一种从三七中提取三七皂苷的方法技术

本发明专利技术涉及一种从三七中提取三七皂苷的方法。本发明专利技术是将新鲜三七根晒干成三七饮片，然后用破壁机进行一次破壁，用高压纯化空气切割粉碎机进行二次破壁，破壁后的三七粉用醋酸钠溶液和无水乙醇提取三七皂苷和去除杂质，得到的三七皂苷粗提取液再经过制备型高效液相色谱仪进行精制，最后经过真空冷冻干燥得到三七皂苷粉末。本发明专利技术采用先将三七的细胞进行破壁再提取三七皂苷的工艺，细胞破壁率最高达99.8%，三七皂苷提取率最高达95%以上，低温破壁和温和提取方法，能有效避免三七皂苷的化学结构发生变化，保证三七皂苷良好的药物活性。

A method for extracting 37 saponins from 37

【技术实现步骤摘要】
一种从三七中提取三七皂苷的方法
本专利技术天然产物提取
，尤其是涉及一种从三七中提取三七皂苷的方法。
技术介绍
三七，为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根和根茎，又名田七、人参三七、参三七、文州三七。其性甘、微苦，温；归肝、胃经；有散瘀止血，消肿定痛的功效；主治咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。《本草纲目》记载：止血散血定痛，金刃箭伤、跌扑杖疮、血出不止者，嚼烂涂，或为末掺之，其血即止。亦主吐血衄血，下血血痢，崩中经水不止，产后恶血不下，血运血痛，赤目痈肿，虎咬蛇伤诸病。三七皂苷（Notoginsengtriterpenes）是一种固醇类化合物，三萜皂苷，是三七中的活性药效成分。三七皂苷都具有相似的基本结构，都含有由30个碳原子排列成四个环的甾烷类固醇核。它们依糖苷基架构的不同而被分为两组：达玛烷型和齐墩果烷型。达玛烷类型包括两类：人参二醇型-A型，苷原为20（S）-原人参二醇，包含了最多的人参皂苷，如人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg3、Rh2及糖苷基PD；人参三醇型-B型，苷原为20（S）-原人参三醇，包含了人参皂苷Re、Rg1、Rg2、Rh1及糖苷基PT。齐墩果烷型为齐墩果酸型-C型，苷原为齐墩果酸。各种不同类型的三七皂苷都具有重要的药理作用：Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用，对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复；Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用；Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制血小板凝集作用；Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病；Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用；Rg5：抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长；Rb1：具影响动物睾丸的潜力，亦会影响小鼠的胚胎发育，具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆力作用；Rb2：DNA,RNA的合成促进作用、脑中枢调节具有抑制中枢神经，降低细胞内钙，抗氧化，清除体内自由基和改善心肌缺血再灌注损伤等作用；Rc：是一种固醇类分子。具有抑制癌细胞的功能，可增加精虫的活动力；Rb3：可增强心肌功能，保护人体自身免疫系统。可以用于治疗各种不同原因引起的心肌收缩性衰竭；Rh：具有抑制中枢神经、催眠作用，镇痛、安神、解热、促进血清蛋白质合成作用；Rh1：具有促进肝细胞增殖和促进DNA合成的作用，可用于治疗和预防肝炎、肝硬化；Ro：具有消炎、解毒、抗血栓作用，抑制酸系血小板凝结以及抗肝炎作用活化巨噬细胞作用；Rh3：对人结肠癌细胞SW480增殖与凋亡产生影响。