一种多肽－人EDF－1内皮细胞分化因子14.73和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－－人ＥＤＦ－１内皮细胞分化因子１４．７３，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如血管发育紊乱症、血管瘤、各种肿瘤、炎症、免疫性疾病等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的ＥＤＦ－１内皮细胞分化因子１４．７３的多核苷酸的用途。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——EDF-1内皮细胞分化因子14.73，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。
技术介绍
皮细胞分化是血管发生的一个重要的步骤，其在组织受伤修复及肿瘤生长等过程中均起着十分重要的作用，可促进新血管的生成及损伤组织的修复。血管生成是一个非常复杂的过程，其涉及内皮细胞的转移、增殖及分化以形成管状结构。血管生成因子即在此过程中参与调控生物体内血管组织的形成及发育。研究发现除血管生成因子外，生物体内还存在着内皮细胞分化因子等蛋白，亦在此过程中调控着血管的形成。人们已从不同的生物体内克隆得到了多种不同的蛋白，分别在血管的形成过程调控着血管的形成。1998年，Ilaria等人又从人中克隆得到了一新的内皮细胞分化因子---EDF-1。该蛋白在生物体内作为一种下游调控因子，调控着体内血管的发育、生长。研究发现，该蛋白与已知的MBF1蛋白有较高的同源性，其在生物体内主要起着抑制内皮细胞分化及生长的作用，与体内的血管生成因子协同作用，以调控体内血管组织的正常分化与生长。通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本专利技术的多肽的表达谱与内皮细胞分化因子EDF-1蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为EDF-1内皮细胞分化因子14.73。由于如上所述EDF-1内皮细胞分化因子14.73蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的EDF-1内皮细胞分化因子14.73蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新EDF-1内皮细胞分化因子14.73蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人EDF-1内皮细胞分化因子14.73以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人EDF-1内皮细胞分化因子14.73的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人EDF-1内皮细胞分化因子14.73的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人EDF-1内皮细胞分化因子14.73的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人EDF-1内皮细胞分化因子14.73的抗体。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有<210>2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有<210>2氨基酸序列的多肽。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人EDF-1内皮细胞分化因子14.73蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本专利技术提供了一种多肽——人EDF-1内皮细胞分化因子14.73，其基本上是由<210>2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括人EDF-1内皮细胞分化因子14.73的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的人EDF-1内皮细胞分化因子14.73相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(I)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选的是保守氨基酸残基)取代，并且取代的氨基酸可以是也可以不是由遗传密码子编码的；或者(II)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基上的某个基团被其它基团取代包含取代基；或者(III)这样一种，其中成熟多肽与另一种化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合；或者(IV)这样一种，其中附加的氨基酸序列融合进成熟多肽而形成的多肽序列(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)通过本文的阐述，这样的片段、衍生物和类似物被认为在本领域技术人员的知识范围之内。本专利技术提供了分离的核酸(多核苷酸)，基本由编码具有<210>2氨基酸序列的多肽的多核苷酸组成。本专利技术的多核苷酸序列包括<210>1的核苷酸序列。本专利技术的多核苷酸是从人胎脑组织的cDNA文库中发现的。本专利技术的多核苷酸可以是DNA形式或是RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。编码成熟多肽的编码区序列可以与<210>1所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本专利技术所用，“简并的变异体”在本专利技术中是指编码具有<210>2的蛋白质或多肽，但与<210>1所示的编码区序列有差别的核酸序列。编码<210>2的成熟多肽的多核苷酸包括只有成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。术语“编码多肽的多核苷酸”是指包括编码此多肽的多核苷酸和包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。本专利技术还涉及上述描述多核苷酸的变异体，其编码与本专利技术有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片断、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。本专利技术还涉及与以上所描述的序列杂交的多核苷酸(两个序列之间具有至少50％，优选具有70％的相同性)。本专利技术特别涉及在严格条件下与本专利技术所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本专利技术中，“严格条件”是指(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加用变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人ＥＤＦ－１内皮细胞分化因子１４．７３，其特征在于它包含有：〈２１０〉２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]