净，浸泡于去腥液中1~4h，沥干；2）分步酶解：在草鱼鱼肉中加入蒸馏水匀浆，将匀浆液置于25~40℃的恒温环境中，加入胰蛋白酶酶解，酶解结束后灭酶，加入枯草芽孢杆菌中性蛋白酶和活性短肽酶解，酶解结束后灭酶，过滤取滤液；3）等电点沉淀：调节滤液pH为目标蛋白的等电点，静置后离心取沉淀；4）纳滤：在沉淀中加蒸馏水溶解后置于蒸馏水中浓缩纳滤24~36h；5）凝胶层析：用蒸馏水将SephadexG-15凝胶溶胀后装柱，检查柱均匀性后上样，用自动取样器收集洗脱液，在280nm下测紫外吸光度，做曲线；重复上样，根据吸光度曲线收集分离的溶液；上样溶液为纳滤浓缩液用蒸馏水稀释10~20倍得到；6）高效液相色谱纯化：高效液相色谱分离纯化条件为：色谱柱：1.7μmBEHC18色谱柱；流动相：0~5min，水；5~16min，60~70%水，30~40%乙腈；16~30min，40~60%水，40~60%乙腈；30~40min，乙腈；流速：0.7~1.3ml/min，柱温25~35℃，检测波长...

【专利技术属性】
技术研发人员：李冰，
申请(专利权)人：浦江县欧立生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33