一种超低变性温度的聚合酶链式反应方法及其应用技术

一种超低变性温度的聚合酶链式反应方法，依次包括如下步骤：　　　　（１）模板变性；　　　　（２）引物退火；　　　　（３）ＤＮＡ聚合酶催化下延伸合成互补ＤＮＡ链；　　　　（４）按步骤（１）－（３）循环进行扩增反应；　　　　其特征在于，模板变性温度在前２或３个循环为９３－９８℃，在后续的循环中为６０－８７℃。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学技术，特别是涉及一种聚合酶链式反应的方法及其应用。
技术介绍
聚合酶链式反应是一种高效的扩增特定DNA的方法，在生物医学的各个领域特别是临床诊断上有广泛的应用。聚合酶链式反应主要由25-35个温度呈周期变化的循环组成，每一个循环包括变性，退火和延伸三个步骤。其中，变性步骤目的是将原始模板或扩增产物的DNA双链解开使之成为二条单链，然后二条单链能在退火温度下与正、反引物分别互补结合，继而延伸完成一个循环。变性步骤可以看作是每一轮循环的起始步骤，是整个扩增过程中不可或缺的一环。PCR反应的专一性和效率主要取决于退火和延伸步骤，对变性过程的研究远不及对退火和延伸的研究那样广泛深入。有关PCR的各种技术指南均指出变性温度范围通常为94-95℃，已发表的十余万篇应用PCR方法的论文中绝大多数应用这一温度，极少数使用较高的变性温度如96℃或较低的变性温度如90-94℃，文献报导的最低变性温度为87℃。历来将变性温度界定为94-95℃有其道理，一方面这一温度接近DNA聚合酶能承受的极限，充分发挥了酶的耐热特性；另一方面在该温度下几乎所有的原始模板和不同长度的扩增产物均能被本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐定邦，朱德芬，林先贵，徐文慧，
申请(专利权)人：徐定邦，徐文慧，
类型：发明
国别省市：