目前从三七中提取三七皂苷主要采用有机溶剂蒸馏法，如中国专利201310572043.2（申请号）公开了一种从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，第一步：将新鲜三七根洗净、切片、晒干、粉碎成三七粉；第二步：将第一步得到的三七粉置于圆底烧瓶或回流提取装置中，用有机溶剂加热回流提取至少一次，合并提取液；第三步：将第二步得到的提取液旋转蒸发回收溶剂，得到三七提取物；第四步：将第三步得到的三七提取物用有机溶剂溶解，以层析用硅胶拌样，待有机溶剂挥发干净后，干法上硅胶柱，经二氯甲烷和甲醇梯度洗脱，薄层层析色谱检测洗脱进程，收集含有人参皂苷Rgl的洗脱部分，回收溶剂后，得到含有Rgl的粗品；第五步：将得到的含有Rgl的粗品，用醋酸乙酯溶解，冷却到5℃-10℃时，析出晶体，过滤，得到Rgl纯品；第二步中的有机溶剂为甲醇，三七粉和有机溶剂的体积比为1:2-3，每次加热回流的时间为1-3小时，加热回流提取的次数为4-5次，第四步中使用到二氯甲烷、三氯甲烷、醋酸乙酯、硫酸乙醇和甲醇等有机溶剂，第五步中需要用到乙腈，因此，本专利技术需要高温长时间蒸馏，操作繁琐，并且使用了较多的有毒有机溶剂，容易影响产品安全。中国专利201510153204.3（申请号）公开了一种具有抗肿瘤活性的三七皂苷化合物及其制备方法与应用，包括以下步骤：(1)取干燥的三七叶，加三七药材重量6～15倍体积量的浓度为70～80％的乙醇回流提取2～3次，每次2～3h，提取液合并，减压浓缩，得浸膏；(2)将浸膏加适量水稀释，混匀成混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇萃取，合并正丁醇萃取液，减压回收溶剂至干得正丁醇萃取物；(3)将步骤(2)所得正丁醇萃取物分散于水中，上大孔树脂柱分离，依次用体积浓度为25％乙醇，50％乙醇，75％乙醇和95％乙醇梯度洗脱，减压回收溶剂，得到各洗脱部位；(4)取体积浓度为95％乙醇洗脱部位，进行硅胶柱层析，依次用体积比为8:3，7:3，6:3，5:3的氯仿-甲醇进行梯度洗脱，分别收集得到洗脱部位Fr1-30、Fr31-36、Fr37-70、Fr71-100，回收溶剂；(5)取步骤(4)中Fr31-36洗脱部位，上SephadexLH20和ODS反相柱分离纯化，得到三七皂苷化合物。同样的，该方法需要高温蒸馏和使用较多的有毒有机溶剂。因此，开发一种先将三七细胞破壁然后提取三七皂苷的方法，使用较温和的提取条件和无毒提取溶剂，不仅有利于提高三七皂苷的生产效率，而且可以保证三七皂苷作为天然提取物的安全性。
技术实现思路
本专利技术目的是克服现有技术中需要高温蒸馏和使用较多的有毒有机溶剂提取三七皂苷的不足，提供一种从三七中提取三七皂苷的方法。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种从三七中提取三七皂苷的方法，包括以下步骤：（1）将新鲜三七根洗净、切片，晒干至含水量为10%~15%，得到三七饮片；此含水量有利于提高破壁机的破壁效率；（2）将三七饮片放入-196℃的液氮中冷冻1~5min，迅速取出放入破壁机，以30000~50000rpm的转速进行破壁处理1~3min，得到一次破壁的三七粉；此条件下破壁机的一次破壁效率最高，达45~53%；（3）将一次破壁的三七粉调节含水量至3%~8%，冷冻至-60~-80℃，用高压纯化空气切割粉碎机进行二次破壁，空气压力为50~200mPa，空气流速为500~700m/s，进料速度为6~10g/s，进料周期为2-5s，进料压力为0.2~0.3mPa，得到二次破壁的三七粉；此条件下二次破壁效率最高，达96.6~99.8%；（4）将二次破壁的三七粉、2-5mol/L的醋酸钠溶液和无水乙醇按照1:3~5:6~15的质量比混合，在30-45℃下搅拌15~45min，然后于0~4℃下静置30~60min，然后0~4℃下10000~15000rpm离心10~30min，取上层清液，得到三七皂苷粗提取液；此条件下三七皂苷的提取效率最高，蛋白质和核酸的除杂效果最好；（5）以制备型高效液相色谱仪对三七皂苷粗提取液进行精制，色谱柱为C18反相硅胶色谱柱，填料粒径为5μm，内径为7.8mm，长度为300~350mm，洗脱条件为：0~10min为100本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从三七中提取三七皂苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将新鲜三七根洗净、切片，晒干至含水量为10%~15%，得到三七饮片；（2）将三七饮片放入‑196℃的液氮中冷冻1~5 