一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法及应用，属于医药技术领域。本发明专利技术将蒸制后的人参属植物原料用溶剂回流提取，提取液经大孔吸附树脂柱层析得到含人参皂苷Rg5和Rk1的总皂苷，将总皂苷、经蒸制的人参总皂苷、三七总皂苷或经蒸制的人参皂苷Rb1经大孔吸附树脂柱层析得到人参皂苷Rg5和Rk1总含量大于97%的分组皂苷，分组皂苷再经大孔吸附树脂柱反复柱层析得到纯度大于90%的单体人参皂苷Rg5和单体人参皂苷Rk1。本发明专利技术提取的总皂苷、分组皂苷以及单体人参皂苷Rg5和单体人参皂苷Rk1在三氯化铝诱导老年痴呆症斑马鱼模型中可显著的改善斑马鱼运动能力和反应能力。

Extraction method and application of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1

The invention relates to an extraction method and application of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1, which belongs to the field of medical technology. In the invention, after steaming Panax plant material by solvent extraction, extract by macroporous resin column chromatography obtained with total saponins of ginsenoside Rg5 and Rk1, the total saponins, total saponins, ginseng total saponin 37 steamed or steamed by ginsenoside Rb1 by macroporous adsorption the resin column chromatography to get the packet of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1 total saponin content is greater than 97%, the packet by macroporous resin column chromatography repeatedly obtained ginsenoside Rg5 greater than 90% purity and ginsenoside Rk1. The method of extracting total saponins, grouping saponins and ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1 induced dementia model in zebrafish zebrafish can markedly improve the movement ability and reaction ability in aluminum chloride.

【技术实现步骤摘要】
一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法及应用
本专利技术涉及一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法及应用，属于医药

技术介绍
三七与人参、西洋参等人参属植物含有类似的化学成分，包括皂苷、黄酮、聚炔醇、多糖等，达玛烷型四环三萜皂苷为人参属药用植物的主要生理活性成分之一。迄今，已发现三七总皂苷及其一些单体化合物在心血管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎、抗肿瘤等方面具有较好的药理活性，尤其是在神经系统方面的活性报道得越来越多。如三七总皂苷及单体皂苷Rb1、Rg1能显著增强小鼠的学习和记忆能力；三七总皂苷具有镇静、镇痛作用，它是一种阿片肽样受体激动剂，且没有成瘾性。人参总皂苷能够显著改善患有阿尔茨海默病小鼠的学习和记忆能力，其疗效相当于石杉碱A；人参皂苷Rg5具有很强的神经干细胞激活作用，可以诱导表皮生长因子反应神经干细胞定向分化成神经元细胞，并能够激活电压门控的钙离子通道，增加神经干细胞内的钙离子浓度。人参皂苷Rg5可用于研究神经细胞生成过程中的细胞信号转导途径，也可能开发成治疗神经系统疾病的新药。但是，人参皂苷Rg5是人参属植物中的微量成分，已报道的从人参属植物中分离出人参皂苷Rg5的得率仅有0.0027%，这极大地限制了人参皂苷Rg5开发利用。人参皂苷Rk1也是人参属植物中的微量成分，前期研究表明人参皂苷Rk1具有抑制端粒酶诱导细胞凋亡和阻断血管渗漏等生物活性。但是，没有人参皂苷Rk1对神经系统影响的报道。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法，能大幅度增加人参属植物中人参皂苷Rg5和Rk1的含量并能够得到分组皂苷和单体皂苷。一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法，具体步骤如下：（1）将人参属植物原料进行蒸制处理，然后用溶剂回流提取得到提取液，其中溶剂为乙醇、甲醇或水；（2）将步骤（1）所得提取液中的溶剂挥发得到提取物，将提取物溶解在溶剂B中得到B溶液，过滤除杂，再经大孔吸附树脂柱层析，用水洗脱至无糖分流出，再用洗脱有机溶剂C洗脱至无皂苷流出得到含人参皂苷Rg5和Rk1的总皂苷，其中溶剂B为水、含水甲醇、含水乙醇或含水丙酮；（3）将人参总皂苷、三七总皂苷或人参皂苷Rb1进行蒸制处理；（4）将步骤（2）所得总皂苷或步骤（3）所得蒸制产物溶解在有机溶剂D中得到总皂苷有机溶液，总皂苷有机溶液经大孔吸附树脂柱层析，用含水洗脱有机溶剂E洗脱，再用含水洗脱有机溶剂F洗脱至无皂苷流出得到人参皂苷Rg5和Rk1总含量大于97%的分组皂苷，其中有机溶剂D为乙醇或甲醇；（5）纯化提取：将步骤（4）所得分组皂苷溶解在有机溶剂H中得到分组皂苷有机溶液，其中有机溶剂H为乙醇、甲醇，分组皂苷有机溶液经大孔吸附树脂柱层析，用含水洗脱有机溶剂I洗脱，再分别用浓度为70~71%的含水洗脱有机溶剂J、71~72%的含水洗脱有机溶剂K、72~73%的含水洗脱有机溶剂L、73~74%的含水洗脱有机溶剂M、74~76%的含水洗脱有机溶剂N进行梯度洗脱至无皂苷流出，分别得到含人参皂苷Rg5和Rk1的流分，分别合并含人参皂苷Rg5和Rk1的流分得到人参皂苷Rg5流分和人参皂苷Rk1流分；（6）将步骤（5）所得人参皂苷Rg5流分和人参皂苷Rk1流分分别重复进行步骤（4）的纯化提取过程得到含量大于90%的单体人参皂苷Rg5和含量大于90%的单体人参皂苷Rk1。所述洗脱有机溶剂为乙醇、甲醇或丙酮；所述步骤（1）中人参属植物原料与溶剂的固液比kg:L为1:(8~10)，回流提取的次数为3~5次，每次回流提取的时间为2~4h；所述步骤（2）中提取物与大孔吸附树脂的质量比为1:(1.5~2.0)，大孔吸附树脂柱层析时B溶液的上样流速为0.5~1BV/h，水洗脱时水的流速为2~3BV/h、流量为2~3BV，洗脱有机溶剂C洗脱时洗脱有机溶剂C的流速为1~2BV/h；所述步骤（4）中总皂苷或蒸制产物与大孔吸附树脂的质量比为1:(5~10)，含水洗脱有机溶剂E中有机溶剂E的质量百分数含量为65~70%，含水洗脱有机溶剂F中有机溶剂F的质量百分数含量为70~75%，含水洗脱有机溶剂E洗脱时含水洗脱有机溶剂E的流速为1~3BV/h、流量为2~3BV，含水洗脱有机溶剂F洗脱时含水洗脱有机溶剂F的流速为1~3BV/h；所述步骤（5）中分组皂苷与大孔吸附树脂的质量比为1:(5~10)，含水洗脱有机溶剂I中有机溶剂I的质量百分数含量为70~75%，含水洗脱有机溶剂I洗脱时含水洗脱有机溶剂I的流速为2~3BV/h、流量为2~3BV，梯度洗脱时含水洗脱有机溶剂J、含水洗脱有机溶剂K、含水洗脱有机溶剂L、含水洗脱有机溶剂M、含水洗脱有机溶剂N的流速均为1~3BV/h。所述人参属植物原料为茎叶，步骤（2）大孔吸附树脂柱层析前还包括除水溶液中叶绿素的处理过程；所述蒸制方法可以为：将人参属植物原料、人参总皂苷、三七总皂苷或人参皂苷Rb1置于120~135℃的高压锅中蒸制12~15小时；或者将人参属植物原料、人参总皂苷、三七总皂苷或人参皂苷Rb1置于105~110℃的反应釜中蒸制10~12小时；或者将人参属植物原料、人参总皂苷、三七总皂苷或人参皂苷Rb1置于120~135℃的烤箱蒸制12~15小时；或者将人参属植物原料、人参总皂苷、三七总皂苷或人参皂苷Rb1置于120~135℃的灭菌锅中蒸制12~15小时；或者将人参属植物原料、人参总皂苷、三七总皂苷或人参皂苷Rb1置于100~125℃的蒸锅中蒸制18~24小时；将人参属植物原料、人参总皂苷、三七总皂苷或人参皂苷Rb1加水润湿，然后用纱布包扎进行蒸制处理，人参属植物经过蒸制，人参皂苷Rg5和Rk1的含量均可达到4%以上，人参总皂苷、三七总皂苷经过蒸制，人参皂苷Rg5和Rk1的含量均可达到15%以上；人参皂苷Rb1经过蒸制，人参皂苷Rg5和Rk1的含量可达到50%以上；本专利技术的另一目的是提供所述人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法所提取的含人参皂苷Rg5和Rk1的总皂苷、人参皂苷Rg5和Rk1总含量大于97%的分组皂苷或单体人参皂苷Rg5和单体人参皂苷Rk1在改善神经退行性病变的应用。本专利技术的有益效果：（1）本专利技术方法能快速显著增加微量皂苷在植物中的含量；（2）本专利技术方法安全环保快速高效；（3）本专利技术制备得到的药物组合能有效改善或缓解老年痴呆症导致的症状，可用于老年痴呆症等神经退行性疾病的治疗。附图说明图1为单体皂苷人参皂苷Rb1、Rg5和Rk1的结构图；图2为实施例1提取的总皂苷的HPLC分析结果图；图3为实施例1提取的分组皂苷的HPLC分析结果图；图4为实施例3人参皂苷Rb1裂解皂苷的HPLC分析结果图；图5为实施例1提取的单体皂苷人参皂苷Rg5的HPLC分析结果图；图6为实施例1提取的单体皂苷人参皂苷Rk1的HPLC分析结果图；图7为实施例1提取的人参皂苷Rk1在60min内对AD斑马鱼运动速度的影响图，其中#7为人参皂苷Rk1，DPZ为阳性对照组（多奈哌齐）；图8为实施例1提取的总皂苷、分组皂苷单体皂苷人参皂苷Rg5和Rk1对斑马鱼运动速度恢复治疗效率图；图9为实施例1提取的总皂苷、分组皂苷、单体皂苷人参皂苷Rg5和Rk1对斑马鱼速度差值恢复的治疗效本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）将人参属植物原料进行蒸制处理，然后用溶剂回流提取得到提取液，其中溶剂为乙醇、甲醇或水；（2）将步骤（1）所得提取液中的溶剂挥发得到提取物，将提取物溶解在溶剂B中得到B溶液，过滤除杂，再经大孔吸附树脂柱层析，用水洗脱至无糖分流出，再用洗脱有机溶剂C洗脱至无皂苷流出得到含人参皂苷Rg5和Rk1的总皂苷，其中溶剂B为水、含水甲醇、含水乙醇或含水丙酮；（3）将人参总皂苷、三七总皂苷或人参皂苷Rb1进行蒸制处理；（4）将步骤（2）所得总皂苷或步骤（3）所得蒸制产物溶解在有机溶剂D中得到总皂苷有机溶液，总皂苷有机溶液经大孔吸附树脂柱层析，用含水洗脱有机溶剂E洗脱，再用含水洗脱有机溶剂F洗脱至无皂苷流出得到人参皂苷Rg5和Rk1总含量大于97%的分组皂苷，其中有机溶剂D为乙醇或甲醇；（5）纯化提取：将步骤（4）所得分组皂苷溶解在有机溶剂H中得到分组皂苷有机溶液，其中有机溶剂H为乙醇、甲醇，分组皂苷有机溶液经大孔吸附树脂柱层析，用含水洗脱有机溶剂I洗脱，再分别用浓度为70~71%的含水洗脱有机溶剂J、71~72%的含水洗脱有机溶剂K、72~73%的含水洗脱有机溶剂L、73~74% 的含水洗脱有机溶剂M、74~76%的含水洗脱有机溶剂N进行梯度洗脱至无皂苷流出，分别得到含人参皂苷Rg5和Rk1的流分，分别合并含人参皂苷Rg5和Rk1的流分得到人参皂苷Rg5流分和人参皂苷Rk1流分；（6）将步骤（5）所得人参皂苷Rg5流分和人参皂苷Rk1流分分别重复进行步骤（4）的纯化提取过程得到含量大于90%的单体人参皂苷Rg5和含量大于90%的单体人参皂苷Rk1。...