min，迅速取出放入破壁机，以30000~50000 rpm的转速进行破壁处理1~3 min，得到一次破壁的三七粉；（3）将一次破壁的三七粉调节含水量至3%~8%，冷冻至‑60~‑80℃，用高压纯化空气切割粉碎机进行二次破壁，空气压力为50~200 mPa，空气流速为500~700 m/s，进料速度为6~10 g/s，进料周期为2‑5 s，进料压力为0.2~0.3 mPa，得到二次破壁的三七粉；（4）将二次破壁的三七粉、2‑5 mol/L的醋酸钠溶液和无水乙醇按照1:3~5:6~15的质量比混合，在30‑45℃下搅拌15~45 min，然后于0~4℃下静置30~60 min，然后0~4℃下10000~15000 rpm离心10~30 min，取上层清液，得到三七皂苷粗提取液；（5）以制备型高效液相色谱仪对三七皂苷粗提取液进行精制，色谱柱为C18反相硅胶色谱柱，填料粒径为5 μm，内径为7.8 mm，长度为300~350 mm，洗脱条件为：0~10 min为100%双蒸水，10‑20 min为体积比10%~20%：80%~90%的无水乙醇和双蒸水，20‑30 min为体积比30%~40%：60%~70%的无水乙醇和双蒸水，30‑40 min为体积比50%~60%：40%~50%的无水乙醇和双蒸水，40‑50 min为体积比70%~80%：20%~30%的无水乙醇和双蒸水，50‑60 min为100%的无水乙醇，洗脱液流速为0.6~1 mL/min，将含有三七皂苷的洗脱成分回收，得到精制的三七皂苷洗脱液；（6）将精制的三七皂苷洗脱液在‑10~‑30℃、‑0.08~‑0.1 MPa条件下进行真空冷冻干燥，得到三七皂苷粉末。...

【技术特征摘要】
1.一种从三七中提取三七皂苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将新鲜三七根洗净、切片，晒干至含水量为10%~15%，得到三七饮片；（2）将三七饮片放入-196℃的液氮中冷冻1~5min，迅速取出放入破壁机，以30000~50000rpm的转速进行破壁处理1~3min，得到一次破壁的三七粉；（3）将一次破壁的三七粉调节含水量至3%~8%，冷冻至-60~-80℃，用高压纯化空气切割粉碎机进行二次破壁，空气压力为50~200mPa，空气流速为500~700m/s，进料速度为6~10g/s，进料周期为2-5s，进料压力为0.2~0.3mPa，得到二次破壁的三七粉；（4）将二次破壁的三七粉、2-5mol/L的醋酸钠溶液和无水乙醇按照1:3~5:6~15的质量比混合，在30-45℃下搅拌15~45min，然后于0~4℃下静置30~60min，然后0~4℃下10000~15000rpm离心10~30min，取上层清液，得到三七皂苷粗提取液；（5）以制备型高效液相色谱仪对三七皂苷粗提取液进行精制，色谱柱为C18反相硅胶色谱柱，填料粒径为5μm，内径为7.8mm，长度为300~350mm，洗脱条件为：0~10min为100%双蒸水，10-20min为体积比10%~20%：80%~90%的无水乙醇和双蒸水，20-30min为体积比30%~40%：60%~70%的无水乙醇和双蒸水，30-40min为体积比50%~60%：40%~50%的无水乙醇和双蒸水，40-50min为体积比70%~80%：20%~30%的无水乙醇和双蒸水，50-60min为100%的无水乙醇，洗脱液流速为0.6~1mL/min，将含有三七皂苷的洗脱成分回收，得到精制的三七皂苷洗脱液；（6）将精制的三七皂苷洗脱液在-10~-30℃、-0.08~-0.1MPa条件下进行真空冷冻...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱念，
申请(专利权)人：钦州学院，
类型：发明
国别省市：广西,45