【技术特征摘要】
1.一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）将人参属植物原料进行蒸制处理，然后用溶剂回流提取得到提取液，其中溶剂为乙醇、甲醇或水；（2）将步骤（1）所得提取液中的溶剂挥发得到提取物，将提取物溶解在溶剂B中得到B溶液，过滤除杂，再经大孔吸附树脂柱层析，用水洗脱至无糖分流出，再用洗脱有机溶剂C洗脱至无皂苷流出得到含人参皂苷Rg5和Rk1的总皂苷，其中溶剂B为水、含水甲醇、含水乙醇或含水丙酮；（3）将人参总皂苷、三七总皂苷或人参皂苷Rb1进行蒸制处理；（4）将步骤（2）所得总皂苷或步骤（3）所得蒸制产物溶解在有机溶剂D中得到总皂苷有机溶液，总皂苷有机溶液经大孔吸附树脂柱层析，用含水洗脱有机溶剂E洗脱，再用含水洗脱有机溶剂F洗脱至无皂苷流出得到人参皂苷Rg5和Rk1总含量大于97%的分组皂苷，其中有机溶剂D为乙醇或甲醇；（5）纯化提取：将步骤（4）所得分组皂苷溶解在有机溶剂H中得到分组皂苷有机溶液，其中有机溶剂H为乙醇、甲醇，分组皂苷有机溶液经大孔吸附树脂柱层析，用含水洗脱有机溶剂I洗脱，再分别用浓度为70~71%的含水洗脱有机溶剂J、71~72%的含水洗脱有机溶剂K、72~73%的含水洗脱有机溶剂L、73~74%的含水洗脱有机溶剂M、74~76%的含水洗脱有机溶剂N进行梯度洗脱至无皂苷流出，分别得到含人参皂苷Rg5和Rk1的流分，分别合并含人参皂苷Rg5和Rk1的流分得到人参皂苷Rg5流分和人参皂苷Rk1流分；（6）将步骤（5）所得人参皂苷Rg5流分和人参皂苷Rk1流分分别重复进行步骤（4）的纯化提取过程得到含量大于90%的单体人参皂苷Rg5和含量大于90%的单体人参皂苷Rk1。2.根据权利要求1所述人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法，其特征在于：洗脱有机溶剂为乙醇、甲醇或丙酮。3.根据权利要求1所述人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法，其特征在于：步骤（1）中人参...

【专利技术属性】
技术研发人员：许敏，吴涛，韩佳欣，杨崇仁，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：云南,53